尖叶假龙胆醇提物含药血清对A549细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:探讨尖叶假龙胆醇提物(EEGA,ethanol extract from Gentianella acuta)含药血清对人肺癌A549细胞株诱导凋亡和影响细胞周期的作用。方法:采用四甲基偶氮盐(MTT)比色法检测EEGA含药血清对A549细胞作用24 h、48 h、72 h的增殖抑制率,使用流式细胞仪观察EEGA含药血清处理A549细胞48 h后,细胞凋亡率和细胞周期阻滞率变化的检测。结果:MTT显示EEGA低、中、高剂量含药血清都能抑制A549细胞增殖(P<0.05),其抑制率与作用时间相关。低、中、高剂量含药血清处理A549细胞48 h后凋亡率显著高于空白组(P<0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理A549细胞48 h后,G0/G1期细胞明显较空白组增加(P<0.01),提示EEGA含药血清可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期。结论:尖叶假龙胆对人肺癌A549细胞有抑制作用,机制可能与抑制细胞生长、阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。

尖叶假龙胆含药血清对H/R损伤H9c2细胞自噬及凋亡影响的研究

目的 探究尖叶假龙胆含药血清对H9c2细胞缺氧/复氧(H/R)损伤模型的保护作用及其对自噬与凋亡水平的调节。方法 通过缺氧3 h、复氧3 h建立H9c2细胞H/R模型。实验分为Control组、H/R组、GEN+H/R组、GEN+Rap(自噬激活剂)+H/R组。应用CCK-8法观察尖叶假龙胆含药血清对心肌细胞活力的影响,ELISA法测定血清中LDH含量;采用Annexin V-FITC双染法流式细胞技术,进行H9c2细胞凋亡情况检测;采用Western Blot技术检测心肌细胞Beclin1、LC3Ⅱ、Caspase3蛋白表达水平。结果 (1)CCK-8及LDH结果显示:与Control组比较,H/R组细胞活力明显下降,细胞培养液LDH漏出量增加(P<0.01);与H/R组比较,GEN+H/R组细胞活力明显上升,LDH漏出量下降(P<0.01);与GEN+H/R组比较,GEN+Rap+H/R组细胞活力明显下降,细胞培养液LDH漏出量增加(P<0.01)。(2)Annexin V-FITC双染法流式细胞术的实验结果显示:与Control组比较,H/R组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);与H/R组比较,GEN+H/R组可明显降低H/R诱导的H9c2细胞凋亡率(P<0.01);与GEN+H/R组比较,GEN+Rap+H/R组细胞凋亡率增加(P<0.01)。(3)Western Blot结果显示:与Control组相比,H/R组的Beclin1、LC3Ⅱ、Caspase3蛋白表达水平均明显升高;GEN+H/R组Beclin1、LC3Ⅱ、Caspase3蛋白表达水平与H/R组相比明显降低;与GEN+H/R组比较,GEN+Rap+H/R组Beclin1、LC3Ⅱ、Caspase3蛋白表达水平均明显升高。结论 (1)尖叶假龙胆含药血清能够改善H9c2细胞缺氧/复氧损伤程度,降低细胞凋亡率。(2)尖叶假龙胆含药血清可能通过降低自噬过表达从而抑制凋亡发挥对心肌细胞的保护作用。