JAK/STAT信号转导通路与多发性骨髓瘤

多发性骨髓瘤(MM)是一种血液系统恶性肿瘤,其发病机制涉及骨髓瘤细胞与骨髓微环境间的相互作用、细胞因子的作用以及遗传学异常等方面,目前尚缺乏有效的治疗措施。酪氨酸蛋白激酶/信号传导及转录激活因子(JAK/STAT)信号通路与MM的发生、发展及治疗密切相关。研究JAK/STAT信号通路的组成分子和活化方式,探究该通路信号分子与MM发病以及疾病进展之间的关系将为进一步了解MM的发病机制提供帮助,同时有利于寻找新的药物治疗靶点。

PIM1基因对急性髓系白血病U937细胞增殖、凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:探讨PIM1基因对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡的影响,以及对JAK2/STAT3通路的调控作用。方法:收集初诊成人AML患者和单纯缺铁性贫血患者的骨髓单个核细胞,荧光定量PCR检测PIM1 mRNA表达。将AML细胞系U937细胞分为:U937组(U937细胞正常培养)、Si-PIM1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、Si-NC组(U937细胞转染不含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、CoA1组(U937细胞中加入浓度为20μmol/L的JAK2激活剂CoA1)、Si-PIM1+CoA1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA低表达的腺病毒载体并加入浓度为20μmol/L的CoA1)。培养24 h。荧光定量PCR和蛋白印迹法检测U937细胞PIM1 mRNA和蛋白、JAK2/STAT3通路、细胞周期、凋亡相关蛋白表达;噻唑蓝法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率。结果:AML患者骨髓单个核细胞中PIM1 mRNA表达水平高于单纯缺铁性贫血患者(P<0.05)。与U937组相比,Si-PIM1组细胞PIM1 mRNA和蛋白、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Cyclin D1、CDK2蛋白、细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例降低(均P<0.05),p27、Caspase-3蛋白、G0/G1期、凋亡率升高(均P<0.05),而CoA1组上述指标的变化情况与Si-PIM1组正好相反,CoA1可逆转Si-PIM1对U937细胞的作用效果。U937组、Si-PIM1+CoA1组、Si-NC组U937细胞上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低PIM1基因表达可抑制U937细胞增殖、促进凋亡,缓解ALM进程,且上述作用可能与抑制JAK2/STAT3通路活化有关。

针加灸对阿尔茨海默病大鼠海马区蛋白酪氨酸激酶-2/信号转导和转录激活因子-3信号通路的影响

目的:通过观察针加灸对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马区蛋白酪氨酸激酶-2(JAK2)、信号转导和转录激活因子-3(STAT3)、细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS3)的影响,探讨针加灸治疗AD的作用机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、治疗组,每组15只。采用双侧海马注射5!L Aβ1-42法(1!L/min)制备AD大鼠模型。治疗组予针刺加艾灸"百会"、双侧"肾俞"穴进行治疗,15min/次,每日1次,5次为1个疗程,共治疗4个疗程,每个疗程期间休息2d。治疗结束后Morris水迷宫实验检测各组大鼠记忆和空间探索能力,免疫组化法和Western blot法分别测定各组大鼠海马区JAK2、STAT3、SOCS3的阳性细胞数及蛋白表达水平。结果:与对照组和假手术组比较,模型组大鼠平均逃避潜伏期明显延长(P<0.01),跨越原平台次数和在安全象限平台停留时间明显缩短(P<0.01);与模型组比较,治疗组大鼠平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),跨越原平台次数和安全象限平台停留时间明显延长(P<0.01)。与对照组和假手术组比较,模型组大鼠海马区JAK2、STAT3阳性细胞数及蛋白表达明显增多(P<0.01),SOCS3阳性细胞数及蛋白表达明显减少(P<0.01);与模型组比较,治疗组大鼠海马区JAK2、STAT3阳性细胞数及蛋白明显减少(P<0.01),SOCS3阳性细胞数及蛋白表达明显增多(P<0.01)。结论:JAK2/STAT3信号通路和负反馈因子SOCS3均参与了AD发病的病理过程,针灸可能通过上调SOCS3来抑制JAK2/STAT3信号通路,降低其活化,减少慢性炎性反应发生发展,从而提高AD大鼠学习记忆能力,达到治疗AD的作用。

