CE-EMMA法测定乙脑灭活疫苗中乙二胺四乙酸二钠残留量

目的:建立毛细管电泳(CE)结合电泳中介微分析(EMMA)测定乙脑灭活疫苗中乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)残留量的方法。方法:运行缓冲液为0.025 mol•L^(-1)磷酸氢二钠缓冲液(pH 2.5),在线络合金属离子为1.5 mg•mL Fe^(3+),孵育时间3 min,分离电压-25 kV,紫外检测波长257 nm,压力进样5000 Pa×5 s,检测温度为25.0℃。结果:EDTA-2Na在0.01~0.5 mg•mL^(-1)的浓度范围内呈现良好的线性关系,r为0.9999,最低检测限为5μg•mL^(-1),测定样品RSD小于2.87%,加样回收率为94.13%~105.56%。结论:该方法操作简便,准确度高,稳定性好,可用于乙脑灭活疫苗中EDTA-2Na残留量的测定。

流行性乙型脑炎减毒活疫苗生产毒种(SA14-14-2株)及其疫苗的表型和E基因稳定性研究

目的 对乙脑减毒活疫苗SA14 14 2株生产毒种及其疫苗病毒滴度、脑内毒力和E区核苷酸序列进行回顾性测定。方法 应用乳金黄地鼠肾传代细胞 (BHK 2 1)结晶紫蚀斑法进行病毒滴度的测定 ,小鼠脑内法检测疫苗脑内毒力。应用RT PCR方法扩增SA14 14 2生产毒种和疫苗E区的核苷酸 ,经凝胶层析纯化的PCR产物直接用于测序或克隆到pGEM T载体中 ,经酶切和PCR鉴定后进行测序。结果 疫苗在 - 2 0℃保存长达 10多年 ,疫苗病毒滴度下降不超过 0 5lg;脑内毒力未见毒力回升。病毒蚀斑形态仍保持较SA14野毒株形态小的特性 ;以不同批次疫苗和生产毒种提取的病毒RNA作为模板进行RT PCR扩增 ,扩增的基因片段与预期大小一致 ;E区基因序列与野毒株差异的 8个氨基酸没有一个发生回复突变。结论 SA14 14

两种流行性乙型脑炎疫苗的安全性和免疫效果观察

目的观察乙型脑炎(乙脑)减毒活疫苗和Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗(Vero细胞乙脑疫苗)的安全性和免疫效果。方法在湖南省沅江市和衡东县筛选8～20月龄无乙脑疫苗免疫史(基础免疫组)和1.5～3岁完成了基础免疫(加强免疫组)的二组健康儿童作为观察对象。沅江市的观察对象接种乙型脑炎减毒活疫苗,衡东县的观察对象接种Vero细胞乙脑疫苗。然后从每个市县的二组观察对象中抽取部分对象检测免疫前和免疫后1个月血清乙脑中和抗体滴度,并观察其接种不良反应。结果乙型脑炎减毒活疫苗接种不良反应总发生率为5.2%;Vero细胞乙脑疫苗接种不良反应总发生率为8.8%。两种疫苗的接种不良反应以全身发热为主,分别占不良反应的95.4%和92.3%,发热72h后恢复正常。乙型脑炎减毒活疫苗基础免疫后抗体阳性率为82.5%,抗体几何平均滴度(GMT)为1:23.1;加强免疫后抗体阳性率为93.2%,GMT为1:28.6。Vero细胞乙脑疫苗基础免疫后抗体阳性率为83.2%,GMT为1:25.1;加强免疫后抗体阳性率为93.7%,GMT为1:32.4。结论乙型脑炎减毒活疫苗和Vero细胞乙脑疫苗安全、有效,可在预防控制乙脑工作中推广使用。

