健脾化瘀解毒法对结肠癌裸鼠模型癌及癌旁组织中AKT、mTOR、p-4EBP1表达的影响研究

目的研究健脾化瘀解毒法对结肠癌原位种植瘤癌及癌旁组织中蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化真核细胞起始因子4E结合蛋白1(p-4EBP1)表达的影响。方法建立裸鼠结肠癌模型,随机分为空白组、模型组、健脾益气组、化瘀解毒组、健脾化瘀解毒组、雷帕霉素组及5-氟尿嘧啶组,每组5只。干预各组4周后,检测各组癌组织与癌旁组织中AKT、mTOR、p-4EBP1的表达水平。结果与空白组比较,模型组癌组织与癌旁组织中AKT1、mTOR、p-4EBP1的表达均上调,差异有显著性(P<0.05),且AKT、mTOR、p-4EBP1的表达水平均为癌组织>癌旁组织>正常肠黏膜组织。与模型组比较,健脾化瘀解毒法能在一定程度上抑制结肠癌癌组织及癌旁组织中AKT、mTOR、p-4EBP1的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05);健脾益气法、化瘀解毒法均能下调癌组织与癌旁组织中AKT、mTOR、p-4EBP1蛋白,但其降低水平不如健脾化瘀解毒法。结论健脾化瘀解毒法能够降低AKT、mTOR、p-4EBP1蛋白的表达,健脾益气法与化瘀解毒法协同增效,以获得最佳疗效。

基于中性粒细胞胞外诱捕网途径探讨胃黏膜肠上皮化生的发生机制及中药预测研究

目的探讨中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对胃黏膜肠上皮化生(Intestinal metaplasia,IM)的作用机制及治疗靶点,为中医药防治IM提供新思路和新方向。方法从公共数据库下载IM及NETs相关数据集,通过免疫浸润分析、差异分析及基因相关性分析获得IM与NETs共表达的关键基因集;采用功能富集分析、蛋白互作网络、分子对接技术及实验验证等方法进一步阐述IM及NETs的相关性;最后将获得的关键基因与Coremine Medical平台相互映射,预测中医治疗IM的有效中药和治法。结果共筛选出6个IM与NETs形成相关的共表达的差异基因,分别为THBD、HDAC9、FGA、AQP9、DECR1和PIK3CD,这些基因与NETs的3个标记性蛋白(NE、PADI4、MPO)存在不同程度的相关性,其功能主要富集在呼吸爆发与防御反应、纤维蛋白溶解等生物学过程上;中药预测共映射出中医治疗IM的中药112味,按照功效可归为34类,其中清热解毒类中药出现频次最高,其次为活血化瘀药、温里药、补气药等。结论在IM的病理发生及发展过程中存在NETs,靶标基因NE和THBD可能存在相互关联作用,共同通过NETs通路参与IM进展;健脾化瘀解毒法是中医治疗IM的核心治法,其可能通过抑制NETs的形成,从而减缓IM的发展进程。

健脾解毒化瘀方联合英夫利昔单抗治疗克罗恩病患者疗效及对肠道菌群的影响

目的探讨健脾解毒化瘀方联合英夫利昔单抗对克罗恩病患者疗效及肠道菌群的影响。方法选取94例克罗恩病患者,使用随机数字表法分成观察组与对照组各47例。对照组给予英夫利昔单抗。在此基础上,观察组口服健脾解毒化瘀方联合英夫利昔单抗治疗。比较治疗前后两组患者主要中医证候评分、粪便中肠道菌群(双歧杆菌、乳酸杆菌、肠球菌、肠杆菌)数量、血清肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平。结果所有患者均顺利完成该次研究,无脱落病例。观察组总有效率95.74%(45/47),高于对照组[82.98%(39/47)],差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后两组腹痛拒按、腹泻急迫、腹胀、神疲乏力等证候积分降低,而且观察组积分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后两组血清TNF-α、CRP水平降低,而且观察组水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后两组双歧杆菌、乳酸杆菌数量升高,肠球菌、肠杆菌数量降低,而且观察组双歧杆菌、乳酸杆菌数量高于对照组,肠球菌、肠杆菌数量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论健脾解毒化瘀方联合英夫利昔单抗应用于克罗恩病整体疗效确切,促进腹痛等症状的缓解,减轻肠黏膜炎症状态,其作用可能与其显著纠正肠道菌群失衡、改善肠黏膜屏障功能有关。

