从Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3信号通路探讨牛磺酸对Aβ_(25-35)所致神经干细胞损伤的保护作用

目的探讨牛磺酸对Aβ_(25-35)损伤神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的保护作用,并初步阐明其作用机制。方法该研究自2019年3—11月通过Aβ_(25-35)损伤实验室提取的神经干细胞模型,探讨牛磺酸和Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)的作用关系。从出生48 h内的C57BL/6乳鼠海马区提取NSCs,以25µmol/L浓度Aβ_(25-35)诱导NSCs,建立体外阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)样NSCs模型(AD-NSCs),并利用不同浓度的牛磺酸共同孵育,分为对照组、模型组(25µmol/L)、Aβ_(25-35)+牛磺酸5 mmol组、Aβ_(25-35)+牛磺酸10 mmol组、Aβ_(25-35)+牛磺酸15 mmol组及Aβ_(25-35)+牛磺酸20 mmol组,共六组。利用CCK-8法检测各组NSCs活力,细胞成球率、EDU染色检测各组NSCs增殖能力;免疫荧光染色检测各组NSCs分化能力;Real-time PCR检测凋亡相关基因B淋巴细胞瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及胱天蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达情况;蛋白质印迹法检测总-Janus激酶2(t-JAK2)、总-信号转导和转录激活因子3(t-STAT3)、磷酸化JAK2(p-JAK2)及p-STAT3蛋白表达情况。结果与对照组(100.00%)相比,模型组NSCs活力[(61.25±6.36)%]显著降低;细胞球半径长度及增殖比例显著降低;NSCs向神经元分化比例降低;Bax/Bcl-2比值及caspase-3 mRNA表达显著升高;p-JAK2及pSTAT3蛋白表达显著升高,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组[(61.25±6.36)%]相比,牛磺酸各浓度[(74.82±5.14)%、(81.58±7.03)%、(74.32±8.27)%、(69.33±4.36)%]均显著改善AD-NSCs活力;显著增加细胞球半径长度并促进其增殖;显著促进AD-NSCs向神经元分化;显著降低Bax/Bcl-2比值及caspase-3 mRNA表达;此外,牛磺酸还能够抑制pJAK2及p-STAT3蛋白表达,上述指标与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论牛磺酸对Aβ_(25-35)所致的神经干细胞损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。

Janus激酶2在实验性重症急性胰腺炎肝损伤中的作用

目的观察Janus激酶/信号转导和转录激活因子（JAK/STAT）信号通路的核心分子Janus激酶2（JAK2）在实验性重症急性胰腺炎（SAP）肝损伤中的表达变化。方法以4%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导大鼠SAP模型。32只雄性SD大鼠随机分为4组：对照组（NC组）和SAP6h、12h、18h组,每组8只。动态测定各组血清淀粉酶（AMY）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平;光镜下观察肝脏组织病理变化;免疫组化及Western blotting法检测JAK2在肝组织中的蛋白表达水平变化。结果与NC组比较,SAP各组AMY、ALT、AST水平均明显升高（P〈0.05）,光镜下肝脏组织损伤随病情进展而逐渐加重,SAP后6h有少量JAK2蛋白表达,12～18h达高峰（P〈0.05）,且JAK2表达与肝损伤的严重程度相一致。结论JAK2蛋白在SAP发生时高表达,参与SAP形成的病理过程,JAK/STAT通路活化可能促进SAP肝损伤。

葛根素对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏瘦素受体mRNA和磷酸化Janus激酶2/磷酸化信号转导与转录激活因子3的影响

Objective:To observe the effects of puerarin on the expressions of leptin receptor mRNA and phosphorylated Janus kinase 2 / phosphorylated signal transducers and activators of transcription 3 (P-JAK2/P-STAT3) proteins in the liver of rats with non-alcoholic fatty liver (NAFLD). Methods: A rat model of NAFLD was successfully established by feeding high-fat diet. All SD rats were randomly divided into blank control group, untreated group, simvastatin-treated group and puerarin-treated group. After four-week treatment, the levels of hepatic triglyceride and total cholesterol were analyzed by using an automatic biochemical analyzer. The pathology of the liver tissue was observed by light microscopy. Serum leptin level was detected by enzyme-linked immunosorbent assay, and the expressions of leptin receptor mRNA and P-JAK2/P-STAT3 proteins in the liver of NAFLD rats were quantified by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot analysis respectively. Results: Puerarin significantly decreased the levels of hepatic triglyceride and total cholesterol in NAFLD rats. Fat degeneration and inflammatory reaction in liver tissues of NAFLD rats were ameliorated after puerarin treatment. The serum leptin level was increased and the expressions of leptin receptor mRNA and P-JAK2/P-STAT3 proteins were up-regulated in puerarin-treated group. Conclusion: Puerarin can effectively attenuate liver lipid disorder and inflammation by improving the leptin resistance and enhancing the expressions of leptin receptor mRNA and P-JAK2/P-STAT3

