JAK-STAT信号传导通路与痛性糖尿病周围神经病变关系的研究进展

痛性糖尿病周围神经病变(PDPN)作为糖尿病并发症之一,是以疼痛为主要表现的一类神经病变,属于神经病理性疼痛的一种。JAK-STAT(The Janus kinase/signal transducer and activator of tran-scriptions)信号通路是一种由多种细胞因子介导的信号传导通路,与PDPN的病理机制密切相关。JAK-STAT信号通路通过与Nrf2通路相互作用介入到抗氧化应激过程,进而发挥神经细胞保护作用。JAK-STAT信号通路可以作为治疗痛性糖尿病周围神经病变一个潜在的治疗靶点。

姜黄素对宫颈癌细胞系中c-Jun及JAK-STAT信号传导通路的影响机制研究

目的:探讨姜黄素对宫颈癌细胞系中c-Jun及JAK-STAT信号传导通路的影响机制。方法:将宫颈癌Hela细胞分为不同浓度(5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)实验组和对照组,实验组用不同浓度的姜黄素进行处理,对照组不予处理。采用MTT法检测各组Hela细胞增殖抑制率,Western blot法检测细胞JAK1、JAK2、STAT3、c-Fos及c-Jun蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)法检测细胞JAK1、JAK2、STAT3 mRNA相对表达量。结果:与对照组比较,姜黄素作用24 h、48 h、72 h后,10μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,10μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组细胞c-Fos、c-Jun蛋白表达水平及JAK1、JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(均P<0.05),且药物浓度越高,对相关基因和蛋白表达的抑制作用越明显。结论:姜黄素能够地抑制宫颈癌Hela细胞增殖,且存在剂量和时间依赖性,其作用机制可能与下调c-Fos及c-Jun蛋白表达,降低细胞内JAK-STAT信号传导通路活性有关。

细胞因子受体介导的JAK-STAT信号传导途径

细胞因子通过与其相应受体的相互作用来介导其生物效应。细胞因子受体大多数虽不含蛋白激酶催化结构域,但配体的结合却能诱导受体上的酪氨酸被磷酸化。最近的研究发现,有一个胞内酪氨酸激酶家族——Janus kinases(Jaks)与此有关。Jaks与受体胞内近膜区相联,导致Jaks的磷酸化和活化;激活的Jaks则磷酸化受体及胞内一类转录因子——signal trans-ducers and activators of transcription(STAT)。从而揭示了细胞因子信号传导的一个新途径,JAK-STAT途径。

JAK-STAT信号传导通路和血管平滑肌细胞

JAK-STAT信号传导通路是目前心血管分子生物学研究领域的热点。血管平滑肌细胞的增殖和迁移是血管增殖性疾病发病的核心环节。JAK-STAT信号传导通路为调控血管平滑肌细胞增殖和迁移的基因治疗提供了新的思路。

膀胱癌100例血清Zeste基因增强子同源物2和信号传导蛋白3表达水平及诊断价值分析

目的探讨膀胱癌病人血清Zeste基因增强子同源物2(EZH2)和信号传导蛋白3(SMAD3)表达水平及临床意义。方法纳入江苏省人民医院宿迁医院于2021年1月至2022年12月收治的膀胱癌病人进行研究(100例),另选取同期于该院就诊的泌尿系统良性疾病病人作为良性疾病组(93例)以及健康体检者作为对照(100例)。采用Pearson相关性分析法分析膀胱癌病人血清中EZH2和SMAD3表达水平的相关性;采用logistic多因素回归分析法分析膀胱癌发生的影响因素;采用ROC曲线分析EZH2和SMAD3对膀胱癌的诊断效能。结果膀胱癌病人血清中EZH2(101.34±15.09)ng/L和SMAD3(226.53±25.94)ng/L表达水平均高于良性疾病组(85.96±11.23)ng/L、(203.11±22.18)ng/L和对照组(83.91±9.14)ng/L、(198.03±20.30)ng/L(均P<0.001);膀胱癌病人血清EZH2和SMAD3表达水平呈正相关(r=0.72,P<0.001);膀胱癌组年龄≥60岁(74/187)、有吸烟史的病人(76/166)所占比例均高于良性疾病组(65/187、55/166)及对照组(48/187、35/166)(均P<0.05);年龄、吸烟史、EZH2、SMAD3为发生膀胱癌的危险因素(P<0.05);以良性疾病组为对照,血清EZH2和SMAD3单独检测诊断膀胱癌的曲线下面积(AUC)分别为0.78、0.78,二者联合检测的AUC为0.85,优于各自单独检测(Z_(二者联合-EZH2)=2.81、Z_(二者联合-SMAD3)=2.68,P=0.009、0.007)。结论血清EZH2和SMAD3与膀胱癌的发生有关,二者联合对膀胱癌具有一定的诊断价值。

