TCDD诱发昆明小鼠腭突畸形过程中对Jagged2蛋白表达的影响

目的:检测四氯二苯并二恶英(TCDD)诱发昆明小鼠腭裂畸形过程中对Jagged2蛋白表达的影响。方法:将30只昆明孕鼠随机分为实验组和对照组,实验组GD12天孕鼠一次性灌服40μg/kg TCDD,对照组灌服等剂量花生油,分别于GD13、GD14、GD15剖腹取胎鼠头部标本,作冠状位组织切片。采用免疫组化方法检测胚胎腭中Jagged2蛋白表达。结果:Jagged2主要表达于胚胎腭突上皮组织;GD14、GD15时,对照组中Jagged2蛋白表达显著下降(P<0.05),但实验组未出现明显表达变化。结论:Jagged2在胚胎腭突上皮的异常表达可能参与了TCDD诱发小鼠腭裂畸形发生。

微核糖核酸-124靶向Jagged2对低氧性肺动脉高压新生大鼠血管重塑的影响

目的探究微核糖核酸-124(简称miR-124)对低氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠血管重塑的影响,及其与Jagged2的靶向关系。方法将48只Wistar新生大鼠随机分为常氧组、低氧组、miR-124组和miR-124阴性对照(NC)组,每组12只。miR-124组和miR-124 NC组大鼠分别给予相应的miR-124激动剂或miR-124 NC行尾静脉注射。除常氧组正常饲养外,将其余3组大鼠置于氧气体积分数为0.1的常压低氧舱中28 d,制备HPH大鼠模型。使用压力信号采集系统记录平均肺动脉压(mPAP);计算右心室肥大指数[RV/(LV+S)];采用H-E染色检测肺组织病理学变化,并计算肺血管内壁厚度与外径的比值(MT%)、内膜横截面积与总动脉横截面积的比值(MA%);检测血清NO、内皮素(ET)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的水平;实时荧光定量PCR检测大鼠肺组织miR-124、Jagged2 mRNA水平;免疫印迹实验检测大鼠肺组织Jagged2、split多毛增强子1(Hes-1)蛋白质水平;双荧光素酶实验验证miR-124与Jagged2的靶向关系。结果与常氧组相比,低氧组和miR-124 NC组大鼠的mPAP和右心室肥大指数、MT%和MA%、ET和AngⅡ水平均显著升高(P值均<0.05),NO水平显著降低(P<0.05)。与低氧组和miR-124 NC组相比,miR-124组大鼠的mPAP和右心室肥大指数、MT%和MA%、ET和AngⅡ水平均显著降低(P值均<0.05),NO水平显著升高(P<0.05)。肺组织H-E染色结果显示,低氧组和miR-124 NC组大鼠肺动脉壁明显增厚,管腔变窄,细胞排列紊乱,呈现肺动脉重塑特征。与miR-124 NC组相比,miR-124组大鼠的肺动脉壁增厚程度明显减轻,管腔狭窄不明显。与常氧组相比,低氧组和miR-124 NC组大鼠肺组织的miR-124水平显著降低(P值均<0.05),Jagged2 mRNA、Jagged2和Hes-1蛋白质水平均显著升高(P值均<0.05)。与低氧组和miR-124 NC组相比,miR-124组大鼠的miR-124水平显著升高(P值均<0.05),Jagged2 mRNA、Jagged2和Hes-1蛋白质水平均显著降低(P值均<0.05)。双荧光素酶实验结果证实,miR-124与Jagged2存在靶向结合位点。结论miR-124可能通过靶向下调Jagged2表达改善HPH诱导的肺血管重塑。

重组人Jagged2胞外区蛋白的真核表达与免疫原性鉴定

本研究目的在于使用哺乳动物真核表达系统获得具有高免疫原性重组人Jagged2胞外区C2-EGF2区段(aa27~309),为后续抗Jagged2抗体相关研究奠定基础。首先,合成JAG2胞外区基因并插入pcDNA3.1(+)质粒构建哺乳细胞真核表达载体。使用阳离子脂质体转染试剂瞬时转染HEK293F细胞,收集培养上清,使用镍离子亲和层析柱梯度洗脱纯化,纯化后蛋白样品经过12%胶浓度SDS-PAGE电泳,免疫Balb/c小鼠并利用间接ELISA法测试小鼠抗血清效价。结果显示,150 mmol/L咪唑浓度下洗脱出的Jagged2蛋白在相对分子质量35000左右出现单一电泳条带,ImageJ分析纯度达90%以上。3次免疫后小鼠产生的抗血清效价最高可达10^(6)以上。此结果表明真核表达得到的Jagged2胞外区蛋白具有较高的纯度和免疫原性,可以作为免疫原蛋白支持后续的抗体筛选。