Janus激酶抑制剂AG490对人视网膜母细胞瘤HXO-RB_(44)细胞JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:研究Janus激酶(Janus kinase,JAK)抑制剂AG490对人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞株体外抗增殖及细胞周期的作用,探讨其对JAK2/信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路蛋白表达的影响。方法:本实验分为实验组和对照组,实验组又根据不同浓度(6.25,12.50,25.00,50.00,100.00,200.00μmol/L)的AG490处理分为6个不同浓度的实验组。采用细胞的活力测定法检测各组细胞增殖状态。应用流式细胞术对各组中细胞凋亡及周期进行分析。采用Western印迹检测处理后STAT3,p-STAT3及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白的表达。结果:AG490处理HXO-RB44细胞株48 h后,随着药物浓度的增加,细胞抑制率增加,细胞存活率下降(均P<0.05)。除6.25μmol/L实验组外,其余5组与对照组两两比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。流式细胞术显示:随着AG490药物浓度的增加,细胞凋亡率呈逐渐增高趋势,与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。其中,50.00和100.00μmol/L实验组G1期细胞比例显著增多,相应地处于S期的细胞比例减少。Western印迹显示:随着AG490药物浓度的增加,STAT3和p-STAT3蛋白的表达量逐渐下降,与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);VEGF表达量逐渐下降,与对照组相比,6.25和12.50μmol/L实验组的VEGF差异均无统计学意义(均P>0.05),其余各实验组差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:JAK抑制剂AG490能抑制HXORB44细胞株生长及增殖,促进细胞的凋亡增加;并通过阻断JAK2/STAT3信号通路而下调STAT3,p-STAT3和VEGF的表达,从而抑制HXO-RB44细胞株的增殖,加速其凋亡。

丙泊酚对结肠癌细胞侵袭迁移及Janus激酶2/信号转导与转录激活子3信号通路的影响

目的:探讨丙泊酚对人结肠癌细胞株SW480侵袭、迁移的作用及对Janus激酶2/信号转导与转录激活子3(Janus kinase 2/signal transduction and transcriptional activator 3,JAK2/STAT3)信号通路的调控。方法:人结肠癌细胞株SW480分为空白对照组、丙泊酚处理组(又分为2,4,8μg/mL丙泊酚处理组)和丙泊酚+colivelin组,用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性检测试剂盒检测LDH活性,用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖,用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,用蛋白质印迹法检测细胞中JAK2,磷酸化JAK2(p-JAK2),STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)的蛋白表达量。结果:与空白对照组相比,丙泊酚处理组细胞株SW480的LDH活性显著升高(P<0.05),细胞增殖、迁移和侵袭能力以及p-JAK2和p-STAT3的表达均显著下降(均P<0.05)。与丙泊酚处理组相比,丙泊酚+colivelin组SW480细胞p-STAT3的表达水平、细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著升高(均P<0.05)。结论:丙泊酚能够通过抑制JAK2/STAT3信号通路而抑制人结肠癌细胞的增殖和转移。

Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3信号转导通路在人慢性根尖周炎中的表达

目的:检测Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活子3(Janus kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)信号转导通路在人慢性根尖周炎中的表达并推测其在慢性根尖周炎中的作用,为研究慢性根尖周病的致病机制提供理论基础。方法:选取健康牙齿牙周膜为对照组,患有根尖周囊肿及根尖周肉芽肿标本分别为实验组1、实验组2,每组各20例,对各组标本分别进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色并采用免疫组织化学法检测JAK2、磷酸化Janus蛋白酪氨酸激酶2(phosphorylation-janus kinase 2,p-JAK2)、STAT3及磷酸化信号转导和转录激活子3(phosphorylation-signal transducer and activator of transcription 3,p-STAT3)在各组中的表达。结果:JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3在正常牙周组织中均有少量表达,在根尖周囊肿及肉芽肿组织中表达量增加,实验组1、实验组2与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组1与实验组2比较,JAK2及p-JAK2的表达差异有统计学意义(P<0.05),STAT3及p-STAT3的表达差异无统计学意义(P>0.05)。对根尖周炎标本中的JAK2和STAT3以及p-JAK2和p-STAT3进行相关性分析,结果显示JAK2和STAT3以及p-JAK2和p-STAT3之间有相关性。结论:JAK2、p-JAK2、STAT3及p-STAT3在慢性根尖周炎中表达量增加,推测JAK2/STAT3信号通路与根尖周炎的炎症过程有关,可能在其发展过程中有重要意义。

姜黄素对大鼠脑缺血后Janus蛋白酪氨酸激酶2信号转导和转录激活子3信号通路的影响

目的探讨姜黄素对大鼠脑缺血损伤后Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活子3(STAT3)信号通路的影响。方法将68只SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血组、姜黄素组(尾静脉注射姜黄素40mg/kg)和对照组(注射等量生理盐水),每组17只,后3组建立大鼠局灶性脑缺血模型,观察各组大鼠神经行为学变化,ELISA检测大鼠脑组织TNF-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6表达,Western blot检测大鼠脑组织JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达。结果与脑缺血组比较,姜黄素组大鼠神经行为学评分减低[(1.53±0.62)分vs(2.94±0.87)分,P<0.05];与脑缺血组比较,对照组TNF-α、IL-1β和IL-6无明显变化(P>0.05),姜黄素组大鼠TNF-α[(57.63±10.27)ng/L vs(99.35±8.97)ng/L]、IL-1β[(33.67±9.10)ng/L vs(58.43±7.22)ng/L]和IL-6[(31.97±6.91)ng/L vs(49.23±6.28)ng/L]表达降低(P<0.01),p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3相对含量及HMGB1表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论姜黄素可保护大鼠缺血后脑损伤,其机制可能是通过抑制JAK2/STAT3信号通路,减少HMGB1表达,减轻炎性反应。

Janus激酶2选择性抑制剂HipHop药效团模型与3D QSAR模型的建立

目的为Janus激酶2(JAK2)选择性抑制剂的设计提供指导。方法将从已报道文献中筛选出的27个JAK2选择性抑制剂小分子通过Discovery Studido 4.5软件的分子共同特征药效团(HipHop)定性算法与定量构效关系(QSAR)分别构建JAK2选择性抑制剂的模型。结果HipHop药效团模型具有较强的筛选能力,且可以预测化合物是否具有活性;3D QSAR模型不仅可以预测化合物的活性值,还对化合物的设计提供指导;二者结合应用更加有助于发现新型JAK2选择性抑制剂。结论HipHop药效团和3D QSAR模型方法可以寻找可能的抗癌药物JAK2抑制剂先导分子,为后续的研究奠定理论基础。

基于Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3信号通路探讨参苓白术散对溃疡性结肠炎模型大鼠炎症抑制作用研究

目的:探讨基于Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路探讨参苓白术散对溃疡性结肠炎模型大鼠炎症抑制作用研究。方法:选SPF级健康雄性SD大鼠65只,随机分为对照组(n=12)和造模组(n=53)。造模组采用免疫复合法复制溃疡性结肠炎模型,对照组以相同方式给予等量0.9%氯化钠溶液。采用随机数字表法,对成功复制模型的大鼠进行分组,分别是模型组、参苓白术散低、高浓度组及阳性对照组,各12只。模型组及对照组灌胃给予蒸馏水10 ml/kg,1次/d;阳性对照组灌胃给予3 mg/ml美沙拉嗪溶液10 ml/kg,1次/d;参苓白术散低、高浓度组分别灌胃给予1.2 g/ml、2.4 g/ml参苓白术散药液10 ml/kg,1次/d。各组大鼠均给药3周。检测比较各组结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分、结肠组织学损伤指数(TDI)评分、血清炎症因子水平,以及结肠组织JAK、STAT3表达水平。结果:与模型组比较,各组大鼠结肠组织CMDI评分较低,TDI评分较低,血清白细胞介素-6(IL-6)水平较低,结肠组织JAK、STAT3表达水平较低,且参苓白术散低浓度组>阳性对照组>参苓白术散高浓度组,差异有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,血清白细胞介素-10(IL-10)水平较高,且参苓白术散低浓度组<阳性对照组<参苓白术散高浓度组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:参苓白术散能减轻溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜损伤,调节炎症相关细胞因子IL-6、IL-10释放,减轻炎症反应,其作用可能与抑制JAK/STAT3信号通路活性有关。