乙型脑炎病毒SA_(14)-14-2减毒疫苗株的生物学和基因稳定性

目的研究乙型脑炎病毒(JEV)SA14-14-2减毒疫苗株传代过程中的生物学和基因稳定性,为疫苗的安全性和免疫原性提供依据。方法将JEVSA14-14-2减毒疫苗株PHKC7代病毒在原代地鼠肾细胞(PHKC)上连续传代,检测各代次病毒的培养特性以及第8、12、17和22代病毒的安全性及免疫原性;对起止代次病毒(PHKC8和22代)进行全基因组序列测定,对中间代次病毒(PHKC12和17代)的结构蛋白基因进行测序,并与基因库乙脑病毒SA14-14-2株(D90195)比较。结果各代次病毒产生的细胞病变基本一致,病毒滴度在17代前较稳定;在BHK21细胞上形成的蚀斑形态一致;小鼠脑内的致病力未发生变化,乳鼠传代返祖试验高代次病毒毒力有升高趋势。8、12、17和22代病毒免疫小鼠后,对P3强毒攻击均具有保护作用。E蛋白核苷酸和氨基酸序列,PHKC8代与D90195完全一致;而PHKC12、17和22代出现单个碱基(第2142或2143位)突变,导致E389氨基酸改变(D→N或D→A),但并非回复突变。4个代次病毒的PrM-C区结构蛋白基因均未发生变化。PHKC8、22代病毒的其他核苷酸突变发生在基因组非结构蛋白区和3′端非编码区;全序列PHKC8和22代与D90195比较,发现7～8个核苷酸不同,导致3～4个氨基酸的差异,核苷酸和氨基酸的同源性分别大于99.93%和99.88%,且以上突变不存在于明确的相关减毒位点上。结论JEVSA14-14-2减毒疫苗株在PHKC上连续传15代,仍保持高度的生物学和基因稳定性,疫苗生产用病毒控制在10代以内较为安全。

流行性乙型脑炎减毒活疫苗对国内外不同野毒株的免疫性

目的 研究乙型脑炎减毒活疫苗对国内外不同野毒株的免疫原性。方法 用小鼠保护力试验和空斑减少中和试验检测该疫苗对国内外不同野毒株攻击的保护作用及其免疫血清的中和能力。结果 小鼠免疫 1针后均能抵抗国内 11株和国外 11株乙脑病毒的攻击 ,保护率均可达 90 %以上 ;人体免疫血清对台湾 1株和国外 9株病毒均有明显的中和作用。结论 SA14 142株乙脑活疫苗具有广谱的免疫原性。

流行性乙型脑炎(乙脑)活疫苗和灭活疫苗对不同乙脑毒株的免疫性

本文比较了流行性乙型脑炎(以下简称乙脑)病毒SA14-14-2株活疫苗和P3株灭活疫苗对14株乙脑病毒在小鼠体内的免疫保护作用,结果表明,14-2株活疫苗对14株病毒均有较强的保护力,最小保护剂量在4～0.3×10^(-5)ml之间;而灭活疫苗的免疫力明显低于活疫苗,最小保护剂量在10～0.3×10^(-3)ml之间,且灭活疫苗对不同毒株的保护范围不如活疫苗广,活疫苗免疫血清的被动保护作用亦明显优于灭活疫苗。

乙脑灭活与减毒活疫苗联合免疫的前瞻性研究

目的 为合理利用乙脑灭活疫苗和减毒活疫苗各自的优点 ,降低预防接种反应的发生率 ,提高免疫学效果 ,开展了乙脑灭活疫苗与减毒活疫苗联合免疫的前瞻性研究。 方法 对 6～ 11月龄初次免疫且免疫前抗体测定阴性的婴儿用灭活疫苗基础免疫 2针、次年用减毒活疫苗加强免疫 1针 ,追踪观察两年。另设立单一使用灭活疫苗组和减毒活疫苗组作为对照组 ,比较两种疫苗联合免疫与单一使用的免疫学效果。 结果 联合免疫组、灭活疫苗组和减毒活疫苗组基础免疫后的阳转率分别为 82 .3%、89.9%和 83.1% ,经统计学检验 ,差异不显著 (χ2 =3.2 2 ,n=2 ,P>0 .0 5 )。加强免疫后 ,联合免疫组中和抗体阳性率可升至 10 0 % ,与单一使用灭活疫苗组的阳性率 (95 .3% )和减毒活疫苗组的阳性率 (97.4 % )相比 ,差异不显著。 结论 对婴幼儿用灭活疫苗基础免疫 2针与减毒活疫苗加强免疫 1针的联合免疫法有很好的免疫学效果 。

