佳米驴β防御素aBD-1基因克隆及序列分析

为获得佳米驴β防御素-1(aBD-1)的全长cDNA序列,为开发其药用功能积累资料。从佳米驴舌黏膜上皮组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出aBD-1(ass-βdefensin-1)cDNA的中间片段后,再采用RACE法,扩增佳米驴β防御素aBD-1的cDNA全序列。aBD-1 cDNA全序列长为360 bp,其中包含192 bp的开放阅读框,37 bp的5′非翻译区(5′UTR),102 bp的3′非翻译区(3′UTR)以及poly(A)26。在GenBank上注册号为EU265778,测序结果和序列生物信息学分析结果表明,其与马β防御素eBD-1、牛的β防御素TAP、绵羊的β防御素sBD-1、猪的β防御素pBD-1和人的β防御素hBD-2的同源性分别为92%、68%、75%、75%和68%。aBD-1全长cDNA是β防御素家族中的一个新基因。

佳米驴β-防御素aBD-1组织表达

为检测aBD-1 mRNA在佳米驴体内可能的表达器官,根据已知aBD-1 cDNA的全长序列设计一对预计扩增产物为266bp的引物,以佳米驴舌背表面、食管、胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、气管、胰腺、膀胱、子宫、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏、淋巴结、卵巢组织中提取的总RNA为模板,采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测佳米驴的上述器官内aBD-1 mRNA的表达情况,同时以β-肌动蛋白(β-actin)基因作为内参。结果显示:aBD-1 mRNA在佳米驴的舌、盲肠和结肠内有强的表达,在食管、胃、十二指肠、空肠、回肠、直肠、气管内有比较强的表达,在膀胱和子宫内有弱的表达,而在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺、淋巴结、卵巢等实质性器官组织内无表达。