Janus激酶2在肿瘤化疗耐药中的作用及在伊马替尼耐药胃肠间质瘤中的潜在应用价值

Janus激酶2(JAK2)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)是近年来受到学者们广泛关注的细胞内信号通路之一,其能快速将受体收到的膜外刺激信号转导至细胞核内,进而调控下游基因的表达,参与多种细胞功能和行为。随着分子生物学研究深入,STAT3在多种癌症中的异常激活被人们所认识,作为STAT3主要上游激活分子,JAK2在肿瘤中的作用也逐渐受到重视。已有研究表明,JAK2/STAT3通路还参与了多种肿瘤化疗耐药的相关过程,这为解决肿瘤对靶向药物耐药的问题提供了新的思路。随着伊马替尼的临床应用,胃肠间质瘤(GIST)的治疗效果取得了很大改善,但仍有半数以上GIST患者因耐药而出现治疗失败。针对伊马替尼耐药GIST,各国研究者们仍在不断努力寻找解决方案,而目前对JAK2是否参与伊马替尼耐药所知甚少。故本文就JAK2在恶性肿瘤化疗耐药性中的作用及其在伊马替尼耐药GIST中的潜在价值研究进展进行综述。

基于JAK2/STAT3信号通路探究利咽糖浆对慢性咽炎大鼠咽喉组织损伤及咽黏膜修复的影响

目的:基于Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路探究利咽糖浆对慢性咽炎大鼠咽喉组织损伤及咽黏膜修复的影响。方法:取SD大鼠随机分为对照组、模型组、利咽糖浆组、RO8191(JAK2/STAT3激活剂)组、利咽糖浆+RO8191组,模型组与药物干预组大鼠采用氨水刺激咽部构建慢性咽炎模型,对照组大鼠咽部注射等剂量生理盐水,经利咽糖浆与RO8191干预后,检测大鼠一般情况及咽部表观状态,并进行咽部表观状态评分;HE染色检测大鼠咽部病理形态变化;流式细胞术检测大鼠外周血T淋巴细胞亚群CD4^(+)T与CD8^(+)T表达、CD4^(+)T/CD8^(+)T;试剂盒检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-10、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、总抗氧化能力(T-AOC)水平;以免疫印记法检测大鼠咽部组织JAK2/STAT3通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠咽部组织出现明显病理形态损伤,外周血CD4^(+)T与CD4^(+)T/CD8^(+)T、IL-10、血清T-AOC水平降低(P<0.05),咽部表观状态评分、CD8^(+)T、血清TNF-α、IL-6、MDA与ROS水平、咽部组织p-JAK2/JAK2与p-STAT3/STAT3水平升高(P<0.05);与模型组、利咽糖浆+RO8191组相比,利咽糖浆组大鼠咽部组织病理形态损伤减轻,外周血CD4^(+)T表达与CD4^(+)T/CD8^(+)T、IL-10、血清T-AOC水平均升高(P<0.05),咽部表观状态评分、CD8^(+)T、血清TNF-α、IL-6、MDA与ROS水平、咽部组织p-JAK2/JAK2与p-STAT3/STAT3水平均降低(P<0.05);RO8191组大鼠各指标变化趋势与利咽糖浆组相反。结论:利咽糖浆可通过抑制JAK2/STAT3信号激活减轻炎症及氧化应激,增强抗炎及抗氧化能力,缓解慢性咽炎大鼠咽喉组织损伤,修复咽黏膜。