自拟益气健脾解毒化瘀方联合艾曲泊帕治疗恶性肿瘤化疗相关性血小板减少症的临床效果

目的 探讨自拟益气健脾解毒化瘀方联合艾曲泊帕治疗恶性肿瘤化疗相关性血小板减少症的临床效果。方法 选取2018年1月—2022年4月收治的78例恶性肿瘤化疗相关性血小板减少症作为研究对象,按照治疗方法分为观察组(自拟益气健脾解毒化瘀方联合艾曲泊帕治疗)和对照组(艾曲泊帕治疗),每组39例。观察2组治疗后的临床效果,并比较治疗前后症状积分、血清炎性因子[白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、细胞因子[血小板第4因子(PF4)、血小板生成素(TPO)、血管性血友病因子(vWF)]及凝血功能指标[血小板计数(PLT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)]。结果 治疗后,观察组临床总有效率为94.87%(37/39)高于对照组79.49%(31/39)(P<0.05)。治疗后,2组血清IL-10、TNF-α、PF4、TPO、vWF水平及各症状积分均低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组PLT高于治疗前,PT、APTT短于治疗前;且观察组PLT高于对照组,PT、APTT短于对照组(P<0.05)。结论 自拟益气健脾解毒化瘀方联合艾曲泊帕治疗恶性肿瘤化疗相关性血小板减少症,能够提高疗效,减轻临床症状及炎症反应,改善凝血功能。

健脾化瘀解毒复方对溃疡性结肠炎患者炎症因子及免疫屏障影响

目的：观察健脾化瘀解毒复方的临床疗效,探讨其对炎症因子及免疫屏障的影响。方法：选取2014年1月—2016年9月医院诊治的60例慢性复发型活动期或慢性持续型轻中度的溃疡性结肠炎患者,随机分为对照组30例和观察组30例,对照组给予美沙拉嗪颗粒4 g/d,口服,观察组予以健脾化瘀解毒复方口服2次/d,连续治疗3个月,比较两组治疗前后血沉（ESR）、血清降钙素原（PCT）、疾病活动指数（DAI）及肠镜下黏膜病变的变化,酶联免疫法（ELISA）检测血清白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、白细胞介素-10（IL-10）及黏膜地址素细胞黏附分子（MAd CAM-1）的水平。结果：治疗前两组患者ESR、PCT、DAI、肠镜下黏膜病变及血清中IL-6、IL-8、IL-10、MAd CAM-1无统计学差异（P〉0.05）。与治疗前相比,两组治疗后ESR、PCT、DAI显著降低（P〈0.01）,血清中IL-6、IL-8、MAd CAM-1表达明显降低（P〈0.01,P〈0.05）,而血清中IL-10表达显著升高（P〈0.01）;与对照组相比,观察组ESR、DAI明显降低（P〈0.01,P〈0.05）,血清中IL-6显著降低、IL-10显著升高均具有统计学差异（P〈0.05）;且两组患者黏膜充血水肿、糜烂、溃疡均有显著好转（P〈0.01,P〈0.05）,健脾化瘀解毒复方在改善黏膜充血水肿、糜烂方面较美沙拉嗪具有更明显优势（P〈0.05）。结论：健脾化瘀解毒复方具有明显的修复肠道黏膜、减轻肠道炎症的作用,其机制可能与调节肠道黏膜屏障,提高肠道局部免疫能力有关;在调节IL-6、IL-10平衡方面其作用优于美沙拉嗪。

