适于cDNA-AFLP的黄瓜幼叶总RNA快速高效提取方法

为了快速高效地提取黄瓜幼叶总RNA，满足于cDNA-AFLP实验的要求。对Trizol试剂提取总RNA的方法进行了改进，所提RNA经琼脂糖电泳检测，其28S、18S、5S3条带清晰，完整性好，每0．1g幼叶可获得RNA100～150μg，产率高；经反转录、双链cDNA合成和cDNA-AFLP检测，证实提取的RNA能满足反转录和cDNA-AFLP对RNA质量和数量的要求。

胡葱浸提液对莴苣、小白菜、萝卜和黄瓜化感作用初步研究

以胡葱为供体,以莴苣、小白菜、萝卜和黄瓜为受体,通过种子萌发试验及幼苗生长试验,对胡葱浸提液的化感作用进行了初步研究。结果表明,胡葱浸提液对莴苣和萝卜种子萌发具有抑制作用,对小白菜和黄瓜种子萌发影响不大;对莴苣、小白菜、萝卜和黄瓜幼苗生长整体上来说具有一定的促进作用。

一株藏红花内生真菌多糖的提取及抗氧化活性研究

目的首次由藏红花分离得到内生真菌,研究热水浸提法和超声波法提取真菌#CSL-8多糖的最佳工艺及多糖的抗氧化活性。方法通过正交实验探讨真菌多糖提取的最佳工艺,并采用DPPH法对多糖的抗氧化活性进行评价。结果 热水浸提法提取的最佳工艺参数为:提取温度95℃,料液比1∶30,提取时间4 h,粗多糖得率为9.47%,多糖含量为26.35%;超声波法提取的最佳工艺参数为:超声功率400 W,料液比1∶40,提取时间40 min,粗多糖得率为9.12%,多糖含量为57.65%。两种方法提取的多糖对DPPH自由基的`清除率IC50分别为0.15和0.11 mg/m。l结论与热水浸提法相比,超声波法提取得到的多糖含量较高,提取效果较好。抗氧化实验中,两种方法提取的多糖对DPPH自由基均有较强的清除能力,且有明显的量-效相关性。

日本菟丝子对薇甘菊的化感作用

以薇甘菊(Mikania micrantha H.B.K.)和萝卜(Raphanus sativus L.)种子为受体,采用生物检测的方法研究了菟丝子属(Cuscuta L.)植物日本菟丝子(Cuscuta japonica Choisy)鲜茎的水浸提液及其有机萃取物的化感效应。结果表明,日本菟丝子鲜茎的水浸提液对萝卜种子的萌发表现出"低促高抑"的现象,且质量浓度越高,抑制作用越强;对薇甘菊根长的抑制作用达到了极显著水平(p<0.01),综合抑制效应指数亦达到-0.32。日本菟丝子鲜茎水浸提液的有机萃取物在折算为干茎质量浓度为10mg·mL-1(即折算为每毫升溶液曾经用10mg干茎浸泡)时就对萝卜和薇甘菊种子的萌发表现出极显著的抑制作用(p<0.01),且对两种受体的抑制趋势较一致。可见供体植物日本菟丝子具有较强的化感作用,这为利用它来控制薇甘菊的入侵提供了参考依据。

黄瓜DNA提取及其RAPD-PCR反应体系的优化

利用改良的 SDS方法提取黄瓜干种子与一步法提取的黄花苗总 DNA进行 RAPD扩增 ,其结果与传统的 CTAB和 SDS的结果一样。这两种方法不仅节约成本 ,且简单快速 ,大大降低了 DNA的提取难度 ,适宜黄瓜杂交种子纯度鉴定。不同组织材料对 RAPD无影响。研究了 RAPD的影响因素 ,改进及优化了 RAPD反应程序。结果表明 :Mg2 +浓度的范围为 1.5～ 3.0 mmol· L- 1 ,d NTPs浓度范围为 0 .15～ 0 .2 5 mmol· L- 1 ,Taq聚合酶浓度范围为 0 .5～ 1.5 U,模板DNA浓度为 2 0～ 10 0 ng,反应以及引物浓度为 0 .2～ 0 .4μmol· L- 1 。引物的碱基组成以及不同存放时间的引物对 RAPD扩增也有影响。 DNA预变性 94℃进行 4 min,94℃变性 30 s,37℃退火 30 s,72℃延伸 1min,循环 35次后

黄瓜基因组DNA提取及AFLP体系优化研究

[目的]提取黄瓜基因组DNA,并对AFLP体系进行优化。[方法]以黄瓜嫩叶为材料,利用改进的CTAB法提取高质量的黄瓜叶片总DNA,通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件建立适合黄瓜的AFLP银染体系,得到清晰的黄瓜AFLP指纹图谱。[结果]DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应,改良的CTAB提取法可用于黄瓜AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹。优化的酶切连接体系为:以37℃酶切连接12 h为宜,酶切连接的基因组DNA用量为200ng,预扩增时Taq酶用量为0.5U/20μl体系,预扩增产物稀释40倍作为选择性扩增的模板。在此优化的体系下引物E41M47扩增出清晰的条带。[结论]为黄瓜品种的分子标记和黄瓜品种间亲缘关系等研究奠定了基础。