银杏内酯B调控JAK2/STAT3信号通路对食管癌细胞增殖及凋亡的影响

为研究银杏内酯B对食管癌细胞增殖和凋亡的作用及相关机制,采用体外培养人食管癌OE19细胞,将其分为对照组(不做干预)、低/中/高剂量试验组(分别加入6.25、12.50、25.00μmol/L银杏内酯B)、银杏内酯B组(12.50μmol/L银杏内酯B)、阳性药物组(4 mg/L顺铂)、抑制剂组[12.50μmol/L银杏内酯B+10.00μmol/L Janus激酶2/转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路抑制剂AG490]、激活剂组(12.50μmol/L银杏内酯B+0.50μmol/L JAK2/STAT3通路激活剂Colivelin),干预24 h后,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法、Hoechst 33258染色法、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞的活力、增殖率、凋亡率及相关因子的表达水平。结果显示,与对照组相比,中/高剂量试验组与阳性药物组的细胞活力降低(P<0.05),因此,本研究选择有显著差异且较低浓度的12.50μmol/L银杏内酯B作为银杏内酯B组进行后续试验。与对照组相比,银杏内酯B组和阳性药物组细胞的增殖率、Cyclin D1的mRNA和蛋白质、p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达水平降低,凋亡率、Caspase-3的mRNA和蛋白质的表达水平升高(P<0.05)。与银杏内酯B组相比,抑制剂组各指标变化进一步增强(P<0.05),激活剂组则显著逆转了上述指标的变化(P<0.05)。银杏内酯B能够通过下调JAK2/STAT3信号通路抑制OE19细胞的增殖,促进食管癌细胞凋亡。本研究揭示了银杏内酯B新抗癌机制,为食管癌的研究提供了理论依据。

冬凌草甲素调节JAK2/STAT3/SOCS-1信号通路对糖耐量异常大鼠胰岛素抵抗的影响

目的探讨冬凌草甲素(Oridonin,Ori)对糖耐量异常(impaired glucose tolerance,IGT)大鼠胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的影响及作用机制。方法采用高脂饮食喂养联合链脲佐菌素注射法构建IGT大鼠IR模型,大鼠分为正常组(CT组)、IGT模型组(IGT组)、Ori组(10 mg·kg^(-1)·d^(-1))、Ori+Colivelin(COL)组(10 mg·kg^(-1)·d^(-1)Ori+2 mg/kg COL),每组6只。血糖检测仪测定空腹血糖(FPG)、葡萄糖耐量试验(OGTT)2 h血糖(2 hPG),ELISA试剂盒测定空腹胰岛素(FINS)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),血液自动分析仪测定血清胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,HE染色观察肝脏病理形态,Western blot验证附睾脂肪磷酸化(p)-激活Janus激活激酶2(JAK2)、JAK2、p-信号转导和转录激活因子3(STAT3)、STAT3、p-细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)、SOCS-1蛋白表达。结果与CT组比较,IGT组大鼠肝脏细胞肿胀,胞浆内可见大量大小不一的脂肪空泡,细胞核被脂肪空泡挤压偏位,且发生炎性细胞浸润,FPG、2hPG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、MCP-1、TNF-α以及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-SOCS-1/SOCS-1蛋白表达水平升高,血清HDL-C水平下降(P<0.05);与IGT组相比,Ori组大鼠肝脏细胞胞浆内脂肪滴及空泡数量明显减少,细胞肿胀有所缓解,未见炎性细胞浸润,FPG、2hPG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、MCP-1、TNF-α以及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-SOCS-1/SOCS-1蛋白表达水平下降,血清HDL-C水平升高(P<0.05);与Ori组相比,Ori+COL组大鼠肝脏脂肪变状况加剧,细胞肿大,血清FPG、2hPG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、MCP-1、TNF-α以及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-SOCS-1/SOCS-1蛋白表达水平升高,血清HDL-C水平下降(P<0.05)。结论Ori对IGT大鼠IR的缓解作用可能与抑制JAK2/STAT3/SOCS-1信号通路激活有关。