IL-6/JAK2/STAT3信号通路在电针调控胰岛素抵抗模型大鼠骨代谢中的作用

目的研究电针对胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)大鼠骨代谢及炎症状态的影响。方法8只大鼠按照随机数字表单列为空白组,另外32只大鼠给予高脂饲料喂养8周以建立IR大鼠模型,选取造模成功的24只大鼠,随机分为模型组、假电针组、电针组,每组8只,空白组、假电针组不做干预,电针组选取“中脘”“关元”、“足三里”、“丰隆”4穴进行电针治疗,假电针组选取上述4穴旁边的皮下后不进行电针治疗,各组均治疗8周。在治疗前后,测量各组大鼠的体质量(body mass,BM)、空腹血糖(fasting blood-glucose,FBG)及餐后血糖水平(postprandial blood-glucoser,PBG)、葡萄糖输注速率(glucose infusion rate,GIR);各组大鼠血清中Ⅰ型胶原氨基端前肽(N-terminal propeptide of typeⅠcollagen,P1NP)、β-Ⅰ型胶原C末端肽(C-terminal telopeptides of typeⅠcollagen,β-CTX)含量用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测;大鼠骨组织的骨密度(bone mineral density,BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(trabecularNumber,Tb.N)和骨小梁分离度(trabecularSeparation/Spacing,Tb.Sp)采用微计算机断层扫描技术(micro CT)检测;骨组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、Janus蛋白酪氨酸激酶2(Janus Protein Tyrosine Kinase2,JAK2)、信号转导与转录活化因子3(Signal Transducers and Activators of Transcription 3,STAT3)mRNA及蛋白的表达分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测。结果治疗前与空白组相比,模型组、假电针组、电针组大鼠BMD、PBG值明显升高(P<0.01或P<0.05),GIR明显降低(P<0.01);治疗结束后,与空白组相比,电针组大鼠BM、FBG、PBG、β-CTX、IL-6、JAK2、STAT3 mRNA及蛋白浓度明显升高(P<0.01),GIR、P1NP、BMD、BV/TV、Tb.N和Tb.Sp明显降低(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠的BM、PBG、β-CTX、IL-6、JAK2、STAT3 mRNA及蛋白浓度均明显降低,BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Sp、GIR均明显升高(P<0.05或P<0.01);假电针组大鼠BM、PBG、JAK2 mRNA、STAT3蛋白表达明显降低(P<0.05),而P1NP、β-CTX、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Sp、IL-6、STAT3 mRNA、IL-6、JAK2蛋白表达均无统计学差异(P>0.05)。结论电针能够通过调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路降低机体炎症反应改善胰岛素抵抗,并能一定程度的降低机体破骨细胞活性,减少骨吸收。