健脾化瘀解毒方调控能量代谢抑制肺癌细胞侵袭转移的研究

目的:研究健脾化瘀解毒方的含药血清(JHJRMS)对人肺癌细胞能量代谢的影响。方法:TCGA数据库分析己糖激酶2(HK2)与肺癌患者预后之间的相关性;划痕实验用来检测JHJRMS对肺癌细胞侵袭转移的影响。RT-PCR检测JHJRMS对肺癌细胞中miR-143-3p表达水平的影响。数据库预测miR-143-3p与HK2蛋白的相关性。Western blot检测JHJRMS对肺癌细胞HK2、E-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白的影响。结果:TCGA数据库结果显示,HK2低表达,肺癌患者具有更好的预后。划痕实验结果显示JHJRMS能显著抑制肺癌细胞的侵袭转移。RT-PCR结果显示JHJRMS可明显增加肺癌细胞中miR-143-3p的表达水平。数据库结果提示,miR-143-3p和蛋白HK2的mRNA存在多处互补链,miR-143-3p可能靶向调控HK2。Western blot结果显示JHJRMS处理肺癌细胞后,细胞中的HK2、E-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显降低。结论:JHJRMS能明显抑制人肺癌A549细胞的侵袭转移,其机制可能是通过miR-143-3p调控HK2的表达水平直接影响细胞的能量代谢过程。

健脾解毒化瘀方对肝衰竭大鼠肝脏的保护作用及对TLR4表达的影响

目的研究健脾解毒化瘀方对肝衰竭大鼠的保护作用及对Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法将大鼠随机分为正常组、模型组、对照组和实验组,除正常组外,其余组均采用D-半乳糖胺(D-gal)腹腔注射方法建立肝衰竭大鼠模型。于造模前4 d开始,正常组和模型组给予生理盐水灌胃,对照组和实验组分别给予谷氨酰胺溶液和健脾解毒化瘀方灌胃,直至造模后24 h,于造模1 d后处死大鼠,检测各组大鼠血清ALT、AST、内毒素水平,镜下观察肝组织病理学变化,取肝组织采用免疫组化法检测TLR4表达情况。结果模型组血清ALT、AST、内毒素水平均明显高于正常组(P均<0.05),实验组及对照组各指标水平均明显低于模型组(P均<0.05);实验组及对照组肝组织病理学分级好于模型组(P均<0.05),病损评分及TLR4染色光密度值均明显低于模型组(P均<0.05)。实验组与对照组间上述指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论健脾解毒化瘀方对肝衰竭大鼠肝功能有明显保护作用,其可能通过下调肝组织TLR4的表达而起到抗肝衰竭的作用。

健脾益肾、化瘀解毒法联合化疗治疗老年结直肠癌术后30例临床观察

目的:观察健脾益肾、化瘀解毒法联合化疗治疗老年性结直肠癌术后的作用,并比较两组患者的体重、生活质量、治疗前后CEA及CA19-9值的变化、毒副反应的发生。方法:将60例Ⅱ~Ⅲ期老年性结直肠癌根治术后患者随机分配至治疗组和对照组,治疗组予以FOLFOX4方案化疗,14d为一个周期,2个周期为一个疗程,共6个疗程,并从化疗第1天起加服健脾益肾、化瘀解毒方煎药内服;对照组单纯予以FOLFOX4方案化疗,14d为一个周期,2周期为一个疗程,共6个疗程。主要观察两组患者的体重变化、生活质量、治疗前后CEA及CA19-9值的变化、毒副反应的发生。结果:治疗组与对照组在降低CEA、CA19-9数值上经统计学处理后无显著性差异(P>0.05);在提高生活质量、增加体重、减轻血液和消化系统毒副反应方面,治疗组明显优于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:两组患者治疗前后CEA及CA19-9无明显差异,在患者生活质量、增加体重,毒副反应的发生方面比较,治疗组明显优于对照组。