PIM1基因对急性髓系白血病U937细胞增殖、凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:探讨PIM1基因对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡的影响,以及对JAK2/STAT3通路的调控作用。方法:收集初诊成人AML患者和单纯缺铁性贫血患者的骨髓单个核细胞,荧光定量PCR检测PIM1 mRNA表达。将AML细胞系U937细胞分为:U937组(U937细胞正常培养)、Si-PIM1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、Si-NC组(U937细胞转染不含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、CoA1组(U937细胞中加入浓度为20μmol/L的JAK2激活剂CoA1)、Si-PIM1+CoA1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA低表达的腺病毒载体并加入浓度为20μmol/L的CoA1)。培养24 h。荧光定量PCR和蛋白印迹法检测U937细胞PIM1 mRNA和蛋白、JAK2/STAT3通路、细胞周期、凋亡相关蛋白表达;噻唑蓝法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率。结果:AML患者骨髓单个核细胞中PIM1 mRNA表达水平高于单纯缺铁性贫血患者(P<0.05)。与U937组相比,Si-PIM1组细胞PIM1 mRNA和蛋白、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Cyclin D1、CDK2蛋白、细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例降低(均P<0.05),p27、Caspase-3蛋白、G0/G1期、凋亡率升高(均P<0.05),而CoA1组上述指标的变化情况与Si-PIM1组正好相反,CoA1可逆转Si-PIM1对U937细胞的作用效果。U937组、Si-PIM1+CoA1组、Si-NC组U937细胞上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低PIM1基因表达可抑制U937细胞增殖、促进凋亡,缓解ALM进程,且上述作用可能与抑制JAK2/STAT3通路活化有关。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨升清降浊制动颗粒对多发性抽动症模型大鼠的作用及机制

[目的]基于Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活子3(STAT3)信号通路探讨升清降浊制动颗粒对多发性抽动症(TS)模型大鼠的作用及机制。[方法]将SD大鼠分为对照组、TS组、升清降浊制动颗粒低剂量组(0.645 mg/kg)、升清降浊制动颗粒高剂量组(2.58 mg/kg)、氟哌啶醇组(200μg/kg)、Coumermycin A1(JAK2通路激活剂)组(4 mg/kg)、升清降浊制动颗粒高剂量+Coumermycin A1组(2.58 mg/kg+4 mg/kg),每组12只。除对照组外,其他组大鼠均需构建TS模型。建模成功后,进行给药处理,给药每日1次,持续21 d。检测大鼠运动行为评分、刻板行为评分变化;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6水平及纹状体中多巴胺(DA)、多巴胺转运蛋白(DAT)、多巴胺D2受体(DRD2)含量;DNA缺口末端标记法(TUNEL)染色检测大鼠纹状体中神经元凋亡;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠纹状体中p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。[结果]与对照组比较,TS组大鼠运动行为评分、刻板行为评分、IL-1β、TNF-α、IL-6水平、DRD2含量、神经元凋亡率、p-JAK2、pSTAT3蛋白表达升高,DA、DAT含量降低(P<0.05)。与TS组比较,升清降浊制动颗粒低剂量组、升清降浊制动颗粒高剂量组、氟哌啶醇组大鼠运动行为评分、刻板行为评分、IL-1β、TNF-α、IL-6水平、DRD2含量、神经元凋亡率、pJAK2、p-STAT3蛋白表达降低,DA、DAT含量升高(P<0.05)。与TS组比较,Coumermycin A1组大鼠运动行为评分、刻板行为评分、IL-1β、TNF-α、IL-6水平、DRD2含量、神经元凋亡率、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达升高,DA、DAT含量降低(P<0.05)。Coumermycin A1减弱了高剂量升清降浊制动颗粒对TS模型大鼠的保护作用。[结论]升清降浊制动颗粒可抑制TS大鼠神经炎症、神经元凋亡及促进DA平衡,该机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。