流行性乙型脑炎减毒活疫苗(SA_(14)-14-2)对免疫抑制剂处理小白鼠的致病性和免疫原性

免疫抑制剂环磷酰胺处理的12—14克三周龄小白鼠免疫功能抑制后,皮下注射乙脑SA_(14)—14—2减毒活疫苗,未见小鼠出现特异性死亡。同时发现对活疫苗和死疫苗的免疫反应明显不同,处理后小鼠对活苗免疫仍有较好的免疫力,保护率为56%(三次抑制)和80％(二次抑制);而死疫苗免疫力明显下降,未抑制组为100％,抑制后降到10～20%。若小白鼠经乙脑活苗、死苗免疫后四周已建立免疫力后,再用环磷酰胺处理,并用强毒株P_3攻毒,则对免疫反应影响不明显,两种疫苗均表现有较好的保护作用。

冻干乙型脑炎减毒活疫苗的冻干工艺优化研究

为了研究优化冻干乙型脑炎减毒活疫苗的冻干工艺,运用正交试验法L934考察不同冻干参数对该疫苗成品质量的影响,以外观、残余水分、病毒滴度以及热稳定性为直观分析指标,并对病毒滴度进行方差分析。结果显示,主干燥时间和主干燥真空压力对病毒滴度的影响有显著统计学意义(P<0.05)。优化的冻干参数为预冻温度-35℃、时间2h;主干燥温度从-35℃升温至-10℃,再由-10℃升温至33℃,总耗时16h,真空压力0.220mbar;二次干燥的温度维持于30℃,真空压力为0.001mbar,终点测试压力无变化时结束。对冻干乙型脑炎减毒活疫苗冻干参数筛选优化后,可得到较佳的冻干曲线,经验证该曲线适用于生产。

乙型脑炎减毒活疫苗乳鼠传代返祖试验中稀释液的筛选

目的探讨安全试验之乳鼠传代返祖试验中稀释液对乙型脑炎减毒活疫苗的影响。方法随机选取14批乙型脑炎减毒活疫苗,分别用磷酸盐缓冲液(PBS)、最少细胞培养物质培养液(MEM)、0.5%水解乳蛋白液、199培养液4种稀释液进行乳鼠传代返祖试验。结果使用PBS组LD_(50)<1.0 Log LD_(50)/0.03 mL,小鼠没有死亡梯度;0.5%水解乳蛋白液组和MEM组出现LD_(50)>3.0 Log LD_(50)/0.03 mL,病毒毒力增强;使用199培养液组乙型脑炎病毒活疫苗毒力稳定,重复性好,无返祖现象。结论199培养液适宜作为乙型脑炎减毒活疫苗乳鼠传代返祖试验中所用的稀释液。

乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2在BHK21细胞上传代后的基因序列研究

目的:研究乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2在BHK21细胞上传代后的病毒基因序列,以深入控制乙型脑炎减毒活疫苗的安全性。方法:将乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2在BHK21细胞上连续传代,选取第二代病毒(P2)、第五代病毒(P5)、第十五代病毒(P15)提取RNA,反转录为c DNA后,进行各代病毒全基因序列分析,分析与乙型脑炎病毒毒力密切相关的关键位点基因是否发生改变。结论:乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2在BHK21细胞上传5代后,病毒E蛋白上关键基因第279位(E279)氨基酸由甲硫氨酸(M)突变为赖氨酸(K)。

