PIM1基因对急性髓系白血病U937细胞增殖、凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:探讨PIM1基因对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡的影响,以及对JAK2/STAT3通路的调控作用。方法:收集初诊成人AML患者和单纯缺铁性贫血患者的骨髓单个核细胞,荧光定量PCR检测PIM1 mRNA表达。将AML细胞系U937细胞分为:U937组(U937细胞正常培养)、Si-PIM1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、Si-NC组(U937细胞转染不含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、CoA1组(U937细胞中加入浓度为20μmol/L的JAK2激活剂CoA1)、Si-PIM1+CoA1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA低表达的腺病毒载体并加入浓度为20μmol/L的CoA1)。培养24 h。荧光定量PCR和蛋白印迹法检测U937细胞PIM1 mRNA和蛋白、JAK2/STAT3通路、细胞周期、凋亡相关蛋白表达;噻唑蓝法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率。结果:AML患者骨髓单个核细胞中PIM1 mRNA表达水平高于单纯缺铁性贫血患者(P<0.05)。与U937组相比,Si-PIM1组细胞PIM1 mRNA和蛋白、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Cyclin D1、CDK2蛋白、细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例降低(均P<0.05),p27、Caspase-3蛋白、G0/G1期、凋亡率升高(均P<0.05),而CoA1组上述指标的变化情况与Si-PIM1组正好相反,CoA1可逆转Si-PIM1对U937细胞的作用效果。U937组、Si-PIM1+CoA1组、Si-NC组U937细胞上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低PIM1基因表达可抑制U937细胞增殖、促进凋亡,缓解ALM进程,且上述作用可能与抑制JAK2/STAT3通路活化有关。

苦豆碱调节IL-6/JAK1/STAT3信号通路对结直肠癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:探讨苦豆碱(ALO)调节IL-6/酪氨酸激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路对结直肠癌(CRC)细胞行为的影响。方法:SW480分为CK组(正常培养的SW480细胞)、ALO低剂量组(ALO-L组,0.2 mmol/L)、ALO中剂量组(ALO-M组,0.4 mmol/L)、ALO高剂量组(ALO-H组,0.8 mmol/L)、ALO-H+激活剂(IL-6激活剂重组人IL-6蛋白)组(0.8 mmol/L+100 ng/ml)。CCK-8、平板克隆实验检测SW480细胞增殖;流式细胞术检测SW480细胞凋亡;Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、IL-6、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达。将自然杀伤细胞NK-92MI分别与上述5组细胞共培养,并依次命名为CK共培养组、ALO-L共培养组、ALO-M共培养组、ALO-H共培养组、ALO-H+激活剂共培养组,检测共培养细胞上清液中TNF-α、IFN-γ水平及共培养体系中NK-92MI的免疫杀伤率。结果:与CK组相比,ALO-L组、ALO-M组、ALO-H组OD_(450)值、克隆形成率、PCNA、IL-6、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达降低,细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,且呈剂量依赖性(P<0.05);与ALO-H组相比,ALO-H+激活剂组SW480细胞OD_(450)值、克隆形成率、PCNA、IL-6、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达升高,细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低(P<0.05);ALO-L共培养组、ALO-M共培养组、ALO-H共培养组上清中TNF-α、IFN-γ水平、NK-92MI细胞免疫杀伤率高于CK共培养组,且呈剂量依赖性(P<0.05);与ALO-H共培养组相比,ALO-H+激活剂共培养组上清中TNF-α、IFN-γ水平、细胞免疫杀伤率降低(P<0.05)。结论:ALO可能通过抑制IL-6/JAK1/STAT3信号通路抑制SW480细胞增殖、免疫逃逸,促进细胞凋亡。