有氧运动干预非酒精性脂肪肝小鼠肝脏JAK2/STAT5信号通路的变化

背景:酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路在脂质代谢中起重要作用,运动有效预防与治疗非酒精性脂肪肝与改善内脏脂质沉积和脂质代谢密切相关。目的:探讨有氧运动对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路的影响及可能作用机制。方法:6周龄C57BL/6雄性小鼠48只,分为普通膳食组及高脂膳食诱导组(n=24),第10周末2组各随机抽取4只进行油红O染色观察肝脏病理形态变化。确定造模成功后,普通膳食组随机分为普通膳食+安静组、普通膳食+运动组(n=10);高脂膳食诱导组随机分为非酒精性脂肪肝+安静组、非酒精性脂肪肝+运动组(n=10),连续干预8周,直至实验结束。观察小鼠肝脏病理形态变化,检测小鼠肝脏组织泌乳素受体、肝脏酪氨酸激酶2、信号传导及转录激活因子5a、肝脏酪氨酸激酶2磷酸化、信号传导及转录激活因子5磷酸化蛋白表达量。结果与结论:(1)与普通膳食+安静组相比,非酒精性脂肪肝+安静组肝细胞脂肪变性加重,肝脏内酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子信号通路蛋白表达量降低;(2)与非酒精性脂肪肝+安静组相比,非酒精性脂肪肝+运动组的肝细胞脂肪变性减轻,肝脏内酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路蛋白表达量升高;(3)肝脏病理形态指标与催乳素受体、肝脏酪氨酸激酶2、肝脏酪氨酸激酶2磷酸化、信号传导及转录激活因子5磷酸化均呈显著负相关(P<0.05);(4)提示有氧运动干预可通过调节非酒精性脂肪肝小鼠肝脏酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路,改善肝内脂质沉积及肝脏脂肪变性程度。

益气活血清热解毒方通过JAK/STAT信号通路对动脉粥样硬化的影响及其分子机制

目的探讨益气活血清热解毒方通过酪氨酸蛋白激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号通路对动脉粥样硬化(AS)的影响及其分子机制。方法选取6~8周龄载脂蛋白(Apo)E基因缺陷小鼠62只,随机分成6组:普通饲料对照组、模型对照组、益气活血组、清热解毒组、辛伐他汀组、益气活血清热解毒组。观察小鼠一般情况;测定血脂、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素(IL)-6水平。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法比较不同处理对AS斑块中IL-6、JAK1、STAT3、细胞因子信号转导抑制蛋白(SOCS)3表达的影响。结果与普通饲料对照组比较,模型对照组体重显著降低(P<0.05);与模型对照组比较,益气活血组、辛伐他汀组、清热解毒组体重显著升高(P<0.05);益气活血清热解毒组小鼠体重极显著升高(P<0.01)。与普通饲料对照组比较,模型对照组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著降低,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)水平显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,益气活血组、辛伐他汀组、清热解毒组HDL-C水平显著升高,LDL-C、TG、TC水平显著降低(P<0.05);益气活血清热解毒组HDL-C水平极显著升高,LDL-C、TG、TC水平极显著降低(P<0.01)。与普通饲料对照组比较,模型对照组小鼠hs-CRP、IL-6水平显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,益气活血组、辛伐他汀组、清热解毒组hs-CRP、IL-6水平显著降低(P<0.05);益气活血清热解毒组hs-CRP、IL-6水平极显著降低(P<0.01)。与普通饲料对照组比较,模型对照组IL-6、JAK1、STAT3、SOCS3 mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,益气活血组、辛伐他汀组、清热解毒组IL-6、JAK1、STAT3、SOCS3 mRNA表达水平显著降低(P<0.01);益气活血清热解毒组IL-6、JAK1、STAT3、SOCS3 mRNA表达水平极显著降低(P<0.01)。结论益气活血清热解毒方通过JAK/STAT信号影响AS的发生发展。

中医药靶向调控IL-6/JAK/STAT3通路的抗消化系统肿瘤研究进展

就近年来白细胞介素6/非受体酪氨酸蛋白激酶/信号转导和转录激活因子3(interleukin-6/janus activated kinase/signal transducer and activator of transcription 3,IL-6/JAK/STAT3)信号通路在多种消化系统肿瘤中发挥的效应、中药单体及其活性成分、中药复方对与IL-6/JAK/STAT3信号通路调控有关的消化系统肿瘤中的防治作用进行综述,探究中医药在延缓、阻抑甚至逆转炎-癌转化中发挥的作用,为防治肿瘤提供更有力的理论指导。

JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路对脑卒中的影响

信号转导和转录激活因子3(STAT3)是信号转导和转录激活因子的一种,其作用体现在细胞信号的交流和基因的转录等方面,Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/STAT3/缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号通路对脑卒中的影响极为重要。然而,JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路在大脑中所起到的具体作用,尤其是在脑卒中之后是保护或是损害,至今仍无定论。该文阐述JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的激活或抑制在脑卒中(特别是脑缺血再灌注)中所发挥的作用,提出脑卒中急性期抑制JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的表达、康复期激动JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的表达、抑制与激动的结合运用可能是今后对JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的研究方向。