表达乙型脑炎病毒E蛋白重组减毒沙门菌活载体疫苗株的构建

目的:构建表达乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株。方法:克隆JEV E基因,将其插入表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-E,将重组质粒电转入鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(缺失asd、cya、crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-E);鉴定重组菌E蛋白的表达,测定重组菌的稳定性、生长曲线、安全性,以及小鼠的免疫试验和血清中和试验。结果:酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE检测有目的蛋白条带;Western印迹证实表达的E蛋白能与猪抗JEV阳性血清特异性结合;重组菌株在体外营养选择压力下,可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可较稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾脏;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用,安全可靠;小鼠口服重组菌免疫,ELISA检测产生了抗JEV抗体;中和试验表明产生的抗体具有中和活性。结论:构建了能稳定表达JEV E蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(pYA3341-E),为研究乙型脑炎口服基因工程疫苗奠定基础。

流行性乙型脑炎减毒活疫苗人体接种反应及免疫持久性观察研究

为了进一步了解流行性乙型脑炎减毒活疫苗的接种安全性，掌握其免疫效果及免疫持久性，本研究有代表性地抽取2岁以内婴幼儿359名，并将其分为两组，分别接种乙脑灭活疫苗和动脑减毒活疫苗。经现场观察证实，两种疫苗接种后，仅极个别出现轻度接种反应，无严重反应发生，因而两种疫苗均是安全的。采用前瞻性方法研究其免疫学效果发现，基础免疫后，两种疫苗所产生的血清抗体达60％左右，但仅能维持1年，第2年需加强免疫，之后，抗体阳性率迅速提高至90％以上，减毒活疫苗高于灭活疫苗，抗体平均滴度也大为提高。经过2～3年的间隔期减毒活疫苗的抗体阳性率尚维持在80％和70％，而灭疫苗已下降在近50％和35％，提示减毒活疫苗具有更好的免疫学效果、更少的接种次数和接种剂量，适宜于大面积推广应用。根据观察结果，我们认为，乙脑灭活疫苗免疫，应基础免疫2针，间隔7～10天，第2年加强免疫1针之后，间隔1年最迟2年再加强1针。减毒活疫苗基础免疫1针，第2年加强1针，经4～5年后再加强注射。

首次接种乙型脑炎减毒活疫苗引起小儿高热1例

本文对1例首次接种乙型脑炎减毒活疫苗后引起小儿高热的不良反应进行了报道。患儿体温达到39.3℃,口服给予泰诺林及进行物理降温治疗后,患儿体温恢复正常,情况好转。

纯化乙型脑炎减毒活疫苗的免疫效果和不良反应观察

目的观察纯化乙型脑炎(乙脑)减毒活疫苗的免疫效果和不良反应。方法筛选405名8～20月龄无乙脑疫苗免疫史和419名18～36月龄并仅接种一次纯化乙型脑炎减毒活疫苗的二组健康婴幼儿为观察对象,接种纯化乙型脑炎减毒活疫苗后观察其接种不良反应,并在两组观察对象中抽取193名用细胞蚀斑减少中和试验检测免疫前和免疫后1个月血清乙脑中和抗体。结果纯化乙脑疫苗不良反应总发生率为5.22%;免疫成功率为78.9%;基础免疫后抗体阳性率为82.47%,GMT达1:23.1,1年后抗体阳性率为60.91%,GMT为1:10.9,加强免疫后1月抗体阳性率高达93.24%,GMT为1:28.6,基础、加强免疫前后抗体滴度分布、阳性率差异均有统计学意义。结论纯化乙型脑炎减毒活疫苗是一种安全、有效的乙脑疫苗,值得在控制乙脑工作中大力推广使用。