小麦响应白粉菌侵染的表型特征、生理应答和免疫信号传导通路分析

了解植物应对病原物入侵的反应对挖掘抗性基因具有重要意义。通过白粉菌侵染小麦中作9504幼苗,观察侵染后0 h、6 h、1 d、4 d和7 d小麦叶片生长、生理代谢相关指标和基因表达变化,揭示白粉菌侵染对小麦生长、渗透调节物质及活性氧的响应机制。结果表明,随着侵染时间的增加,小麦叶片死细胞数目、过氧化物酶活性和超氧阴离子数量呈上升趋势,白粉菌在7 d后生长出成熟的分生孢子。苯丙氨酸解氨酶和多酚氧化酶分别在4 d和1 d后发挥作用,可溶性蛋白含量随侵染时间增加基本呈上升趋势,叶绿素含量在7 d时显著下降,进而影响植物生长,过氧化氢含量在整个侵染时期变化不大。转录组分析发现侵染初期(0 h到6 h)PTI信号传导部分受抑制下调,侵染前中期(6 h到1 d和1 d到4 d)PTI信号传导积极响应,ETI出现在侵染前期,侵染后期(4 d到7 d)由于白粉菌已经完全定殖于叶片表面,影响小麦的光合作用,PTI和ETI信号传导通路均有下调的趋势。研究结果为进一步了解小麦响应白粉菌侵染的防御机制提供一定参考。

锚蛋白重复序列和细胞因子信号传导抑制因子盒蛋白13通过锌指家族核转录因子2/溶质载体家族7成员11介导的铁死亡促进动脉粥样硬化的机制研究

目的探讨锚蛋白重复序列和细胞因子信号传导抑制因子盒蛋白13(ASB13)在动脉粥样硬化(AS)进展中的作用和分子机制。方法将载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为对照组、AS组、sh-NC组、sh-ASB13组和sh-ASB13+sh-锌指家族核转录因子2(SNAI2)组。对照组小鼠给予标准饮食,其余4组均给予高脂饮食,饲喂8周。细胞实验1将HUVECs分为细胞对照组、ox-LDL组、ox-LDL+si-NC组、ox-LDL+si-ASB13组和ox-LDL+si-ASB13+Erastin组。细胞实验2将HUVECs分为ox-LDL+si-NC组、ox-LDL+si-SNAI2组和ox-LDL+si-ASB13+si-SNAI2组。采用HE染色评估组织病理学变化;采用CCK-8分析细胞活力;采用Western blot检测ASB13、SNAI2、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、GPX4蛋白表达水平;采用生化检测试剂盒检测脂质代谢物和Fe2+水平。结果动物实验结果表明,与对照组比较,AS组小鼠血清HDL-C水平及主动脉组织中SLC7A11和GPX4蛋白表达水平均降低,LDL-C、TC、TG、Glu和Fe2+水平及主动脉组织中ASB13蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与sh-NC组比较,ASB13敲低抑制AS小鼠的动脉粥样硬化斑块形成,SNAI2敲低则作用相反。细胞实验结果表明,与细胞对照组比较,ox-LDL处理降低HUVECs细胞活力,升高ASB13蛋白表达水平,促进脂质积累和铁死亡;沉默ASB13升高细胞活力,减少脂质积累和铁死亡(P<0.05)。ASB13泛素化降低SNAI2蛋白表达水平,SNAI2与SLC7A11启动子结合促进其转录激活,上调SLC7A11蛋白表达水平。与ox-LDL+si-NC组比较,沉默SNAI2或铁死亡诱导剂Erastin处理逆转了ASB13沉默对HUVECs的保护作用(P<0.05)。结论ASB13可能通过SNAI2/SLC7A11介导的铁死亡促进AS发生与发展。