苦参碱对妊娠高血压大鼠内皮损伤和JAK2/STAT3/SOSC1信号通路的影响

目的探讨苦参碱对妊娠高血压(PIH)大鼠内皮损伤及酪氨酸蛋白激酶2/信号转导子和转录激活子3/细胞因子信号转录抑制因子1(JAK2/STAT3/SOSC1)信号通路的影响。方法将60只孕鼠随机分成正常对照组、模型对照组、低剂量苦参碱组、高剂量苦参碱组、硫酸镁组,每组12只。正常对照组之外的各组孕鼠在妊娠第12天通过灌胃50 mg/kg亚硝基左旋精氨酸甲酯构建PIH大鼠模型。在妊娠第16天,低、高剂量苦参碱组分别灌胃50、100 mg/kg苦参碱,硫酸镁组灌胃100 mg/kg硫酸镁,正常对照组和模型对照组则灌胃等体积的生理盐水。分别使用大鼠无创血压计和考马斯亮蓝法检测各组孕鼠妊娠第16天(给药前)、第17天、第21天的尾动脉血压及24 h尿蛋白含量;酶联免疫分析试剂盒检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10、内皮素(ET)、血栓素B2(TXB2)、一氧化氮(NO)、6酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)水平;蛋白免疫印迹法检测大鼠胎盘组织中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOSC1蛋白表达水平。结果妊娠第17、21天,模型对照组孕鼠血压、24 h尿蛋白含量明显高于正常对照组(P<0.05),低、高剂量苦参碱组孕鼠血压、24 h尿蛋白含量明显比模型对照组低(P<0.05)。与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清中SOD、IL-10、NO和6-keto-PGF1α水平降低,MDA、TNF-α、IL-6、ET和TXB2以及胎盘组织中p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、SOSC1蛋白水平升高(P<0.05);与模型对照组相比,低、高剂量苦参碱组SOD、IL-10、NO和6-keto-PGF1α依次增加,MDA、TNF-α、IL-6、ET和TXB2以及胎盘组织中p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、SOSC1蛋白水平依次降低(P<0.05);与硫酸镁组相比,高剂量苦参碱组上述指标均无明显改变(P>0.05)。结论苦参碱降低PIH模型大鼠血压、尿蛋白含量、炎症反应及氧化应激水平,抑制JAK2、STAT3磷酸化及SOSC1蛋白表达,进而缓解PIH大鼠内皮损伤。

蛋白酪氨酸磷酸酶受体D通过STAT3途径影响肝癌细胞PD-L1表达的机制研究

背景与目的:蛋白酪氨酸磷酸酶受体D(protein tyrosine phosphatase receptor type delta,PTPRD)和程序性死亡[蛋白]配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)在肝癌组织的异常表达与肿瘤侵袭和转移有关。信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription-3,STAT3)通路在癌症中起着关键作用,影响免疫系统的许多方面,STAT3异常激活与PTPRD和PD-L1的异常表达密切相关,然而PTPRD和PD-L1的相关性目前鲜见文献报道。探讨PTPRD和PD-L1在肝癌组织中的表达相关性,进一步在肝癌细胞中观察PTPRD是否可调控PD-L1。方法:采用免疫组织化学法分析2018年10月-2019年1月广西医科大学附属肿瘤医院肝二病区收治的原发性肝癌并经手术治疗的16例肝癌患者的肿瘤标本及其癌旁标本中PTPRD和PD-L的蛋白水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测同一标本PTPRD和PD-L1 mRNA的表达,分析两者的相关性。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测过表达或沉默PTPRD对PD-L1、STAT3和p-STAT3蛋白水平的影响。采用RTFQ-PCR检测PTPRD过表达对PD-L1转录水平的影响。结果:肝癌组织中PTPRD的表达显著低于癌旁组织(P<0.05),PD-L1表达显著高于癌旁组织(P<0.05),两者表达呈负相关性(r2=0.275 8,P=0.036 7);PTPRD过表达时,PD-L1、STAT3和p-STAT3蛋白的表达水平下降(P<0.05),PTPRD沉默时,PD-L1的表达增高。结论:PTPRD和PD-L1表达水平在肝癌中呈负相关,PTPRD可能通过STAT3信号通路调节PD-L1的表达。PTPRD有望成为肝癌免疫治疗新靶点。

抑制JAK2/STAT3信号通路对肺癌细胞A549中HIF-1α、VEGF和miRNA-145表达的影响

目的探讨抑制Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活子3(STAT3)信号通路对人肺腺癌细胞株A549中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和微RNA145(miRNA-145)表达的影响。方法采用Western blotting和RT-PCR技术检测经不同浓度Jak2/STAT3特异性抑制剂AG490处理或转染靶向STAT干扰小RNA(siRNA)A549细胞(AG490组和siRNA-STAT组)中HIF-1α、VEGF和miRNA-145蛋白和mRNA的表达变化。以未经AG490处理及未转染细胞作为空白对照组,转染无关序列siRNA细胞作为阴性对照组。结果与空白对照组比较,AG490组A549细胞中miRNA-145的表达显著上调(P<0.05),HIF-1α和VEGF蛋白和mRNA的表达随着AG490浓度的增高而逐渐降低。与空白对照组和阴性对照组比较,siRNA-STAT组A549细胞中STAT3蛋白、磷酸化STAT3蛋白的表达及HIF-1α、VEGF mRNA的表达明显下调,而miRNA145的表达显著升高(P<0.05)。结论在人肺腺癌细胞A549中,抑制JAK2/STAT3信号通路可使miRNA-145的表达上调,而HIF-1α和VEGF的表达下调。

JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路对脑卒中的影响

信号转导和转录激活因子3(STAT3)是信号转导和转录激活因子的一种,其作用体现在细胞信号的交流和基因的转录等方面,Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/STAT3/缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号通路对脑卒中的影响极为重要。然而,JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路在大脑中所起到的具体作用,尤其是在脑卒中之后是保护或是损害,至今仍无定论。该文阐述JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的激活或抑制在脑卒中(特别是脑缺血再灌注)中所发挥的作用,提出脑卒中急性期抑制JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的表达、康复期激动JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的表达、抑制与激动的结合运用可能是今后对JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的研究方向。

清肺口服液黄酮类组分对呼吸道合胞病毒感染小鼠IFN-α/JAK1/STAT1信号通路的影响

目的基于IFN-α/JAK1/STAT1信号通路探讨清肺口服液黄酮类组分抗呼吸道合胞病毒(RSV)感染的作用机制。方法36只雌性清洁级BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、利巴韦林组及清肺口服液黄酮类组分低、中、高剂量组(黄酮组分低、中、高剂量组),每组6只。除正常组外,其余组经鼻予RSV病毒液造模,造模成功后给药,各给药组予相应药物灌胃,正常组和模型组予等体积生理盐水,共4 d。HE染色观察小鼠肺组织病理变化,ELISA检测血清α干扰素(IFN-α)含量,RT-PCR检测肺组织RSV-F、Janus酪氨酸蛋白激酶1(JAK1)和信号传导与转录激活因子1(STAT1)mRNA表达,Western blot及免疫组化染色检测肺组织JAK1和STAT1蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠肺组织明显充血,有大量炎性细胞浸润,血清IFN-α含量明显增加(P<0.001),肺组织RSV-F、JAK1和STAT1 mRNA表达明显升高(P<0.01),JAK1和STAT1蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.001)。与模型组比较,利巴韦林组及黄酮组分各剂量组小鼠肺组织病理损伤状况明显改善,肺组织RSV-F mRNA表达明显降低(P<0.05);黄酮组分高剂量组血清IFN-α含量明显增加,肺组织JAK1和STAT1 mRNA及蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论清肺口服液黄酮类组分具有抗RSV感染作用,其机制可能与上调IFN-α表达,激活JAK1/STAT1信号通路,增强机体免疫功能有关。

黄芩苷对慢性萎缩性胃炎小鼠JAK1、STAT3表达的影响

【目的】通过网络药理学和动物实验探讨黄芩苷对慢性萎缩性胃炎小鼠胃黏膜的修复机制。【方法】(1)应用网络药理学预测分析黄芩苷治疗慢性萎缩性胃炎的潜在关键靶点。(2)动物实验:将40只C57BL/6N小鼠随机分为正常组、模型组、维酶素组、黄芩苷组,每组10只。除正常组,其他3组小鼠采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)灌胃结合饥饱失常法构建慢性萎缩性胃炎模型。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察胃黏膜组织病理变化,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中胃泌素(GAS)和前列腺素E2(PGE2)水平变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测胃黏膜组织中Janus酪氨酸激酶1(JAK1)、信号转导和转录激活子3(STAT3)的mRNA与蛋白表达水平。【结果】网络药理学结果显示,黄芩苷与核心靶点JAK1、STAT3可自发结合。动物实验结果显示:与正常组比较,模型组小鼠胃黏膜组织发生萎缩,腺体排列紊乱,存在大量淋巴细胞,胃黏膜细胞凋亡指数显著升高(P<0.05),血清中GAS与PGE2水平显著降低(P<0.05),胃黏膜组织中JAK1、STAT3的mRNA与蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,维酶素组与黄芩苷组小鼠胃黏膜病变减轻,腺体排列相对整齐,结构较完整,胃黏膜细胞凋亡指数显著降低(P<0.05),血清中GAS与PGE2水平显著升高(P<0.05),胃黏膜组织中JAK1、STAT3的mRNA与蛋白表达水平显著降低(P<0.05);黄芩苷组上述各指标与维酶素组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】黄芩苷可有效修复慢性萎缩性胃炎小鼠胃黏膜病变,其机制可能与下调JAK1、STAT3的mRNA及蛋白表达有关。