JAK2/STAT3信号通路调控细胞自噬水平对胃癌血管生成的影响机制研究

目的:基于酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路调控细胞自噬水平,观察其对胃癌血管生成的影响机制。方法:利用Human Protein Atlas和GEPIA数据库在线分析胃癌组织及正常组织JAK2、STAT3的表达水平、患者预后生存情况。免疫组化检测正常胃组织、胃癌组织及癌旁组织标本p-JAK2、p-STAT3的表达水平,并分析p-JAK2、p-STAT3表达水平与患者临床病理参数的关系。利用脂质体转染法将靶向JAK2的miR-375转染至BGC-823细胞并分为3组,control组、si-mimic NC组、si-JAK2组。采用qRT-PCR检测JAK2、STAT3 mRNA表达水平;Western blot检测p-JAK2、p-STAT3、微管相关蛋白轻链3(LC3)、酵母自噬相关基因6的哺乳动物同源体(Beclin1)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平;透射电镜观察细胞自噬泡的形成;血管形成实验检测细胞血管生成能力。结果:Human Protein Atlas和GEPIA在线数据库显示胃癌组织JAK2、STAT3的表达水平高于正常组织,且JAK2、STAT3表达越高,预后生存期越短(P<0.05)。免疫组化结果显示胃癌组织p-JAK2、p-STAT3的表达水平明显高于癌旁组织和正常胃组织(P<0.05)。p-JAK2、p-STAT3表达越高,肿瘤越大,浸润深度越严重,分化程度越低,淋巴结越容易发生转移。细胞实验显示,与control组和si-mimic NC组相比,si-JAK2组细胞p-JAK2、p-STAT3、VEGF水平明显降低,LC3、Beclin1表达水平、自噬能力明显升高,血管生成能力明显降低(P<0.05)。control组和si-mimic NC组上述差异无统计学意义(P>0.05)。结论:JAK2、STAT3在胃癌组织和细胞中表达量均升高,具有促癌作用,可能通过激活JAK2/STAT3信号通路抑制细胞自噬水平、增加血管生成能力,为调控自噬途径治疗胃癌提供新思路。

白细胞介素-6和JAK2/STAT3信号通路在急性肺损伤中的作用

急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是一种引起肺内皮和上皮屏障破坏的急性炎症疾病,临床表现为肺浸润、低氧血症和肺水肿,现在被重新归类为中度或轻度急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。ALI是常见的呼吸系统疾病,更是重症患者发病和死亡的重要原因,在全球范围内病死率居高不下,其发病机制尚未完全阐明。但越来越多证据集中在炎症激活、细胞凋亡、氧化应激损伤、凝血功能异常等方面。非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)信号通路在调控细胞凋亡、增殖、分化和炎症反应中起重要作用。炎症细胞因子白细胞介素(IL)-6可激活JAK2/STAT3通路,介导炎症因子的进一步释放,引发级联放大的炎症反应参与ALI发生、发展等多个环节,被认为是ALI发展过程中的关键信号通路之一。本文以IL-6、JAK2/STAT3信号通路为对象,阐明其介导的信号通路在ALI发展中的作用及研究进展。

miR-373调控JAK3/STAT6信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞M2极化对肺癌细胞的影响

