苯丁酸氮芥抗套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1作用机制的研究

目的:探讨苯丁酸氮芥抗套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1作用机制。方法:应用MTT法检测苯丁酸氮芥对Jeko-1细胞增殖的影响,Hoechst染色及Annexin V-FITC双染检测苯丁酸氮芥对Jeko-1细胞凋亡的影响,Western blot检测苯丁酸氮芥对Jeko-1细胞凋亡相关蛋白BAX,BCL-2,procaspase 3,procaspase 8,procaspase 9表达水平及PI3K/AKT信号通路的激活情况。结果:苯丁酸氮芥0、5、10和20μmol/L作用Jeko-1细胞24、48、72 h后,细胞增殖受到抑制,并呈时间及剂量依赖性(r=0.873,r=0.932)。0,5,10,20μmol/L苯丁酸氮芥作用Jeko-1细胞72 h后,细胞凋亡率显著提高,BAX,procaspase 3,procaspase 8及procaspase 9蛋白表达水平显著上调,BCL-2表达水平显著下调,PI3K蛋白及AKT磷酸化水平显著降低。结论:苯丁酸氮芥能显著诱导套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1凋亡,其作用机制与调节PI3K/AKT信号通路有关。

CD5分子对套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1化疗敏感性的影响及其机制研究

目的 研究CD5分子对套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1的化疗敏感性及其通路的影响。方法 Crispr/cas9法敲除人源套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1（P）CD5基因靶位点，构建CD5阴性Jeko-1（N）细胞。RT-PCR检测Jeko-1（P）与Jeko-1（N）中CD5-E1A与CD5-E1B的表达。MTS法检测柔红霉素、长春新碱对Jeko-1（P）与Jeko-1（N）细胞增殖抑制效应。ELISA法检测Jeko-1（P）与Jeko-1（N）中IL-10表达。Western blot法检测BAY 11-7082处理与未处理的Jeko-1（P）与Jeko-1（N）中核转录因子-κB （NF-κB）信号通路相关p-IKKβ、p-IκB、p-p65蛋白水平。ELISA法检测应用BAY11-7082处理及未处理的Jeko-1（P）与Jeko-1（N）中IL-10的表达情况。结果 Jeko-1（P）细胞表达CD5-E1A、CD5-E1B，Jeko-1（N）细胞不表达CD5-E1A、CD5-E1B，IL-10分泌减少（P〈0.05）。柔红霉素及长春新碱处理24 h和48 h后的Jeko-1（N）细胞与Jeko-1（P）细胞相比，细胞增殖抑制率增加（P〈0.05）。BAY 11-7082处理Jeko-1（P）与Jeko-1（N）细胞相比，p-IKKβ、p-IκB、p-p65（核內和核外）、IL-10表达水平差异无统计学意义（P〉0.05）。与未处理的Jeko-1（P）组相比，BAY11-7082处理的Jeko-1（P）组与Jeko-1（N）组细胞p-IKKβ、p-IκB 、p-p65（核內和核外）、IL-10 表达水平下降，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 CD5分子通过NF-κB信号通路上调套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株IL-10的分泌以影响其化疗敏感性。

CD5分子调控套细胞淋巴瘤细胞株对柔红霉素化疗敏感性的机制研究

目的探索CD5分子对套细胞淋巴瘤化疗药物敏感性的影响及其分子机制。方法Crispr／cas9法敲除人源套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1（P）的CD5基因，构建Jeko—1（N）（CD5negative）细胞；RT—PCR检测Jeko-1（P）与Jeko-1（N）细胞CD5-E1A和CD5-E1B表达；以不同浓度柔红霉素处理2种细胞，MTS法检测细胞增殖抑制效应；流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡；Western blot检测细胞凋亡抑制蛋白B淋巴细胞瘤2蛋白（B—celllymphoma-2，Bcl-2）、人粒细胞白血病1蛋白（myeloidcellleukemia-1，Mcl—1）、B淋巴细胞瘤XL蛋白（B—celllymphoma—xl，Bcl—XL）的表达。结果Jeko-1（N）细胞不表达CD5-E1A、CD5-E1B；柔红霉素处理后，Jeko-1（N）细胞抑制率高于Jeko-1（P）细胞，IC50低于Jeko-1（P）细胞（P〈0．05），G0／G1期细胞比例增加，S期细胞比例减少（P〈0．05），24h、48h细胞凋亡率较Jeko-1（P）增加，Bcl-2、Mcl蛋白表达量较Jeko-1（P）细胞无明显变化，凋亡抑制蛋白Bcl—XL表达量上调。结论CD5基因敲除的Jeko-1细胞株通过调控淋巴瘤细胞阻滞于G0／G1期，以及上调Bcl—XL蛋白的表达增强对柔红霉素的化疗敏感性。