基于JAK-STAT信号通路探究降气平喘汤干预支气管哮喘的作用机制

目的基于Janus激酶-信号传导及转录激活因子(janus-activated kinase-singal transducers and activators of transcriprion,JAK-STAT)信号通路探究降气平喘汤干预支气管哮喘的作用机制。方法选用SD雄性大鼠48只,随机分为空白组(等体积蒸馏水)、模型对照组(等体积蒸馏水)、泼尼松组[醋酸泼尼松片6.3 mg/(kg·d)]、中药低量组[降气平喘汤3.96 mL/(kg·d)]、中药中量组[降气平喘汤7.92 mL/(kg·d)]、中药高量组[降气平喘汤15.84 mL/(kg·d)],每组8只。除空白组外,各组均于第0、7天用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏溶液腹腔注射致敏,第14天开始用OVA致敏溶液连续雾化14 d。造模成功后连续灌胃给药14 d。取肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)及肺组织进行HE染色、Masson染色、免疫组织化学病理学检测;ELISA法检测BALF中白细胞介素(interleukin,IL)-5、IL-13、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)含量;Western blot法检测肺组织中JAK1、JAK2、STAT3、p-STAT3、STAT5、p-STAT5蛋白表达水平;RT-PCR法检测肺组织中JAK1、JAK2 mRNA表达水平。结果模型对照组大鼠出现肺泡壁增厚,肺泡塌陷和支气管、血管厚度增厚,大量炎性细胞浸润及上皮细胞紊乱、脱落、支气管纤维结缔组织增生,肺脏组织纤维化,大量胶原纤维沉积。与泼尼松组相比,中药低、中、高量组α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)、JAK1蛋白表达水平和p-STAT3/STAT3、p-STAT5/STAT5升高(P<0.05),中药低、中量组IL-5、IL-13含量及JAK2蛋白表达水平升高(P<0.05),中药低量组TNF-α含量和JAK1、JAK2 mRNA表达水平升高(P<0.05),IFN-γ含量降低(P<0.05)。与中药低量组相比,中药中、高量组α-SMA、JAK1、JAK2蛋白表达水平和p-STAT3/STAT3、p-STAT5/STAT5降低(P<0.05),IFN-γ含量升高(P<0.05),中药高量组TNF-α、IL-5、IL-13含量降低(P<0.05)。与中药中量组相比,中药高量组α-SMA、JAK2蛋白表达水平、p-STAT3/STAT3、p-STAT5/STAT5降低(P<0.05),IL-5含量降低(P<0.05)。结论降气平喘汤可能通过调节Th1/Th2细胞因子平衡,进而调节JAK-STAT信号通路转导来改善支气管哮喘气道炎症及缓解气道重塑。