lncRNA ARAP1-AS2通过JAK2/STAT3信号通路对小鼠糖尿病肾病的影响

目的探讨lncRNA锚蛋白重复和pH结构域/反义RNA(ARAP1-AS)2通过酪氨酸激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路对糖尿病肾病的影响及其机制。方法将MPC-5细胞分为对照组、高糖组、高糖+pcDNA3.1组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2组、高糖+AG490组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2+AG490组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测MPC-5细胞凋亡率;Western印迹检测细胞增殖核抗原KI67、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3、酪氨酸激酶(JAK)2、磷酸化(p)-JAK2、信号转导和转录激活因子(STAT)3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ARAP1-AS2和突触孔蛋白(Synaptopodin)、结蛋白(Desmin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA的表达水平。结果与对照组比较,高糖诱导的MPC-5细胞的存活率及KI67表达水平明显降低,细胞凋亡率及Caspase3表达水平明显升高,Synaptopodin mRNA表达水平明显降低,Desmin mRNA、Vimentin mRNA表达水平明显升高,p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3表达水平明显升高,ARAP1-AS2表达水平明显降低(P<0.05);过表达ARAP1-AS2后,高糖诱导的MPC-5细胞的存活率及KI67表达水平明显升高,细胞凋亡率及Caspase3表达水平明显降低,Synaptopodin mRNA表达水平明显升高,Desmin mRNA、Vimentin mRNA表达水平明显降低,p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3表达水平明显降低(P<0.05)。JAK2/STAT3信J号通路抑制剂AG490增强了ARAP1-AS2对高糖诱导的足细胞增殖、凋亡及Synaptopodin、Desmin、Vimentin表达的影响。结论过表达lncRNA ARAP1-AS2可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路促进MPC-5细胞存活,抑制高糖诱导的足细胞损伤。

毛蕊异黄酮介导GP130/JAK/STAT通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响

目的探究毛蕊异黄酮介导糖蛋白(GP)130/Janus酪氨酸蛋白激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子(STAT)通路对脊髓星形胶质细胞损伤的影响。方法原代分离大鼠脊髓星形胶质细胞,并利用免疫荧光检测胶原纤维酸性蛋白(GFAP)。分别加入50、100、150μmol/L毛蕊异黄酮预处理脊髓星形胶质细胞12 h,然后加入H_(2)O_(2)处理24 h造氧化损伤模型,CCK8检测各组细胞增殖情况,选择合适的毛蕊异黄酮处理浓度。实验分组:空白对照(Control)组、模型(H_(2)O_(2))组、模型+毛蕊异黄酮预处理(H_(2)O_(2)+Calycosin)组、模型+毛蕊异黄酮预处理+抑制剂Ly294002(H_(2)O_(2)+Calycosin+Ly294002)组、模型+毛蕊异黄酮处理+抑制剂Stattic(H_(2)O_(2)+Calycosin+Stattic)组。CCK8检测各组细胞增殖情况,流式检测各组细胞凋亡和周期情况,免疫荧光检测各组细胞样本中Brdu水平;Western印迹检测各组细胞中p-JAK2、p-STAT3、p-蛋白激酶B(AKT)、GP130、白细胞介素(IL)-6蛋白表达水平。结果H_(2)O_(2)处理能够抑制脊髓星形胶质细胞的增殖并诱导其凋亡,氧化损伤模型细胞组中p-JAK2、p-STAT3、p-AKT、GP130、IL-6的蛋白表达水平显著增加,而毛蕊异黄酮预处理后能够减轻H_(2)O_(2)造成的氧化损伤,促进增殖和抑制凋亡,并显著抑制p-JAK2、p-STAT3、p-AKT、GP130、IL-6蛋白表达水平(P<0.05)。结论蕊异黄酮能够促进氧化损伤的星形胶质细胞增殖并抑制其凋亡,并能通过抑制磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/AKT通路磷酸化、JAK2/STAT3通路磷酸化起作用。