升降理肺消瘤汤对Lewis肺癌小鼠免疫炎性反应和JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨升降理肺消瘤汤对Lewis肺癌小鼠免疫和炎性反应的调控作用,以及对JAK2/STAT3信号通路的影响。方法适应性喂养C57BL/6J雄性小鼠1周,其中空白组8只,荷瘤组60只。荷瘤组小鼠注射Lewis肺癌细胞造模成功后,将瘤体肉眼可见的荷瘤小鼠分为模型组、PD-1抑制剂组、升降理肺消瘤汤(XLT)低剂量组、XLT中剂量组、XLT高剂量组、XLT中剂量联合PD-1抑制剂组(联合用药组),每组8只。空白组和模型组每日0.4 mL/20 g生理盐水灌胃;PD-1抑制剂组每3 d腹腔注射100μg信迪利单抗;XLT低、中、高剂量组每日0.4 mL/20 g相应浓度中药灌胃;联合用药组每日0.4 mL/20 g中浓度中药灌胃,每3 d腹腔注射100μg信迪利单抗,各组连续给药14 d。最后一次给药的24 h后,称量记录小鼠体质量,摘眼球取血,颈椎脱臼法处死小鼠,比较各组小鼠抑瘤率、去瘤体质量、胸腺指数和脾指数;ELISA法检测血清中白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6浓度水平;Western Blot检测Janus激酶2(JAK2)、p-JAK2、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、p-STAT3蛋白表达水平。结果与模型组比较,各用药组小鼠平均瘤重均较少,PD-1抑制剂组、XLT中、高剂量组瘤重明显减少(P<0.01);PD-1抑制剂组和XLT中剂量组去瘤体质量增加(P<0.01);各用药组小鼠胸腺指数和脾指数均显著增加(P<0.01);PD-1抑制剂组、XLT中剂量组及联合用药组IL-2水平显著升高(P<0.05),各用药组小鼠IFN-γ水平均明显升高(P<0.05);除XLT低剂量组,各用药组TNF-α和IL-6水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);各用药组小鼠JAK2蛋白相对表达量均降低(P<0.05),XLT高剂量组和联合用药组p-JAK2降低差异有统计学意义(P<0.05);除PD-1抑制剂对p-STAT3蛋白的表达抑制作用不明显外,各用药组小鼠STAT3、p-STAT3蛋白相对表达量均较模型组显著降低(P<0.05)。结论升降理肺消瘤汤能够抑制Lewis肺癌小鼠瘤体生长,可能与其增强瘤鼠抗肿瘤免疫反应,减轻炎性反应,抑制JAK2/STAT3信号通路的激活有关。

基于JAK2/STAT3通路探讨阿奇霉素对脂多糖诱导肺泡上皮细胞的保护作用

目的探究阿奇霉素(AZI)对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞增殖生长、迁移的作用及相关机制。方法体外培养人肺泡上皮细胞A549,分为对照组(不做干预)、LPS组(10μg/ml LPS处理24 h)、低/中/高剂量实验组(10μg/ml LPS+2、4、8μg/ml AZI)、AZI组(10μg/ml LPS+4μg/ml AZI)、抑制剂组(10μg/ml LPS+50μmol/L JAK2/STAT3通路抑制剂AG490)、AZI+抑制剂组(10μg/ml LPS+4μg/ml AZI+50μmol/L AG490)、AZI+激活剂组(10μg/ml LPS+4μg/ml AZI+0.5μmol/L JAK2/STAT3通路激活剂Colivelin)。干预24 h后,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、倒置显微镜、划痕法、蛋白免疫印迹(WB)法检测炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6表达水平、细胞生长、迁移率、上皮间质转化(EMT)及JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达水平。结果LPS组细胞活力较对照组下降(P<0.05)。中/高剂量实验组细胞活力较LPS组上升(P<0.05)。因此选择有显著差异的较低浓度(4μg/ml AZI)作为AZI组进行后续实验。与对照组相比,LPS组细胞生长受抑制,TNF-α、IL-1β、IL-6、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达降低(P<0.05),细胞迁移率、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维粘连蛋白(FN)、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达升高(P<0.05)。与LPS组相比,AZI组和抑制剂组显著扭转了上述指标的变化(P<0.05)。与AZI组相比,AZI+抑制剂组细胞生长状态较好,E-cadherin蛋白表达进一步升高(P<0.05),细胞迁移率、TNF-α、IL-1β、IL-6、N-cadherin、Vimentin、FN、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达进一步降低(P<0.05),AZI+激活剂组则显著逆转了上述指标的变化(P<0.05)。结论阿奇霉素能够通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻对A549细胞的炎症损伤,促进细胞生长,并抑制其迁移与上皮间质转化(EMT)进程。