2011年至2016年河南省乙型脑炎减毒活疫苗预防接种不良反应监测

目的:分析2011年至2016年河南省乙型脑炎减毒活疫苗(JEV-L)预防接种不良反应的流行病学特征,评价JEV-L预防接种的安全性。方法:通过中国免疫规划信息管理系统,收集2011年至2016年河南省报告的JEV-L预防接种不良反应个案数据和JEV-L预防接种数据,采用描述流行病学方法进行分析。结果:2011年至2016年河南省共报告JEV-L预防接种不良反应5 236例,年平均报告发病率为25.74/10万剂。5 236例不良反应中,一般反应5 126例,占97.90%,报告发生率为25.20/10万剂;异常反应110例,占2.10%,报告发生率为0.54/10万剂。不良反应男女性别比为1.22∶1;<1岁者占60.06%;7~9月份不良反应报告最多,占32.75%;报告病例主要集中在洛阳市、郑州市和周口市等地。不良反应主要发生在第1剂次接种后和接种后<1 d。一般反应临床诊断均为发热、红肿、硬结,异常反应以过敏反应性疾病为主,有过敏性休克和脑炎病例报告。所有不良反应中,治愈或好转占99.73%。结论:河南省JEV-L预防接种安全性良好,需关注过敏性休克、脑炎等严重异常反应的发生。

乙型脑炎疫苗研发及应用研究进展

乙型脑炎是由日本脑炎病毒引起的一种人兽共患的蚊媒传染病,它对人类危害巨大,并且给养猪业造成了严重的经济损失,目前临床上还无有效的药物用于治疗该病,而接种乙型脑炎疫苗能有效预防该疫病的流行。自乙型脑炎病毒疫苗应用以来,乙型脑炎的发病率大大下降。论文介绍了乙型脑炎疫苗的发展过程及生产工艺技术,总结了灭活疫苗、减毒活疫苗以及嵌合减毒活疫苗的免疫效果、优势和不足,最后探讨了当前乙型脑炎疫苗可能存在的安全问题以及新型乙型脑炎疫苗的发展方向,以期为新型乙型脑炎疫苗的研发提供参考,为乙型脑炎的防控提供新的思路与科学依据。

乙型脑炎14-2株冻干活疫苗的生产研究

乙型脑炎病毒14-2株经地鼠肾细胞连续传23代,各代次的病毒滴度和回传乳鼠后的毒力都较稳定,与5-3株无差异。各代次的神经毒力和中枢神经外毒力也与5-3株相同。脑内感染12～14克小白鼠均不致死,皮下感染也不致病。用地鼠肾细胞经36℃培养4天,病毒增殖达到高峰,滴度为8.0～8.5logTCID50/0.2ml。病毒培养液的pH值为7.4～7.6时,病毒增殖高峰可持续3天。以1％明胶、5％蔗糖为保护剂,在冻干后无真空、不充氮的条件下。14—2株活疫苗在37℃可保存10天,室温(16～31℃)可保存4个月,5～8℃可保存一年,病毒滴度均无明显下降.冻干后充氮或不充氮病毒的滴度及稳定性看不出差异。冻干14—2株活疫苗融化后,用Eagle’s液稀释,置22～23℃8小时,滴度不变,若以生理盐水稀释,则可保持2～4小时;以蒸馏水稀释只能稳定2小时。

流行性乙型脑炎活疫苗11年的流行病学效果

目的 观察连续大面积接种流行性乙型脑炎活疫苗的流行病学效果。方法 连续观察１１年接种 乙脑活疫苗的１８２７１５人次的乙脑发病率。结果１１年内均未出现异常反应，总发病率由接种前的２１．８９／１０万下降 到２／１０万左右，保护率为９８．９９％。结论 进一步证明乙脑活疫苗安全有效。

流行性乙型脑炎活疫苗流行病学效果观察

1991年对58645名1～7岁儿童进行了乙脑活疫苗流行病学效果观察,接种乙脑活疫苗组29639人,发生乙脑2例,发病率为6.75/10万;未接种组29006人,发生乙脑46例,发病率158.59/10万,二者差异显著(x^2=39.49,P<0.005),疫苗当年保护率95.74％、保护比1:23.49,高于国内灭活疫苗报告的结果,同时,活疫苗对病情的轻重和转归有良好的影响.而且使用简便安全。