虎杖苷调控Janus激酶1/信号传导和转录激活因子3信号通路对小鼠宫颈癌细胞凋亡及裸鼠移植瘤作用实验研究

目的:探讨研究虎杖苷调控Janus激酶1(JAK1)/信号传导和转录激活因子3(STAT3)信号通路对小鼠宫颈癌细胞凋亡及裸鼠移植瘤的作用。方法:选取人宫颈癌HeLa细胞株,分为对照组(未经任何处理的HeLa细胞)、虎杖苷低、中、高剂量组(加入50、100、150μmol/L虎杖苷),继续培养24、48、72 h, Annexin V双染法检测HeLa细胞凋亡,MTT检测HeLa细胞增殖能力,Transwell小室检测HeLa细胞侵袭能力,qRT-PCR检测JAK1、STAT3 mRNA表达,Western blot检测JAK1/STAT3信号通路相关蛋白表达,并进行细胞形态学观察。结果:与对照组比较,虎杖苷低、中、高剂量组HeLa细胞凋亡率升高,高剂量组凋亡率高于中剂量组,中剂量组高于低剂量组(均P<0.05)。虎杖苷低、中、高剂量组HeLa细胞增殖和侵袭能力显著下降,虎杖苷高剂量组增殖率和侵袭细胞数最低(均P<0.05)。虎杖苷低、中、高剂量组HeLa细胞中JAK1、STAT3 mRNA和蛋白表达显著下降,高剂量组JAK1、STAT3 mRNA和蛋白表达低于中剂量组,中剂量组低于低剂量组(均P<0.05)。虎杖苷低、中、高剂量组小鼠肿瘤体积缩小,肿瘤质量降低(均P<0.05)。结论:虎杖苷可诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,抑制其增殖、迁移、侵袭及裸鼠皮下成瘤,其作用机制可能与调控JAK1/STAT3通路信号通路有关。

肿瘤微环境的免疫细胞、信号传导通路及相关治疗展望

肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)是一个高度结构化的生态系统,包括多种免疫细胞、肿瘤相关的成纤维细胞(CAFs)、内皮细胞和细胞外基质(ECM)等。研究TME内部的免疫细胞及信号传导通路对于探索肿瘤治疗靶点、提高治疗效果具有重要意义。拟通过对TME中的免疫细胞及相关信号传导通路的研究进展综述,以期为肿瘤免疫、靶向治疗提供新的思路和方法。

信号传导及转录激活蛋白家族与听力损失的研究进展

听力损失是影响人类的最常见神经感觉障碍之一,严重影响患者生活质量,缺乏理想的治疗方法,其发病机制与内耳氧化应激、炎症和细胞凋亡相关。近来研究证实信号传导及转录激活蛋白(signal transducer and activator of transcriptions,STATs)家族成员参与调控内耳发育过程中听觉细胞基因表达和听觉障碍发生发展过程中细胞凋亡、氧化应激、炎症、自噬等生理活动。本文就STATs在内耳发育及听力损失中的研究进行综述,阐明其具体作用分子机制,旨在为听力损失的防治提供理论参考和研究方向。

信号传导及转录激活蛋白4在卵巢癌中的表达及其与预后的关系

目的探究信号传导及转录激活蛋白4(STAT4)在卵巢癌中的表达及与患者预后的关系。方法组织芯片共包含208例组织,其中卵巢癌组织192例、正常卵巢组织16例。采用免疫组化法检测卵巢癌组织、癌旁组织及正常卵巢组织中STAT4的表达。并利用GEPIA数据库、UALCAN数据库、TCGA PORTAL数据库和Kaplan-Meier Plotter数据库获取卵巢癌患者的临床病理特征和生存数据,GEPIA数据库提供419例卵巢癌组织样本信息,Kaplan-Meier Plotter数据库提供1656例卵巢癌组织样本信息,分别用于分析卵巢癌组织STAT4表达与肿瘤预后的相关性。结果STAT4蛋白在卵巢癌组织中表达(45.83%)较正常卵巢组织(81.25%)明显降低(P<0.01)。GEPIA数据库显示,STAT4高表达卵巢癌患者的总体生存期曲线(OS)显著高于STAT4低表达患者(log-rank P=0.011),HR=0.73,P=0.012。TCGA Portal数据库的数据显示,STAT4高表达患者的OS高于STAT4低表达患者(Log rank P=0.023)。Kaplan-Meier Plotter数据库结果显示,STAT4高表达患者的OS和无进展生存期(PFS)较STAT4低表达患者更长,差异有统计学意义(P=0.009、0.02)。结论STAT4在卵巢癌组织中呈明显低表达,与患者的生存和预后密切相关,可能是卵巢癌诊断和预后的潜在分子标志物。