乔松素调节JAK2/STAT3信号通路对食管鳞癌细胞恶性进展的影响

目的:探究乔松素(pinocembrin,Pin)对食管鳞癌细胞恶性进展的影响及对Janus酪氨酸激酶2(janus activated kinase 2,JAK2)/信号传导与转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路的调控机制。方法:将人食管鳞癌细胞KYSE-410随机分为KYSE-410组、Pin低浓度(Pin-L)组、Pin中浓度(Pin-M)组、Pin高浓度(Pin-H)组、Pin-H+JAK2激活剂(Pin-H+Broussonin E)组。采用CCK-8法和克隆平板实验检测各组细胞的增殖活性;采用Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况;采用Western blot检测各组细胞中JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与KYSE-410组相比,Pin-L组、Pin-M组和Pin-H组细胞存活率(79.91±2.31、62.33±1.41、51.17±1.05,F=307.400),克隆细胞形成数量(162.82±6.33、144.59±5.09、120.18±3.72,F=209.800),迁移细胞数(77.73±3.26、60.83±2.41、49.28±1.60,F=360.314),侵袭细胞数(62.72±2.42、50.93±2.07、32.47±1.55,F=460.221)以及细胞中p-JAK2/JAK2(0.77±0.06、0.60±0.04、0.42±0.03,F=68.226)和p-STAT3/STAT3值(0.70±0.06、0.58±0.04、0.39±0.03,F=61.160)均降低(P<0.001),而细胞凋亡率(24.72±2.18、39.62±3.66、48.33±4.13,F=235.118)升高(P<0.001),Broussonin E的加入逆转了Pin对KYSE-410细胞恶性进展的抑制作用(P<0.05)。结论:Pin能够对食管鳞癌细胞的恶性进展起到抑制作用,其作用机制可能与JAK2/STAT3信号通路被抑制有关。

IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路增强小鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞,在信号转导子与转录激活子3 (STAT3)抑制剂Stattic(5μmol/L)存在与否的情况下,再加入IL-6(10 ng/mL~500 ng/mL)刺激6 h,加入荧光微球孵育2 h后,采用流式细胞术检测MH-S细胞吞噬荧光微球情况;Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、肌动蛋白相关蛋白2(Arp2)、纤维型肌动蛋白(F-actin)的表达水平。结果 鼻腔滴入LPS后,小鼠BALF中IL-6含量显著升高。随着IL-6刺激剂量的增加,MH-S细胞吞噬荧光微球的作用增强,Arp2、 F-actin蛋白的表达水平升高。100 ng/mL IL-6刺激MH-S细胞后,p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平升高。阻断MH-S细胞STAT3信号后,IL-6促进细胞吞噬的效应完全消失,IL-6诱导的Arp2、 F-actin蛋白表达增加被抑制。结论 IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路促进MH-S细胞Arp2、 F-actin蛋白的表达增强吞噬功能。

灯盏细辛注射液通过调节JAK2/STAT3信号通路抗脑卒中大鼠神经损伤的研究

[目的]探讨灯盏细辛注射液(EBI)对脑卒中大鼠的神经保护作用及在该过程中对Janus激酶2(JAK2)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)信号通路的调节机制。[方法]通过大脑中动脉闭塞(MCAO)建立缺血性脑卒中大鼠模型,然后将造模成功的大鼠随机分为模型组、尼莫地平组、EBI组、JAK2抑制剂组(AG490组)和EBI+JAK2激动剂组(EBI+CA1组),每组20只,另外选取20只大鼠只暴露颈动脉不进行结扎作为假手术组。利用神经功能缺损评分评估大鼠神经功能;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠脑梗死面积;苏木精-伊红(HE)和尼氏(Nissl)染色检测大鼠脑组织的病理性形态;TUNEL染色检测大鼠脑组织中神经细胞凋亡情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠脑组织中Bax、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达。[结果]与假手术组相比,模型组大鼠脑梗死面积增大,神经元细胞凋亡率增加,神经缺损评分、MDA水平、Bax蛋白表达及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均升高(P<0.05),同时脑组织中神经元退化,神经元数量减少,SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,EBI组、尼莫地平组和AG490组大鼠脑梗死面积减小,神经元细胞凋亡率减少,神经缺损评分、MDA水平、Bax蛋白表达及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均降低(P<0.05),同时脑组织中神经元损伤减轻,神经元数量增加,SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);进一步利用JAK2激动剂进行回补实验发现,EBI对大鼠神经损伤的保护作用被逆转(P<0.05)。[结论] EBI能够通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻脑卒中大鼠的神经损伤。