白萝卜提取物对胃电起搏区缝隙连接的影响

目的探讨白萝卜提取物(Raphanus sativus Lextract,Ecr)促胃肠动力作用机制。方法20只SD大鼠随机平均分为A(Ecr)组、B(0.9%氯化钠对照)组,分别灌服Ecr和等体积0.9%氯化钠。1h后用免疫组织化学方法观察胃体胃电起搏区肌间神经丛铺片缝隙连接蛋白Cx43表达的变化。并用透射电镜观察缝隙连接超微结构的特征。结果缝隙连接蛋白Cx43表达明显增加(P<0.05);Cajal间质细胞与平滑肌之间有明显的缝隙连接结构,且观察到一种与平滑肌细胞之间形成的类似突触样结构的特殊联系。结论白萝卜提取物促胃肠动力作用可能与胃电起搏区缝隙连接蛋白Cx43表达增加及缝隙连接功能增强有关。

大葱根系浸提液对樱桃萝卜化感作用的影响研究

[目的]为了解决内蒙古中部地区春季大葱收获后种植樱桃萝卜的问题,初步探讨了大葱根系浸提液对樱桃萝卜种子发芽及幼苗生长的化感作用。[方法]将大葱根系浸提液稀释为5、10、20、30 mg/ml 4个浓度,分别处理樱桃萝卜种子,进行恒温发芽试验,测定发芽势、发芽率、活力指数、胚根长、苗高、根冠比等指标,最后计算化感作用的综合效应指数。[结果]5～30 mg/ml大葱根系浸提液对樱桃萝卜种子发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数和幼苗胚根长均有显著的抑制作用,仅对幼苗的苗高产生显著促进作用;综合化感效应为化感抑制作用,且随着浸提液浓度的升高,对樱桃萝卜的化感效应强度增加。[结论]不同浓度大葱根系浸提液对樱桃萝卜的发芽和幼苗生长有抑制作用,且随着处理浓度升高,化感作用加强。

莱菔提取物对胃肠运动的影响

目的采用电生理学的实验方法,观察莱菔提取物(Raphanus sativus.L extract,Rex)对胃电活动和小肠消化期间移行性运动复合波(Migrating motility complex,MMC)的影响,并与促进胃肠道运动的经典药物吗丁啉和西沙比利进行对比,探讨莱菔提取物的促胃肠动力作用。方法采用旋转蒸发的方法,制备莱菔提取物。采用电生理学的方法,记录给予不同的药物对胃肠电活动的影响。结果莱菔提取物对胃电的波幅和频率的影响,与吗丁啉组相比,没有显著性差异。莱菔提取物对小肠MMC的影响与西沙比例相比差异不显著。结论莱菔提取物对胃肠道运动的影响,与经典促胃肠动力药物的作用相当。

西红花柱头、雄蕊和花瓣的挥发性化学成分GC-MS分析

目的 :分析西红花柱头、雄蕊和花瓣浸膏的化学成分,为其应用提供科学依据。方法 :分别采用正己烷、石油醚和乙醚对西红花柱头、雄蕊和花瓣进行浸提,浓缩制成浸膏;GC-MS进行分析,采用色谱峰面积归一化法计算各组分的相对含量,根据谱库检索结合谱图解析鉴定化学成分。结果 :柱头部分鉴定出39个化合物,占总量88.62%;花瓣部分鉴定出32个化合物,占总量84.71%;雄蕊部分鉴定出39个化合物,占总量79.02%;花瓣与雄蕊浸膏的化学成分类似,与柱头部分相差较大。结论 :柱头部分以萜类化合物及其衍生物为主,而雄蕊和花瓣部分则以脂肪烃化合物为主,他们分别占各自萃取化合物总量的57.94%,47.86%和36.50%。

白萝卜提取物促胃动力作用机制

目的探讨白萝卜提取物(Raphanus sativus L extract,Ecr)促胃肠动力作用机制。方法20只SD大鼠随机分为A(Ecr)组、B(0·9%氯化钠对照)组,分别灌服Ecr和等体积0·9%氯化钠,1h后,免疫组织化学方法和放免法分别观察胃电起搏区P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)表达的变化。结果SP免疫阳性神经及产物的表达明显增加(P<0·05);CGRP免疫阳性神经及产物的表达明显减少(P<0·05)。结论白萝卜提取物的促胃肠动力作用可能与局部及血浆中SP、CGRP量的变化有密切关系。

藏红花挥发性化学成分的气相色谱-质谱分析

通过分析藏红花挥发性化学成分,为藏红花的开发利用提供科学依据.采用同时蒸馏-萃取法提取藏红花挥发油,用气相色谱法分离,质谱法鉴定结构.结果表明藏红花挥发油的含量为4.30%,鉴定出46种化学成分,其中烯烃、烯烃氧化物及酸类化合物含量较高.