骨形态发生蛋白信号传导与骨关节炎

尽管骨关节炎(OA)的全球患病率迅速上升,但是改变疾病进展的治疗方法仍然未被完全明确。最近,研究者发现了远端增殖区(DPZ),这是一个双潜能增殖细胞的区域,受骨形态发生蛋白(BMP)信号的影响。这项动物研究评估了在关节软骨内BMP信号诱导的短暂软骨分化是否为OA发病机制的分子基础。

基于白细胞介素-6/信号传导及转录激活蛋白3信号通路探讨长链非编码RNA-1614在乳腺癌骨转移中的调控机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)-1614和白细胞介素-6(IL-6)/信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)信号传导通路在乳腺癌骨转移患者的表达水平及其在潜在作用机制。方法回顾性分析2021年1月至2023年1月南昌市人民医院收治的25例乳腺癌骨转移患者的临床资料,检测并比较乳腺癌原发病灶肿瘤组织、乳腺癌原发癌癌旁组织、乳腺癌骨转移灶肿瘤组织、乳腺癌骨转移灶癌旁组织中LINC01614和IL-6、STAT3相对表达量,分析LINC01614与IL-6、STAT3相对表达量的相关性。选取SPF级健康雌性小鼠20只,进一步构建乳腺癌骨转移小鼠模型,获取模型小鼠骨转移灶组织作为模型组(n=10),同时,以正常健康小鼠作为对照组(n=10),检测并比较模型组与对照组乳腺癌骨转移肿瘤组织中LINC01614和IL-6、STAT3mRNA相对表达量。结果乳腺癌原发灶、乳腺癌骨转移灶癌组织中LINC01614相对表达量均高于乳腺癌原发灶、乳腺癌骨转移灶癌旁组织,且乳腺癌骨转移灶癌组织高于乳腺癌原发灶癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌骨转移灶癌组织中IL-6、STAT3相对表达量均高于乳腺癌骨转移灶癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌骨转移灶癌组织LINC01614相对表达量与IL-6、STAT3相对表达量均呈正相关(r>0,P<0.05)。乳腺癌骨转移模型组小鼠LINC01614及IL-6、STAT3的mRNA相对表达量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LINC01614在乳腺癌骨转移患者中表达水平异常升高,可能具有促进乳腺癌患者骨转移的作用,其作用机制可能与IL-6/STAT3信号传导通路的激活有关。