目的:探究miR-373调控JAK3/STAT6信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)M2极化对肺癌细胞的影响。方法:利用佛波酯及IL-4诱导M2-TAMs分化;将miR-NC和miR-373分别转染M0/M2-TAMs并检测M2-TAMs特征性基因mRNA和miR-373水平;将M0/M2-TAMs与A549、H1299细胞共培养;CCK-8、划痕实验、Transwell实验分别检测肺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力;双荧光素酶实验验证miR-373与JAK3的调控关系;RT-qPCR检测细胞JAK3、STAT6 mRNA水平;Western blot检测细胞Ki67、MMP-2/9、p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6水平。30只裸鼠尾静脉注射已转染慢病毒的A549细胞悬液;检测裸鼠肺组织病理变化;RT-qPCR检测肺组织JAK3、STAT6 mRNA水平;Western blot检测CD31、VEGFA、M2-TAMs特征性基因及pJAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平。结果:成功诱导M2-TAMs中CD206及IL-10、Mrc1、Arg1、Ym1、Fizz1、CCL2 mRNA表达增加;与M2+miR-NC组相比,M2+miR-373组IL-10、Mrc1、Arg1、Ym1、Fizz1、CCL2 mRNA和Ki67、MMP-2/9蛋白表达明显降低,A549、H1299细胞增殖、侵袭和迁移能力明显降低(P<0.05);JAK3、STAT6 mRNA和p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平明显降低(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-373组裸鼠肺部病理损伤明显缓解;M2-TAMs特征性基因蛋白水平明显降低;JAK3、STAT6 mRNA和p-JAK3/JAK3、p-STAT6/STAT6蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论:miR-373通过抑制JAK3/STAT6信号通路抑制TAMs向M2极化,从而抑制肺癌细胞增殖、侵袭、转移和血管生成。

JAK-STAT信号通路阻断剂AG490对肺癌细胞凋亡的影响

目的探讨酪氨酸激酶(JAK)-信号转导及转录激活因子(STAT)信号转导通路阻断剂α-氰基-(3,4-羟基)N-苄苯乙烯胺(AG490)对肺癌Lewis细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法不同浓度AG490(0、20、40、80、160μmol/L)作用于肺癌Lewis细胞24、48 h,噻唑蓝(MTT)实验观察各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测0、40、80μmol/L组细胞凋亡率,Western印迹检测0、80μmol/L组细胞STAT3、STAT5、Survivin蛋白表达。结果 AG490作用24和48 h,与0μmol/L组相比,20、40、80、160μmol/L组细胞的增殖抑制率显著升高(P<0.05);与20μmol/L组相比,40、80和160μmol/L组显著增高(P<0.05),40μmol/L组与80、160μmol/L组差异显著(P<0.05)。20、40μmol/L组在24 h时细胞增殖抑制率显著低于48 h(P<0.05),80和160μmol/L组在24 h时与48 h时无统计学差异(P>0.05)。作用24和48 h时,40、80μmol/L组细胞凋亡率显著高于0μmol/L组(P<0.05),80μmol/L组显著高于40μmol/L组;40、80μmol/L组作用24 h的细胞凋亡率显著低于48 h(P<0.05)。80μmol/L组细胞中STAT3、STAT5、Survivin的表达量均显著低于0μmol/L组(P<0.05)。结论一定浓度和时间范围内,AG490可显著抑制细胞的增殖,促进其凋亡,阻断JAK-STAT通路中STAT3、STAT5蛋白的表达水平,进而降低其下游凋亡抑制蛋白Survivin的表达可能是其作用机制之一。

基于JAK-STAT信号通路探讨首乌益智胶囊对血管性认知障碍神经保护机制

目的探讨首乌益智胶囊治疗血管性认知障碍(VCI)的功效及作用机制。方法随机将SD大鼠分为假手术组、VCI模型组、尼莫地平组、首乌益智胶囊组,通过Morris水迷宫实验观察空间学习及记忆能力,透射电镜观察海马神经元细胞结构,Western印迹检测海马区p-Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK2)、JAK2、p-信号转录与转录激活因子(STAT)3、STAT3蛋白表达。结果水迷宫实验显示,与尼莫地平组相比,首乌益智胶囊组逃避潜伏期显著缩短,过站台次数显著增加(P<0.01)。透射电镜观察发现,与尼莫地平组比较,首乌益智胶囊组神经元结构更加完整,胞质内细胞器更加丰富。Western印迹检测发现,与模型组及尼莫地平组相比,首乌益智胶囊组海马区p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白表达显著提高(P<0.01,P<0.05)。结论首乌益智胶囊通过调节JAK-STAT信号通路保护大鼠海马神经元免受缺血再灌注损伤,抑制神经元凋亡,从而改善VCI大鼠的学习与认知能力。