正交设计优化藏红花苷提取工艺

为了优化藏红花苷的提取工艺,以藏红花苷的提取率为指标,在用单因素试验方法考察乙醇浓度、超声时间、超声温度、料液比对藏红花中藏红花苷提取率的基础上,应用正交试验优化藏红花苷提取工艺。结果表明:最佳的提取工艺是乙醇浓度60%,超声时间40min,超声温度40℃,料液比1∶30。在此条件下,藏红花中藏红花苷的提取率较高。

茉莉根醇浸膏对大鼠镇痛作用及机制研究

目的:探讨茉莉根醇浸膏对大鼠福尔马林致痛实验的镇痛作用及其可能机制。方法:采用70%乙醇室温浸泡制备茉莉根醇浸膏;采用福尔马林实验观察大鼠Ⅰ相与Ⅱ相的疼痛反应;用紫外分光光度法测定福尔马林实验大鼠血清中PGE2含量;Elisa法测定皮层、丘脑和海马中5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)含量来研究药物的可能镇痛机制。结果:茉莉根醇浸膏能明显减轻福尔马林致痛大鼠Ⅰ相与Ⅱ相的疼痛反应;茉莉根醇浸膏不能降低福尔马林实验大鼠血清中PGE2的含量,但能明显升高大鼠皮层和丘脑中5-HT含量,也能明显升高皮层、丘脑和海马中DA和NE的含量;结论:茉莉根醇浸膏对大鼠福尔马林致痛实验具有镇痛作用,其镇痛机制与外周炎性致痛因子PGE2无关,与升高皮层和丘脑中5-HT含量,以及升高皮层、丘脑与海马中DA和NE含量有关。

藏红花药物高能超声提取的工艺参数优化

高能超声空化效应运用于中药成分提取的关键问题是工艺设计的科学性。为揭示超声空化效应的作用机制,探索藏红花超声提取工艺的最佳化,采取理论分析和实验验证,对高能超声提取中药的作用机制进行了研究,并基于藏红花提取物药用成分的HPLC检测数据,实现超声提取工艺的参数优化。研究结果表明,超声空化效应的能量特征及其作用机制是可控的。另外,依据提取物中主要成分（Crocus-I和Crocus-II）含量最大化原则,得知藏红花超声提取工艺的最佳参数为：功率密度为2.0～3.0 W/cm^3;提取时间为20～30 min。

西红花提取物中可溶性糖类成分的研究

有关西红花中溶性糖类的定量分析，尚未见报道。本文对红花提取物中糖类成分进行了鉴定和含量测定。经鉴别成发龙胆二糖和葡萄糖，并测定了５批样品可溶性糖的含量。

西红花提取物中可溶性糖类成分的研究

有关西红花中可溶性糖类的定量分析，尚未见报道。本文对西红花提取物中糖类成分进行了鉴定和含量测定。经鉴别其成分为龙胆二糖和葡萄糖，并测定了5批样品可溶性糖的含量。

响应面优化西红花中西红花苷提取工艺的研究

建立了西红花药材中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的最优提取工艺。采用乙醇-水体系超声提取西红花苷(超声功率100W),在单因素实验基础上运用响应面法优化西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ提取工艺,最佳提取工艺参数为:乙醇浓度50%、提取时间30min、提取温度45℃。在此优化的提取工艺条件下,西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ得率分别为14.12%和4.98%。该提取工艺可用于西红花中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的提取。

分散固相萃取法测定黄瓜中的喹啉铜残留量

建立了分散固相萃取(d-SPE)-高效液相色谱(HPLC)分析测定黄瓜中喹啉铜残留量的方法。样品采用乙腈和0.1 mol/L盐酸混合溶液提取,C18填料净化,高效液相色谱仪分离,紫外检测器检测。其色谱条件为:色谱柱SunFireC18(4.6×150 mm,5 m),流动相为十二烷基硫酸钠磷酸盐缓冲液乙腈(65∶35)体系,流速0.6 mL/min,检测波长250nm。结果表明:在0.02、0.2、2 mg/kg三个添加水平下,喹啉铜回收率在92.3%~107.7%之间,相对标准偏差(RSD)在2.0%~7.7%之间。该方法操作简单、灵敏度和准确度高,能够用于黄瓜中喹啉铜的残留分析。

萝卜蛋白组分析中叶片蛋白质高效提取方法

以萝卜‘NAU-JLQX09’叶片为材料,分别采用Tris-HCl/TCA-丙酮沉淀法和改进的PEG分级沉淀法提取蛋白质,通过双向凝胶电泳技术比较两种方法的效果。结果表明,应用Tris-HCl/TCA-丙酮沉淀法提取的蛋白2-DE图谱可识别出640个蛋白点;而改进的PEG分级沉降法的蛋白组分(F1,F2以及F3)2-DE图谱可清晰识别蛋白点数目分别为537,170与852,总蛋白点数目多且高丰度蛋白RuBisCO主要被沉降在F2中,F3中分离到更多的低丰度蛋白点。因此,在进行萝卜叶片蛋白质组分析时,采用PEG分级沉降法提取叶片蛋白,可获得较高质量的2-DE凝胶图谱。研究结果为应用蛋白质组学解析萝卜重要性状形成分子基础提供了良好的技术支持。