小青龙汤对β_(2)肾上腺素能受体减敏哮喘小鼠RhoGDI_(2)/GRK_(2)/β-arrestin信号传导的影响

目的探讨小青龙汤对β_(2)肾上腺素能受体(β_(2)-AR)减敏哮喘小鼠的可能作用机制。方法30只SPF级雌性BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、小青龙汤组(中药组)、地塞米松组及小青龙汤加地塞米松组(中药加地塞米松组),每组6只。除空白对照组外,其余各组小鼠通过用卵蛋白(OVA)致敏激发及沙丁胺醇反复刺激来进行造模。造模后自激发第1天起,小青龙汤组每天灌服小青龙汤0.76 g/100 g,地塞米松组每天以腹腔注射地塞米松0.07 mg/100 g,小青龙汤加地塞米松组每天灌服小青龙汤及腹腔注射地塞米松,剂量同前,连续7 d。末次给予OVA激发后24 h,采用EMK动物肺功能测量系统监测各组小鼠的气道阻力,苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠肺组织病理情况,逆转录PCR(RT-PCR)分别检测肺组织中β_(2)-AR、Rho鸟苷酸解离抑制因子2(RhoGDI_(2))、β-AR激酶(GRK_(2))、β-抑制蛋白(β-arrestin)的mRNA表达,Western blot测定肺组织中β_(2)-AR、RhoGDI_(2)、GRK_(2)、β-arrestin含量。结果病理组织学观察发现β_(2)-AR减敏哮喘小鼠气道炎症浸润,各级支气管管壁显著增厚,管道狭窄,且较空白组的病理表现明显加重,经给药后均有不同减轻,以小青龙汤加地塞米松组最优;小鼠气道阻力测定显示随着乙酰甲胆碱(Mch)给药浓度的增加,模型组气道阻力较空白组逐渐增加,给药后各组均有下降趋势,以中药加地塞米松组下降最为明显(P<0.05);肺组织中β_(2)-ARmRNA及β_(2)-AR的表达明显下降,经药物干预后两者均有不同程度的上升,其中肺组织中β_(2)-ARmRNA的表达以小青龙汤加地塞米松组最优,而小青龙汤与地塞米松组之间差异无统计学意义;经造模后与空白组相比,小鼠肺组织中RhoGDI_(2)、GRK_(2)、β-arrestin及它们的mRNA的表达均有不同程度的增强(P<0.05),经药物干预后与模型组相比,小青龙汤组、地塞米松组及小青龙汤加地塞米松组中RhoGDI_(2)、GRK_(2)、β-arrestin及它们的mRNA的表达均下降(P<0.05),且小青龙汤组与地塞米松组之间无明显差异(P>0.05)。结论小青龙汤对β_(2)-AR减敏哮喘小鼠的作用机制可能通过影响肺组织β_(2)-AR的表达及RhoGDI_(2)/GRK_(2)/β-arrestin信号传导来实现,且效果与地塞米松相当。

基于SOCS1\3\JAK-STATS信号通路探讨软坚消瘿颗粒治疗肝郁脾虚型桥本甲状腺炎模型大鼠的实验研究

目的探究软坚消瘿颗粒对肝郁脾虚型桥本甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis,HT)大鼠甲状腺组织SOCS1\3\JAK-STATS信号通路表达的影响。方法SD大鼠40只,随机取10只作为正常对照组,剩余大鼠采用高碘饮水与皮下注射甲状腺球蛋白联合方案建立桥本甲状腺炎大鼠模型,通过慢性束缚应激、过度疲劳、饮食失节复合方法建立肝郁脾虚大鼠模型。模型复制成功后,随机分为模型对照组(n=10)、雷公藤多苷片组(n=10)以及软坚消瘿颗粒组(n=10)。正常对照组给予常规饲养,模型对照组予以蒸馏水2 mL,雷公藤多苷片组给予雷公藤多苷片9.45 mg/kg,软坚消瘿颗粒组给予软坚消瘿颗粒16.17 g/kg,各组干预时间为8周。干预结束后比较各组大鼠一般情况、HE染色情况、甲状腺功能指标、SOCS1\3\JAK-STATS相关蛋白表达情况。结果实验过程中无大鼠死亡,与模型组相比,软坚消瘿颗粒组大鼠血清TPOAb、TGAb、FT3、FT4水平较低,TSH水平较高(P<0.05);与雷公藤多苷片组相比,软坚消瘿颗粒组大鼠血清TPOAb、TGAb、FT3、FT4水平较低(P<0.05),TSH水平较高(P<0.05)。与模型组相比,软坚消瘿颗粒组大鼠SOCS1、SOCS2、p-JAK2、p-STAT1蛋白表达水平较高(P<0.05);与雷公藤多苷片组相比,软坚消瘿颗粒组大鼠SOCS1、SOCS2、p-JAK2、p-STAT1蛋白表达水平较高(P<0.05)。结论软坚消瘿颗粒能够有效改善肝郁脾虚型HT大鼠的甲状腺功能,提高组织SOCS1、SOCS3表达水平,抑制炎性物质传导,推测与JAK-STST信号通路异常激活有关。