重楼醇提取物通过JAK/STAT信号通路对神经胶质瘤U251细胞增殖及凋亡影响的研究

目的:探讨重楼醇提取物通过酪氨酸激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号通路对人神经胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响。方法:用重楼醇提取物溶液干预人神经胶质瘤细胞U251细胞,然后采用MTT法检测重楼醇提取物对U251细胞生长增殖的影响。使用AnnexinⅤ-FITC/PI染色检测重楼醇提取物对U251细胞周期及凋亡的影响。Western blot及RT-PCR法检测重楼醇提取物对U251细胞磷酸化酪氨酸激酶2 (p-JAK2)、磷酸化信号传导及转录激活因子3 (p-STAT3)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白及JAK2、STAT3、Cyclin D1、Bcl-2 mRNA表达的影响。结果:与空白组比较,重楼醇提取物各剂量组细胞抑制率、24 h后细胞凋亡率显著增加(P<0.05),且随着剂量的增加而增加(P<0.05,P<0.01);p-JAK2、p-STAT3、Cyclin D1及Bcl-2蛋白及JAK2、STAT3、Cyclin D1、Bcl-2 mRNA表达量均显著降低(P<0.05),且均随着剂量的增加而降低(P<0.05,P<0.01)。结论:重楼醇提取物可明显抑制人神经胶质瘤U251细胞的增殖,促进其凋亡,且其作用机制可能与重楼醇提取物阻滞JAK/STAT信号通路的信号传导,抑制通路蛋白及mRNA合成有关。

lncRNA ARAP1-AS2通过JAK2/STAT3信号通路对小鼠糖尿病肾病的影响

目的探讨lncRNA锚蛋白重复和pH结构域/反义RNA(ARAP1-AS)2通过酪氨酸激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路对糖尿病肾病的影响及其机制。方法将MPC-5细胞分为对照组、高糖组、高糖+pcDNA3.1组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2组、高糖+AG490组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2+AG490组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测MPC-5细胞凋亡率;Western印迹检测细胞增殖核抗原KI67、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3、酪氨酸激酶(JAK)2、磷酸化(p)-JAK2、信号转导和转录激活因子(STAT)3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ARAP1-AS2和突触孔蛋白(Synaptopodin)、结蛋白(Desmin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA的表达水平。结果与对照组比较,高糖诱导的MPC-5细胞的存活率及KI67表达水平明显降低,细胞凋亡率及Caspase3表达水平明显升高,Synaptopodin mRNA表达水平明显降低,Desmin mRNA、Vimentin mRNA表达水平明显升高,p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3表达水平明显升高,ARAP1-AS2表达水平明显降低(P<0.05);过表达ARAP1-AS2后,高糖诱导的MPC-5细胞的存活率及KI67表达水平明显升高,细胞凋亡率及Caspase3表达水平明显降低,Synaptopodin mRNA表达水平明显升高,Desmin mRNA、Vimentin mRNA表达水平明显降低,p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3表达水平明显降低(P<0.05)。JAK2/STAT3信J号通路抑制剂AG490增强了ARAP1-AS2对高糖诱导的足细胞增殖、凋亡及Synaptopodin、Desmin、Vimentin表达的影响。结论过表达lncRNA ARAP1-AS2可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路促进MPC-5细胞存活,抑制高糖诱导的足细胞损伤。

蕨麻乙醇提取物通过JAK2/STAT3信号通路对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞损伤的作用