氯沙坦对糖尿病大鼠肾小球信号蛋白JAK2和STAT3表达的影响

目的探讨血管紧张素1型受体拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾小球信号蛋白Janus酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)与信号转导子和转录激活子3(STAT3)表达的影响。方法雄性Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组、糖尿病组和氯沙坦治疗组。腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病大鼠模型,每日灌胃氯沙坦10mg/kg。采用蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测肾小球细胞JAK2、STAT3和磷酸化STAT3(pSTAT3)蛋白的表达,免疫沉淀和Westernblot检测磷酸化JAK2(pJAK2)情况,逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测肾小球细胞JAK2和STAT3mRNA的表达。结果在2周和4周时,糖尿病组较对照组肾小球JAK2、pJAK2、STAT3、pSTAT3蛋白及其JAK2和STAT3mRNA表达明显增强(P均<0.01)。氯沙坦治疗组较糖尿病组pJAK2和pSTAT3表达降低(P<0.05)。氯沙坦对JAK2和STAT3蛋白及其mRNA的表达无明显影响。结论JAK2和STAT3信号蛋白可能参与了糖尿病早期肾脏的发病过程,氯沙坦对肾脏保护作用可能部分是通过影响JAK/STAT信号途径的激活而实现的。

基于JAK2/ERK1/2/STAT3信号通路探讨滋水清肝饮对皮质酮代替饮水抑郁模型小鼠干预作用

目的:通过酪氨酸激酶2(JAK2)/细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路探究滋水清肝饮对皮质酮(CORT)代替饮水小鼠抑郁模型的干预作用。方法:除正常对照组外,用皮质酮代替饮水建立抑郁模型,造模21 d后根据糖水偏好结果随机分为模型对照组、盐酸氟西汀0.01 g/kg组、滋水清肝饮8.84、17.67、35.34 g/kg组,各组分别灌胃给药14 d。每周给药结束后进行糖水偏好试验及行为学试验,HE染色观察小鼠海马形态学改变;免疫荧光染色检测小鼠海马小胶质细胞标志物离子钙结合衔接分子-1(Iba-1)荧光强度,并统计其数量;检测小鼠血清和海马中丙二醛(MDA)、5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NA)、CORT含量;qRT-PCR法检测小鼠海马组织中肿瘤坏死因子-α(Tnfα)、白细胞介素1β(Il1b)mRNA的表达;Western blot法检测小鼠海马组织JAK2、p-JAK2、ERK1/2、p-ERK1/2、STAT3和p-STAT3蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组小鼠糖水偏好率降低;小鼠不动时间延长,运动路程、运动时间和平均速度降低,在边缘区域停留时间增加(P<0.05或P<0.01),海马神经细胞变形,轮廓模糊;海马DG区Iba-1荧光强度增强,数量增加,血清和海马中的5-HT和NA含量降低,MDA和CORT含量升高,小鼠海马Tnfα、Il1b mRNA表达上调,p-JAK2和p-STAT3蛋白表达上调,p-ERK1/2蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,给药各组小鼠糖水偏好率提高,小鼠的不动时间缩短,运动路程、运动时间和平均速度明显增加,在边缘区域的停留时间明显降低(P<0.05或P<0.01),神经细胞改善,形态基本恢复正常;海马DG区Iba-1荧光强度降低,数量减少;血清和海马中的5-HT和NA含量升高,MDA和CORT含量降低;小鼠海马Tnfα、Il1b mRNA表达下调,p-JAK2和p-STAT3蛋白表达下调,p-ERK1/2蛋白表达上调,其中以滋水清肝饮17.67 g/kg组最为明显(P<0.05或P<0.01)。结论:滋水清肝饮能显著改善皮质酮代替饮水小鼠的抑郁样行为,减轻炎症反应,改善HPA轴紊乱,其作用机制可能与调控小鼠海马JAK2/ERK1/2/STAT3信号通路有关。

卵巢癌中SOCS-1基因的研究进展

卵巢癌是最常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一,其病因不明,病死率居首位。细胞因子信号抑制物(SOCS)家族是一类由细胞产生的负性调节因子,能反馈性阻断细胞因子信号转导过程。SOCS-1对白血病抑制因子、抑瘤素M、γ干扰素、促血小板生成素、生长激素和白细胞介素6的信号传递过程起到抑制作用,并在多种细胞信号转导通路中起重要作用。SOCS-1异常表达与多种恶性疾病的发生、发展密切相关。

