EGCG通过降低Notch1和Jagged1表达抑制鼻咽癌干细胞SP18的增殖

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)抑制鼻咽癌干细胞SP18增殖的机制。方法采用MTT法检测EGCG抑制SP18细胞增殖的IC50;选用细胞生长曲线、平皿克隆形成实验和软琼脂集落形成实验观察EGCG对鼻咽癌干细胞SP18增殖的影响;采用Western blot检测Notch1和Jagged1蛋白表达。结果 EGCG抑制SP18细胞增殖的IC50值为149.02 mg/L;EGCG呈浓度和时间依赖性抑制SP18细胞的增殖(n=3,P<0.05);EGCG呈浓度依赖性抑制Notch1和Jagged1蛋白的表达。结论 EGCG能有效抑制鼻咽癌干细胞SP18的增殖,其可能通过降低Notch1和Jagged1蛋白的表达而发挥作用。

Jagged1过表达促进老龄大鼠来源的内皮祖细胞向成熟内皮细胞分化

目的:探讨上调Jagged1表达对内皮培养条件下老龄大鼠来源的内皮祖细胞(EPC)向内皮细胞分化的影响。方法:脱臼处死1～2月龄和19～26月龄SD大鼠,PBS冲洗股骨和胫骨骨髓,Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞,应用含10%FBS的DMEM/F12培养基以差速贴壁法进行体外培养,DiI-ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染进行EPC特性鉴定。实验分为4组:对照组、PIRES2-EGFP转染组、PIRES2-EGFP-Jagged1转染组和未转染的年轻大鼠来源EPC组。荧光显微镜下计数GFP阳性细胞数并计算转染效率;免疫荧光、RT-PCR和Western blotting检测Jagged1 mRNA和蛋白、von Willebrand因子(vWF)及血管内皮生长因子激酶插入区受体(KDR)mRNA表达,体外血管生成实验检测EPC的血管形成能力。结果:转染后Jagged1在EGFP-Jagged1组表达较对照组显著增强(P<0.01);Jagged1过表达显著促进老龄大鼠EPC vWF与KDR mRNA表达(P<0.01)和体外血管生成能力(P<0.01);vWF与KDR mRNA表达以及体外血管生成能力在Jagged1转染组与年轻大鼠EPC组间未见有显著差别。结论:Jagged1过表达促进内皮培养条件下老龄大鼠来源EPC向成熟内皮细胞分化。

Jagged1蛋白对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的作用

目的研究Jagged1蛋白(Ja1)对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤(SI/RI)的作用,为探明Notch信号通路在心肌缺血再灌注损伤(I/RI)中的作用提供理论依据。方法实验分为5组,分别为正常对照组、SI/RI组、缺氧复氧+不同浓度Ja1组(5、10、20μM),四氮唑盐比色(MTT)法测定各组细胞存活率;缺口末端标记(TUNEL)法测定各组细胞凋亡率;专用试剂盒检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。结果与对照组相比,SI/RI组细胞活力明显下降(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01),同时期培养液中SOD水平明显降低(P<0.01),MDA水平显著升高(P<0.01);不同浓度Ja1可以使上述指标明显改善(P<0.01),并呈浓度依赖性。结论 Ja1蛋白对SI/RI造成的心肌细胞损伤具有保护作用,作用机制与增强细胞抗凋亡、抗氧化以及减轻脂质过氧化物导致的细胞膜损伤有关,Notch信号通路可能在心肌缺血再灌注损伤中发挥重要的调控作用。

Jagged1蛋白在银屑病、基底细胞癌及皮肤鳞状细胞癌中的表达

目的探讨Jagged1蛋白在银屑病、基底细胞癌及皮肤鳞状细胞癌中的表达及意义。方法采用免疫组化Envision法检测Jagged1蛋白在银屑病、基底细胞癌及皮肤鳞状细胞癌皮损中的表达。结果 Jagged1蛋白在寻常性银屑病患者皮损中呈阴性表达,在基底细胞癌及皮肤鳞状细胞癌中的表达较正常人皮肤增强,差异有统计学意义(P<0.01);Jagged1蛋白在基底细胞癌及皮肤鳞状细胞癌中的表达较银屑病增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Jagged1蛋白在银屑病发病机制中与角质形成细胞异常增生及真皮乳头血管增生等组织病理变化可能不相关,提示此蛋白可能与皮肤恶性肿瘤的异常增生有关。