目的探讨蕨麻乙醇提取物通过酪氨酸激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路对心肌缺血再灌注(I/R)大鼠心肌细胞损伤的作用。方法选取雄性SD大鼠100只随机分为对照(control)组、模型(I/R)组和低、中、高剂量药物处理组。对照组正常饲喂大鼠;模型组建立大鼠心肌I/R模型;低、中、高剂量药物处理组分别使用0.9、1.8、3.6 g/kg的蕨麻乙醇提取物灌胃建模后的大鼠。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及乳酸脱氢酶(LDH)水平;Western印迹检测酶切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase)-3、JAK2、磷酸化(p)-JAK2、STAT3、磷酸化(p)-STAT3蛋白表达水平。结果I/R处理后心肌细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,MDA、LDH水平显著升高,SOD水平显著降低(P<0.05);低、中、高剂量蕨麻乙醇提取物处理后可明显抑制I/R处理的心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及氧化应激作用,明显促进心肌细胞增殖(P<0.05);I/R处理的心肌细胞中p-JAK2、p-STAT3蛋白表达显著降低(P<0.05),而低、中、高剂量蕨麻乙醇提取物处理后p-JAK2、p-STAT3蛋白表达显著升高(P<0.05);JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG490处理心肌细胞后,细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,MDA、LDH水平显著升高,SOD水平显著降低(P<0.05)。结论蕨麻乙醇提取物可能通过激活JAK2/STAT3信号通路减轻I/R处理的心肌细胞损伤。

毛蕊异黄酮介导GP130/JAK/STAT通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响

目的探究毛蕊异黄酮介导糖蛋白(GP)130/Janus酪氨酸蛋白激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子(STAT)通路对脊髓星形胶质细胞损伤的影响。方法原代分离大鼠脊髓星形胶质细胞,并利用免疫荧光检测胶原纤维酸性蛋白(GFAP)。分别加入50、100、150μmol/L毛蕊异黄酮预处理脊髓星形胶质细胞12 h,然后加入H_(2)O_(2)处理24 h造氧化损伤模型,CCK8检测各组细胞增殖情况,选择合适的毛蕊异黄酮处理浓度。实验分组:空白对照(Control)组、模型(H_(2)O_(2))组、模型+毛蕊异黄酮预处理(H_(2)O_(2)+Calycosin)组、模型+毛蕊异黄酮预处理+抑制剂Ly294002(H_(2)O_(2)+Calycosin+Ly294002)组、模型+毛蕊异黄酮处理+抑制剂Stattic(H_(2)O_(2)+Calycosin+Stattic)组。CCK8检测各组细胞增殖情况,流式检测各组细胞凋亡和周期情况,免疫荧光检测各组细胞样本中Brdu水平;Western印迹检测各组细胞中p-JAK2、p-STAT3、p-蛋白激酶B(AKT)、GP130、白细胞介素(IL)-6蛋白表达水平。结果H_(2)O_(2)处理能够抑制脊髓星形胶质细胞的增殖并诱导其凋亡,氧化损伤模型细胞组中p-JAK2、p-STAT3、p-AKT、GP130、IL-6的蛋白表达水平显著增加,而毛蕊异黄酮预处理后能够减轻H_(2)O_(2)造成的氧化损伤,促进增殖和抑制凋亡,并显著抑制p-JAK2、p-STAT3、p-AKT、GP130、IL-6蛋白表达水平(P<0.05)。结论蕊异黄酮能够促进氧化损伤的星形胶质细胞增殖并抑制其凋亡,并能通过抑制磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/AKT通路磷酸化、JAK2/STAT3通路磷酸化起作用。