蓝莓益生菌通过影响IL-22/JAK1/STAT3信号通路改善非酒精性脂肪肝的研究

目的研究蓝莓益生菌通过对白细胞介素-22(IL-22)调控的酪氨酸蛋白激酶-1(JAK1)/信号转导激活转录因子-3(STAT3)信号通路的影响,进一步探明其改善非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的作用机制。方法清洁级SD大鼠40只分为正常对照组(NG)、观察组(MG)、蓝莓组(BG)、益生菌组(PG)和蓝莓+益生菌组(BPG)。除NG(100%普通饮食)外,其余大鼠均采用复合高脂饲料制备脂肪肝模型共12周。确认造模成功后再将剩余MG大鼠分为BG、PG及BPG,共观察8周。结果 BPG与MG、BG及PG比较:肝脏指数、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)显著下降(P<0.01),高密度脂蛋白(HDL)显著升高(P<0.01);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-22:BPG的蛋白水平较MG、BG、PG增高(P<0.01);定量反转录酶-聚合酶链锁反应(qRT-PCR):BPG的JAK1、STAT3的表达较MG、BG、PG显著升高(P<0.01),胆固醇调节元件蛋白-1c(SREBP-1c)表达显著降低(P<0.01);Western blot:BPG的IL-22、JAK1、STAT3的表达较MG、BG、PG显著升高(P<0.01),SREBP-1c表达明显减少(P<0.01)。结论蓝莓益生菌能有效改善NAFLD的病理组织结构,减轻肝细胞脂肪变性,其机制可能是蓝莓益生菌可增加肝脏IL-22的表达,激活下游的JAK1/STAT 3信号通路,下调SREBP-1c的基因表达,抑制SREBP-1c的作用,增强胆固醇代谢,减少脂质沉积,是NAFLD的一个辅助治疗方案。

毛蕊异黄酮介导GP130/JAK/STAT信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响

目的探究毛蕊异黄酮介导糖蛋白130(GP130)/Janus酪氨酸蛋白激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子(STAT)信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响。方法原代分离大鼠脊髓星形胶质细胞,并利用免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)进行鉴定。分别加入5、10、20μmol·L^(-1)毛蕊异黄酮预处理脊髓星形胶质细胞12 h,然后加入100μmol·L^(-1)过氧化氢(H_(2)O_(2))处理24 h造成氧化损伤模型,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测各组细胞增殖情况选择合适的毛蕊异黄酮处理浓度。实验分为空白组、模型组(H_(2)O_(2)100μmol·L^(-1))、毛蕊异黄酮组(毛蕊异黄酮20μmol·L^(-1))、毛蕊异黄酮+LY294002组(毛蕊异黄酮20μmol·L^(-1)+LY29400210μmol·L^(-1))、毛蕊异黄酮+Stattic组(毛蕊异黄酮20μmol·L^(-1)+Stattic 3μmol·L^(-1))。CCK-8法、免疫荧光检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3、p-蛋白激酶B(Akt)、GP130、白细胞介素-6(IL-6)的蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组细胞的增殖活力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与模型组比较,毛蕊异黄酮(20μmol·L^(-1))组细胞的增殖活力明显增加,细胞凋亡率明显降低(P<0.05);与毛蕊异黄酮(20μmol·L^(-1))组比较,PI3K抑制剂LY294002和STAT3抑制剂Stattic均能明显降低细胞的增殖活力,增加细胞凋亡率(P<0.05)。与空白组比较,模型组细胞中p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平明显增加(P<0.05);与模型组比较,各用药组p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论毛蕊异黄酮能够促进氧化损伤的星形胶质细胞增殖并抑制其凋亡,并能通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt通路磷酸化、JAK2/STAT3通路磷酸化起作用。

同型半胱氨酸对人冠状动脉内皮细胞中组织蛋白酶V和炎症因子表达的影响机制

目的分析体外不同浓度同型半胱氨酸(Hcy)介导蛋白激酶C(PKC)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/信号转导及转录激活因子1(STAT1)信号通路对人冠状动脉内皮细胞(HCAECs)中组织蛋白酶V(CTSV)和炎症因子表达的影响机制。方法实验分为4组,即对照组(生理盐水)、低浓度组(Hcy 1 mmol/L)、中浓度组(Hcy 5 mmol/L)和高浓度组(Hcy 10 mmol/L), 4组不同溶液分别与HCAECs共培养72 h。采用四氮唑蓝盐化合物(MTS)法检测细胞活力,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测PKC、MAPK、STAT1和CTSV相对表达量,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测炎症因子[血管内皮细胞生长因子受体-1(VEGFR-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)]表达水平。结果与对照组、低浓度组相比,中浓度组、高浓度组细胞活力升高,PKC、MAPK、STAT1和CTSV相对表达量增加,VEGFR-1、TNF-α和IL-1β表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);高浓度组PKC、MAPK、STAT1、CTSV相对表达量和VEGFR-1、TNF-α、IL-1β表达水平及细胞活力均高于中浓度组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组与低浓度组各指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Hcy水平升高可激活HCAECs中PKC/MAPK/STAT1信号通路影响CTSV和炎症因子表达,且呈浓度依赖性。Hcy高表达与川崎病导致冠状动脉损伤有关,为疾病的临床干预提供了重要靶点。