解毒化瘀健脾方对慢性萎缩性胃炎伴异型增生大鼠PTEN、E-cad表达的影响

目的观察解毒化瘀健脾方对慢性萎缩性胃炎伴异型增生模型大鼠的抑癌基因磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)和上皮细胞钙黏蛋白(E-cad)基因的影响。方法运用综合造模方法 N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG),建立慢性萎缩性胃炎伴异型增生病变大鼠模型,随机分为模型组、西药组(维甲酸)、中药组(解毒化瘀健脾方),进行相应药物干预,另选取正常大鼠作为正常对照组。应用Real-time PCR、Western blotting技术检测大鼠PTEN、E-cad mRNA及蛋白表达水平的变化。结果与正常对照组比较,模型组PTEN、E-cad mRNA及蛋白表达量显著降低(P<0.01);中药组E-cad mRNA及蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,中药组和西药组PTEN、E-cad mRNA及蛋白表达量显著增加(P<0.05)。与西药组比较,中药组PTEN、E-cad mRNA表达量明显升高(P<0.01);中药组PTEN蛋白表达量降低,E-cad蛋白表达升高(P<0.01)。结论解毒化瘀健脾方可诱导慢性萎缩性胃炎伴异型增生胃黏膜细胞PTEN、E-cad基因的蛋白表达量上升,从而实现对慢性萎缩性胃炎伴异型增生的治疗,逆转胃癌前病变。

基于ERK/Cyclin E通路探讨健脾化瘀解毒方逆转CAG大鼠胃黏膜癌变效应机制

目的探讨健脾化瘀解毒方对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠增殖、分化ERK/Cyclin E信号通路的影响。方法选用SPF级SD大鼠,运用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)复合造模法复制CAG大鼠模型,设立分组:正常组,模型组,叶酸组,健脾化瘀解毒方高、中、低组。HE染色观察大鼠胃黏膜组织病理学改变;采用qRT-PCR法检测胃黏膜组织ERK1、ERK2、Cyclin E mRNA转录水平;免疫组化法检测胃黏膜组织ERK1、ERK2、Cyclin E蛋白表达。结果健脾化瘀解毒方可显著改善CAG大鼠胃黏膜上皮腺体结构、形态紊乱及细胞异型性等病理表现。模型组CAG大鼠胃黏膜上皮的ERK1、ERK2、Cyclin E mRNA水平及蛋白表达评分均较正常组显著增加(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,健脾化瘀解毒方能显著下调CAG大鼠胃黏膜上皮的ERK1、Cyclin E mRNA水平及蛋白表达评分(P<0.05,P<0.01),以高剂量组疗效最佳;健脾化瘀解毒方对ERK2无显著调控作用。结论健脾化瘀解毒方能显著下调ERK1、Cyclin E的表达,抑制胃黏膜上皮细胞的过度增殖,进而阻断CAG恶性转变。

解毒化瘀健脾方对胃黏膜异型增生模型大鼠p16、PTEN基因的去甲基化和蛋白诱导表达

目的:观察解毒化瘀健脾方对胃黏膜异型增生模型大鼠细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A(cyclin-dependent kinase inhibitor 2A,p16)、磷酸酶张力蛋白同源蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因甲基化状态和蛋白表达的影响,并探讨解毒化瘀健脾方对胃黏膜异型增生的治疗作用.方法:采用低浓度N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)的综合造模方法,创建实验性大鼠胃黏膜异型增生病变模型;分模型对照组、西药维甲酸治疗组、解毒化瘀健脾方治疗组,并选择正常大鼠作为阳性对照组进行干预;应用甲基化特异PCR技术检测大鼠胃黏膜p16、P T E N基因甲基化状态;R e a l-t i m e P C R、Western blot、免疫组织化学技术检测p16,PTEN在mRNA和蛋白表达水平的变化.结果:模型组胃黏膜异型增生细胞p16、PTEN基因的甲基化阳性检出率均为33.33%(6/18),均高于正常对照组20%(2/10),但差异不显著;解毒化瘀健脾方治疗组p16基因甲基化检出率均未0%(0/15),相比模型组20%(2/10)甲基化程度降低,但差异均无统计学意义;p16在mRNA(P<0.001)和蛋白(P<0.01)水平的表达相比模型组极显著升高;PTEN在mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)水平的表达相比模型组极显著升高.结论:解毒化瘀健脾方对异型增生胃黏膜细胞p16、PTEN基因具有一定的去甲基化作用,并显著诱导二者的表达量增加.解毒化瘀健脾组方的对胃黏膜异型增生具有潜在的治疗作用.