let-7a靶向细胞因子信号传导抑制物1调控头颈部鳞状细胞癌免疫逃逸的作用机制研究

目的:研究微小RNA亚型let-7a靶向细胞因子信号传导抑制物1(SOCS1)调控头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)免疫逃逸的作用及机制。方法:常规培养人SCCHN细胞株舌鳞癌细胞(SCC25),采用双荧光素酶报告基因系统检测SOCS1是否为let-7a的作用靶点。将let-7a模拟物及阴性对照序列、抑制物及阴性对照分别转染人SCCHN细胞株SCC25,并将其分为空白对照组、let-7amimic组、mimic-NC组、let-7ainhibitor组和inhibitor-NC组。采用蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测各组SOCS1和细胞程序性死亡-1(PD-1)及程序性死亡配体1(PD-L1)的蛋白相对表达量,实时荧光定量聚合酶链反应(rt-qPCR)检测各组let-7a、SOCS1与PD-1、PD-L1的mRNA相对表达量;转染48 h后,采用流式细胞术检测细胞周期、凋亡。T细胞亚群CD4^(+)、CD8^(+)分别与SCCHN细胞进行共培养,采用流式细胞术检测共培养组T细胞亚群CD4^(+)、CD8^(+)数目。结果:双荧光素酶报告基因实验分析结果显示,转染野生型载体的细胞荧光素酶活性均下调(F=26.566,P<0.05),提示let-7a可靶向结合SOCS13′UTR序列。Westernblot结果显示,空白对照组SOCS1蛋白相对表达量高于let-7amimic组;人SCCHN细胞转染48 h后,let-7amimic组SOCS1、PD-1及PD-L1蛋白相对表达量最低,与各干预组差异有统计学意义(t=6.427,t=7.102,t=5.287;P<0.05),let-7ainhibitor组SOCS1、PD-1及PD-L1蛋白相对表达量最高,与各干预组差异有统计学意义(t=6.357,t=9.647,t=7.256;P<0.05)。rt-qPCR结果显示,人SCCHN细胞转染48 h后,let-7amimic组let-7amRNA相对表达量最高,与各干预组差异具有统计学意义(t=10.254,t=7.452,t=6.328;P<0.05),let-7ainhibitor组let-7amRNA相对表达量最低,与各干预组差异有统计学意义(t=6.257;t=6.901,t=5.287;P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,与空白对照组比较,let-7amimic组SCCHN细胞处于G0/G_(1)期的比例明显降低(t=5.286,P<0.05),处于S期的细胞比例相对增高,而let-7ainhibitor组CCHN细胞处于G0/G_(1)期的比例明显升高,差异有统计学意义(t=9.614,P<0.05),处于S期的细胞比例相对降低;let-7amimic组SCCHN细胞凋亡率明显高于其他干预组(t=11.257,t=8.617,t=9.627;P<0.05);SCCHN细胞转染48 h后,let-7amimic组CD4^(+)、CD4^(+)与CD8^(+)比值(CD4^(+)/CD8^(+))水平最高,与其他4组比较差异有统计学意义(tCD4^(+)=9.257,t=8.654,t=6.647,t=7.152;tCD4^(+)/CD8^(+)=4.251,t=4.652,t=5.921,t=4.275;P<0.05);let-7ainhibitor组CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)水平最低,与其他4组比较差异有统计学意义(tCD4^(+)=4.357,t=5.267,t=5.267,t=5.415;t_(CD4^(+)/CD8^(+))=4.675,t=4.592,t=4.627,t=4.159;P<0.05)。结论:let-7a过表达可能通过抑制PD-1及PD-1L信号通路而参与SCCHN细胞免疫逃逸,其机制可能与靶向调控SOCS1有关。

细胞因子信号传导JAK-STAT途径的研究进展

ＪＡＫ－ＳＴＡＴ途径是新近发现的一条多种细胞因子共用的信号传导途径，其作用模式已基本搞清，但对其作用环节中的调控及与其它细胞因子信号传导途径的联系仍有待深入研究。