ADRM1对胰腺癌细胞增殖和转移的影响及相关机制研究

目的探讨黏附调节分子1(ADRM1)对胰腺癌细胞增殖和转移的影响及其相关机制。方法GEPIA数据库分析胰腺癌中的ADRM1 mRNA表达水平及其对患者预后的影响。EdU、CCK-8、Transwell实验分析抑制或过表达ADRM1对胰腺癌细胞增殖和转移的影响。采用生物信息学分析及Western blot探讨ADRM1调控胰腺癌细胞增殖和转移的相关机制。结果ADRM1 mRNA在胰腺癌中高表达,其表达水平与患者总生存率无关,与患者无病生存率有关,ADRM1 mRNA高水平组无病生存率低于ADRM1 mRNA低水平组。抑制ADRM1可以减弱胰腺癌细胞增殖和转移能力,过表达ADRM1可以增强胰腺癌细胞增殖和转移能力。ADRM1可以激活JAK酪氨酸蛋白激酶2-信号传导和转录激活因子3(JAK2-STAT3)信号通路。结论ADRM1作为促癌因子,在胰腺癌中高表达并促进胰腺癌细胞增殖和转移,其机制可能与激活JAK2-STAT3信号通路有关。

胃癌肿瘤相关巨噬细胞内SHP2通过抑制STAT3-TGFβ通路进而减轻PD-L1表达

目的:探究肿瘤相关巨噬细胞内含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶(SHP2)对胃癌内细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)表达的影响及其机制。方法:将人单核/巨噬细胞THP-1细胞、人胃癌细胞系SGC-7901细胞培养后,THP-1细胞诱导分化为巨噬细胞,采用慢病毒感染的方法构建稳定敲低和过表达SHP2基因的THP-1细胞,与SGC-7901细胞非接触式共培养,将其分为对照(NC)组和SHP2-shRNA组、NC组和SHP2-mimic组、Stattic(STAT3抑制剂)+NC组和Stattic+SHP2-shRNA组。利用超速离心法提取THP-1细胞上清液外泌体,免疫印迹检测THP-1细胞中STAT3-TGFβ通路相关蛋白及外泌体CD9和TGFβ蛋白表达情况,免疫印迹检测SGC-7901细胞STAT3-TGFβ通路相关蛋白及PD-L1、p-STAT3、IL-10、PTEN和p-PI3K蛋白表达情况,CCK-8检测SGC-7901细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果:THP-1细胞中,SHP2-shRNA组SHP2蛋白表达水平显著低于NC组,p-STAT3、IL-10和TGFβ及外泌体中CD9和TGFβ蛋白表达水平显著高于NC组;SHP2-mimic组SHP2蛋白表达水平显著高于NC组,p-STAT3、IL-10和TGFβ及外泌体中CD9和TGFβ蛋白表达水平显著低于NC组。共培养的SGC-7901细胞中,SHP2-shRNA组SHP2和PTEN蛋白表达水平显著低于NC组,p-STAT3、TGFβ、PD-L1和p-PI3K蛋白表达水平及细胞增殖活性、迁移和侵袭能力显著高于NC组;Stattic干预后,SHP2蛋白表达水平未被影响,PTEN蛋白表达水平增加,p-STAT3、TGFβ、PD-L1和p-PI3K蛋白表达水平及细胞增殖活性、迁移和侵袭能力降低,Stattic+NC组和Stattic+SHP2-shRNA组之间差异无统计学意义。结论:肿瘤相关巨噬细胞SHP2通过抑制胃癌细胞内STAT3-TGFβ通路活性抑制PD-L1和p-PI3K表达,进而抑制胃癌细胞增殖活性及迁移和侵袭能力,从而延缓胃癌进展。