健脾化瘀解毒方调节NLRP3炎症小体活化的生物信息学研究

目的基于生物信息学方法分析健脾化瘀解毒方对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化的作用机制。方法通过GEO数据库公开发表的基因芯片信息获取NLRP3炎症小体活化的相关基因,并进行差异基因表达分析。利用中药系统药理分析平台(TCMSP)筛选健脾化瘀解毒方的主要活性成分,并结合相关文献对其进行适当补充。借助Pubchem数据库和Swiss Target Prediction数据库查找主要活性成分的作用靶基因。绘制韦恩图得到活性成分靶点与差异基因的交集,即健脾化瘀解毒方调节NLRP3炎症小体活化的潜在作用靶点;构建健脾化瘀解毒方活性成分-靶点网络及靶蛋白相互作用(PPI)网络,并进行GO功能及KEGG通路富集分析。结果共获得健脾化瘀解毒方9味中药的93个主要活性成分,798个作用靶点;得到NLRP3炎症小体活化相关靶点743个,交集靶基因62个;关键靶点包括IL-6、VEGFA、TNF、SRC、IL-1β、PTGS2、BCL2L1、CCND1、FGF2、ICAM1等;共涉及26条GO条目与25条相关信号通路。结论健脾化瘀解毒方可能主要通过槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、豆甾醇等活性成分,作用于IL-6、IL-1β、TNF等核心治疗靶点,通过PI3K-Akt、HIF-1及MAPK等信号通路,调节NLRP3炎症小体活化来影响细胞焦亡,发挥防治胃癌前病变的作用。

解毒化瘀健脾方对胃黏膜异型增生Thbs1基因甲基化的作用

目的:观察解毒化瘀健脾方对胃黏膜异型增生模型大鼠血小板反应蛋白1基因(thrombospondin 1,Thbs1)甲基化状态的影响,并探讨解毒化瘀健脾方治疗胃黏膜异型增生的可能机制.方法:将实验性胃黏膜异型增生病变模型大鼠分为:模型对照组(model control group,M G)、阳性对照组(positive control group,PCG)-西药维甲酸治疗组、解毒化瘀健脾方治疗组(Jiedu Huayu Jianpi Fang treatment group,A),并以健康大鼠为对照组(control group,CG),进行相应的药物干预;取胃黏膜组织,应用甲基化特异PCR技术检测Thbs1基因甲基化状态;HE染色观察各处理组胃黏膜组织结构变化差异.结果:CG组10只健康大鼠胃黏膜经检测Thbs1基因均未发生甲基化,胃黏膜异型增生MG组大鼠T h b s1基因的甲基化阳性检出率为33.33%(6/18);PCG组-西药维甲酸组同正常大鼠相同,Thbs1基因甲基化检出率为0.00%;A组治疗大鼠Thbs1基因甲基化比率(20.00%),相比MG组显著降低(P=0.0198).HE染色结果显示MG、PCG、A组呈现中轻度胃黏膜异型增生症状,经治疗后PCG、A组异型增生趋于正常.结论:解毒化瘀健脾方对发生异型增生的胃黏膜组织Thbs1基因具有显著地去甲基化作用.解毒化瘀健脾方治疗胃黏膜异型增生可能与该药物使Thbs1基因甲基化程度显著降低有关.