黄芩苷对慢性萎缩性胃炎小鼠JAK1、STAT3表达的影响

【目的】通过网络药理学和动物实验探讨黄芩苷对慢性萎缩性胃炎小鼠胃黏膜的修复机制。【方法】(1)应用网络药理学预测分析黄芩苷治疗慢性萎缩性胃炎的潜在关键靶点。(2)动物实验:将40只C57BL/6N小鼠随机分为正常组、模型组、维酶素组、黄芩苷组,每组10只。除正常组,其他3组小鼠采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)灌胃结合饥饱失常法构建慢性萎缩性胃炎模型。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察胃黏膜组织病理变化,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中胃泌素(GAS)和前列腺素E2(PGE2)水平变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测胃黏膜组织中Janus酪氨酸激酶1(JAK1)、信号转导和转录激活子3(STAT3)的mRNA与蛋白表达水平。【结果】网络药理学结果显示,黄芩苷与核心靶点JAK1、STAT3可自发结合。动物实验结果显示:与正常组比较,模型组小鼠胃黏膜组织发生萎缩,腺体排列紊乱,存在大量淋巴细胞,胃黏膜细胞凋亡指数显著升高(P<0.05),血清中GAS与PGE2水平显著降低(P<0.05),胃黏膜组织中JAK1、STAT3的mRNA与蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,维酶素组与黄芩苷组小鼠胃黏膜病变减轻,腺体排列相对整齐,结构较完整,胃黏膜细胞凋亡指数显著降低(P<0.05),血清中GAS与PGE2水平显著升高(P<0.05),胃黏膜组织中JAK1、STAT3的mRNA与蛋白表达水平显著降低(P<0.05);黄芩苷组上述各指标与维酶素组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】黄芩苷可有效修复慢性萎缩性胃炎小鼠胃黏膜病变,其机制可能与下调JAK1、STAT3的mRNA及蛋白表达有关。

麻黄附子细辛汤联合环磷酰胺对肺癌大鼠JAK/STAT通路的作用

目的研究麻黄附子细辛汤联合环磷酰胺对肺癌大鼠Janus酪氨酸蛋白激酶/信号转导及转录激活因子(JAK/STAT)通路的调节作用。方法60只大鼠随机分为空白对照组、肺癌组、麻黄附子细辛汤组、环磷酰胺组及联合组各12只,除空白对照组,其余大鼠采用尾静脉注射Walker-256细胞法建立肺癌大鼠模型,麻黄附子细辛汤组灌胃给予麻黄附子细辛汤(3 g/kg),环磷酰胺组腹腔注射环磷酰胺(0.05 g/kg),联合组同时给予麻黄附子细辛汤及环磷酰胺,1次/d,连续8 w,末次给药24 h后取肺组织测定肺湿重、肿瘤抑制率,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡率,苏木素-伊红染色法检查肺病理变化,实时定量聚合酶链反应(PCR)、免疫组化及Western印迹分别检测肺组织JAK2、STAT3 mRNA及蛋白水平变化。结果与肺癌组比较,麻黄附子细辛汤组、环磷酰胺组及联合给药组肺湿重、肺组织JAK2、STAT3 mRNA及蛋白水平显著降低,肿瘤细胞凋亡率显著升高(均P<0.05),与麻黄附子细辛汤及环磷酰胺单独给药组比较,联合给药组肺湿重、肺组织JAK2、STAT3 mRNA及蛋白水平显著降低,肿瘤抑制率及肿瘤细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。结论麻黄附子细辛汤联合环磷酰胺能够促进抑制肺癌大鼠肿瘤进展,促进肿瘤细胞凋亡,其机制可能与调节JAK/STAT通路有关。

肿瘤坏死因子α与白细胞介素6和白细胞介素10及相关信号通路在类风湿关节炎合并抑郁症中的研究进展

类风湿关节炎(RA)是一种以某些促炎性细胞因子过度分泌为特征的自身免疫性破坏性关节炎。细胞因子是一种小而半衰期短的蛋白质,在免疫反应和炎症过程中对各种刺激的反应起关键作用。复杂的细胞和细胞因子网络参与RA的发病机制。目前研究表明肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10通过相同的信号通路丝裂原活化蛋白激酶和/或酪氨酸激酶/信号转导和转录激活因子参与RA及RA患者抑郁症的病理过程。因此,类风湿关节炎患者比一般人群有更高的抑郁患病率。通过特异性阻断这些细胞因子及相应的信号转导通路可以为RA合并抑郁症提供新的治疗靶点。