JAK1/STAT1/p21通路在姜黄素诱导结肠癌细胞HCT116周期阻滞中的作用

目的:探讨姜黄素对人结肠癌HCT116细胞周期阻滞的影响及其可能的分子作用机制。方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测姜黄素(0、12.5、25、50、75、100μmol·L^(-1))和5-氟尿嘧啶(5-FU)(600μmol·L^(-1))处理不同时间(24、48、72 h)对HCT116细胞增殖的影响;流式细胞术检测姜黄素(0、25、50、75μmol·L^(-1))和5-FU对HCT116细胞周期的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HCT116细胞中Janus酪氨酸蛋白激酶1(JAK1)/信号传导及转录激活因子1(STAT1)/细胞周期依赖性激酶抑制因子1A(p21)通路相关蛋白表达的影响;染色质免疫沉淀法(ChIP)检测STAT1与p21启动子区的结合情况;采用小干扰核糖核酸(siRNA),分别通过Western blot和细胞免疫荧光检测STAT1在调控p21表达中的作用及JAK1蛋白在调控STAT1活化中的作用。结果:与空白组比较,姜黄素各组和5-FU组HCT-116细胞活性明显降低(P<0.05)。与空白组比较,姜黄素组和5-FU组DNA合成前期(G0/G1)细胞比例明显升高(P<0.05),DNA复制期(S)和DNA合成后期(G2/M)细胞比例及磷酸化p21(p-p21)蛋白水平明显降低(P<0.05),p21蛋白表达明显升高(P<0.05)。与姜黄素组比较,p21 siRNA+姜黄素组G0/G1期细胞明显降低(P<0.05)。与空白组比较,姜黄素处理后细胞中磷酸化STAT1(p-STAT1)水平明显升高(P<0.05)。与姜黄素组比较,姜黄素+STAT1 siRNA组HCT116细胞中p21蛋白表达水平升高(P<0.05)。机制研究表明,与空白组比较,姜黄素处理明显增强了STAT1蛋白在p21启动子区的富集(P<0.05)。与空白组比较,姜黄素处理后细胞中磷酸化JAK1(p-JAK1)水平明显升高(P<0.05)。与姜黄素组比较,姜黄素+STAT1 siRNA组HCT116细胞中的p-STAT1和p21蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论:姜黄素诱导的人结肠癌HCT116细胞周期阻滞,其机制可能与激活JAK1/STAT1/p21信号通路有关。

基于JAK1/STAT1信号通路研究流感“肺脑传变”的分子机制及麻杏石甘汤干预作用

目的基于Janus酪氨酸蛋白激酶1/信号转导和转录激活因子1(JAK1/STAT1)信号通路研究流感“肺脑传变”的分子机制,并进一步探讨麻杏石甘汤(MXSGT)的干预作用。方法SPF级BALB/c小鼠100只,随机分为正常组、模型组、奥司他韦组、抗病毒颗粒组和MXSGT组,每组20只。除正常组常规饲养外,其余4组以A型流感病毒(IAV)滴鼻感染构建小鼠IAV肺炎模型,造模24 h后,各药物治疗组分别予以奥司他韦(21.63 mg·kg^(-1)·d^(-1))、抗病毒颗粒(3.9 g·kg^(-1)·d^(-1))、MXSGT(6.05 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,正常组和模型组以等量生理盐水灌胃,每天1次,连续给药3、7 d。苏木素-伊红(HE)染色观察肺、脑组织病理变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺、脑组织中IAV核蛋白(NP)及JAK1、STAT1 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺、脑组织中JAK1、STAT1蛋白表达水平;免疫组化法检测肺、脑组织中磷酸化(p)-STAT1表达水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)的水平。结果与正常组比较,模型组小鼠肺组织及大脑皮质出现明显病理变化;肺部IAV NP mRNA相对表达量显著增加(P<0.01);肺组织和脑组织中JAK1、STAT1 mRNA和蛋白表达水平明显增加(P<0.05,P<0.01);肺组织和大脑皮质中p-STAT1表达水平明显增加(P<0.05,P<0.01);血清中IL-1β表达量明显增加(P<0.05)。与模型组比较,MXSGT组小鼠肺组织及大脑皮质病理损伤减轻;肺组织IAV NP mRNA相对表达量显著降低(P<0.01);肺组织和脑组织中JAK1、STAT1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);血清中IL-10水平显著增加(P<0.01)。结论JAK1/STAT1信号通路异常活化可能是流感“肺脑传变”的分子机制之一,MXSGT作为有效的抗流感病毒中药复方,可通过调控该通路介导的细胞因子水平的变化缓解IAV肺部感染小鼠的脑组织病理损伤。