融合蛋白TRX-hJagged1原核表达载体的构建及其在BL21中的表达

本研究旨在构建原核表达载体并原核表达Notch配体Jagged1。构建不同长度但均包含DSL区的原核表达载体pET-hJagged1,将构建重组原核表达载体pET-hJagged1转化大肠杆菌BL21后,予以IPTG诱导,优化诱导条件,使目的蛋白TRX-hJagged1在上清中有较大量表达。诱导工程菌并以镍柱纯化对可溶性的目的蛋白进行纯化。结果表明,成功构建了原核表达载体pET-hJagged1(BglⅡ)、pET-hJagged1(HindⅠ)及pET-hJagged1(StuⅠ),但仅pET-hJagged1(StuⅠ)表达可溶性的TRX-hJagged1。通过镍柱纯化获得了较单一的TRX-Jagged1蛋白,Western Blot证实了其为目的蛋白。结论:成功地构建了原核表达载体pET-hJagged1,并在原核表达系统表达了TRX-Jagged1融合蛋白,为进一步研究Jagged1在淋巴造血系统中的作用奠定了基础。

Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中表达的研究

目的探讨Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中的表达及其对妊娠结局的影响。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术和免疫印迹法检测15例自然流产患者和20例正常早期妊娠妇女绒毛Jagged1 mRNA和蛋白的表达水平。结果自然流产组患者Jagged1mRNA表达水平(0.062 3±0.000 7),低于正常早期妊娠妇女(0.031 5±0.0065),差异有统计学意义(P<0.05);Western-blot检测显示,早期自然流产患者Jagged1蛋白的表达水平低于正常早期妊娠妇女,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中表达呈下调趋势,可能与母胎界面血管发育及滋养细胞缺氧有关,从而导致自然流产。

融合蛋白hJagged1^(ext)-Fc毕赤酵母表达载体的构建及表达

本研究旨在构建人IgG1 Fc蛋白及融合蛋白hJagged1ext-Fc,并在毕赤酵母GS115中表达。用RT-PCR法从人骨髓细胞中扩增hJagged1基因的胞外段。在测序正确后,将hJagged1基因的胞外段插入构建好的PIC-Fc载体,得到PIC-hJagged1ext-Fc。用MD平板筛选重组子,G418法筛选高拷贝转化子,经甲醇诱导表达后,采用SDS-PAGE分析表达蛋白。结果表明:hJagged1基因的胞外段被有效地扩增。序列分析显示所构建的含phJagged1ext-Fc融合基因的质粒与设计相同,人IgG1 Fc蛋白及融合蛋白hJagged1ext-Fc得到正确表达。结论:成功地构建了hJagged1ext-Fc融合基因的毕赤酵母表达载体,并在毕赤酵母中正确表达,为进一步研究Jagged1在造血干/祖细胞的体外扩增奠定了基础。

冠心病患者血浆Jagged1蛋白与冠状动脉侧支循环形成的关系

目的:探讨冠心病患者血浆中Jagged1蛋白水平与冠状动脉侧支循环(CCC)形成的关系。方法:根据冠状动脉造影结果入选我院左前降支、左回旋支或右冠状动脉中至少有一支血管直径狭窄≥95%的冠心病患者89例(冠心病组)和造影结果无明显异常的患者30例(正常对照组)。根据Rentrop分级评分将冠心病组患者再分成侧支循环良好亚组(Rentrop分级≥2级,n=42)与侧支循环不良亚组(Rentrop分级≤1级,n=47)。采用酶联免疫吸附法检测所有入选患者血浆中Jagged1蛋白及血管内皮生长因子(VEGF)的浓度,并进行相关性分析。结果:与正常对照组相比,冠心病组患者血浆Jagged1蛋白[(38.74±10.60)ng/L vs(23.04±8.97)ng/L]及VEGF[(113.98±30.80)pg/L vs(72.73±14.55)pg/L]水平均明显升高(P均<0.01)。侧支循环良好亚组与侧支循环不良亚组比血浆Jagged1蛋白[(46.77±8.49)ng/L vs(31.56±6.26)ng/L]及VEGF[(128.10±20.24)pg/L vs(92.43±21.09)pg/L]水平均显著升高(P均<0.01)。冠心病患者血浆Jagged1蛋白与VEGF水平呈正相关(r=0.730,P<0.01)。多元回归分析显示,Jagged1蛋白(OR=1.318,P=0.000)和VEGF(OR=1.043,P=0.043)是影响CCC形成的独立预测因素。结论:侧支循环良好亚组血浆Jagged1蛋白水平较侧支循环不良亚组明显升高,表明Jagged1蛋白在CCC形成过程中可能起重要作用,这为冠心病患者临床治疗提供新的研究方向。