化瘀解毒健脾汤联合胃复春片治疗胃癌前病变临床研究

目的:观察化瘀解毒健脾汤联合胃复春片治疗胃癌前病变的临床疗效及对患者血清胃泌素(GAS)和生长抑素(SST)表达的影响。方法:选择胃癌前病变患者82例,按随机数字表法分为观察组和对照组各41例。对照组给予胃复春片治疗,观察组在对照组基础上给予化瘀解毒健脾汤治疗。比较2组临床疗效,分析治疗前后主要症状积分、胃黏膜病理积分、血清GAS及SST水平变化。结果:观察组总有效率为92.68%,高于对照组70.73%,差异有统计学意义(P<0.05)。2组治疗前的胃脘疼痛、胃脘胀满、纳呆及胃脘灼热评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2组治疗后的胃脘疼痛、胃脘胀满、纳呆及胃脘灼热评分较治疗前降低(P<0.05),且观察组胃脘疼痛、胃脘胀满、纳呆和胃脘灼热评分均低于对照组(P<0.05)。治疗前,2组肠上皮化生及异型增生积分比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,2组肠上皮化生及异型增生积分较治疗前降低(P<0.05),且观察组肠上皮化生及异型增生积分低于对照组(P<0.05)。2组治疗前的血清GAS、SST水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2组治疗后的血清GAS水平较治疗前降低而SST水平较治疗前升高(P<0.05),且观察组血清GAS水平低于对照组而SST水平高于对照组(P<0.05)。结论:化瘀解毒健脾汤治疗胃癌前病变临床疗效较好,可减轻患者症状,降低肠上皮化生和异型增生,降低GAS而提高SST表达。

王守儒教授治疗干燥综合征经验浅谈

干燥综合征是一种主要累及泪腺、唾液腺等外分泌腺的慢性炎症性自身免疫性疾病,属于中医"燥痹"范畴。吾师王守儒教授在治疗干燥综合征方面经验丰富,本文就其临床治疗本病的思路及经验加以阐述。

化瘀解毒健脾方联合穴位贴敷治疗乙型肝炎肝硬化结节的临床观察

目的:观察化瘀解毒健脾方联合穴位贴敷治疗乙型肝炎肝硬化结节(脾虚血瘀兼湿热证)的有效性及安全性。方法:将82例符合脾虚血瘀兼湿热证的乙型肝炎肝硬化结节患者随机分为治疗组和对照组,每组41例。对照组患者采用基础治疗(保肝、抗病毒等);治疗组患者在对照组治疗的基础上加用中药(化瘀解毒健脾方)内服及外敷(穴位贴敷)治疗,疗程6个月。观察治疗前后患者肝脏结节的MR影像学表现、中医症状评分、肝功能、T细胞亚群等指标的变化。结果:治疗后,治疗组及对照组患者的有效加稳定率分别为88.6%、68.03%,差异有统计学意义(χ^2=4.471,P=0.034),两组患者肝硬化结节最大直径治疗后均无明显变化。治疗后两组患者的CD4^+及CD8^+T淋巴细胞水平均较前提高,且治疗组患者改善更明显(P<0.05)。治疗后两组患者的TBil、ALT及AST水平下降,Alb水平较前上升(P<0.05),除ALT、AST两项指标外,治疗组患者肝功能改善情况更佳(P<0.05)。两组患者治疗后4项中医症状均较前下降;除胁肋疼痛治疗组患者无明显优势外(P>0.05),余3项均优于对照组(P<0.05)。治疗组及对照组患者总有效率分别为85.70%、65.90%,治疗组患者疗效更显著(χ^2=3.972,P=0.045)。结论:化瘀解毒健脾方联合穴位贴敷治疗能延缓或部分逆转乙型肝炎肝硬化结节的进展,改善中医症状和肝功能,调节患者免疫功能,无明显不良反应。

健脾化瘀解毒方调控AKT/p38蛋白磷酸化改善胃癌前病变小鼠脾虚证研究

目的 探讨健脾化瘀解毒方在体内改善胃癌前病变小鼠脾虚证的作用机制。方法 构建脾虚证胃癌前病变小鼠模型,使用健脾化瘀解毒方干预后,观察小鼠体质量增长及摄食情况、脾脏组织结构变化、脾/胸腺指数、并检测AKT/p38信号通路相关蛋白表达情况。结果 与空白组比较,模型组小鼠体质量增长缓慢,摄食明显减少,脾脏指数减小,胃黏膜AKT/p38信号通路被激活;与模型组比较,健脾化瘀解毒方干预组小鼠脾虚症状得到改善,脾脏组织结构重塑,且AKT/p38信号通路受到一定程度抑制。结论 MNNG可诱导胃癌前病变小鼠出现脾虚症状,健脾化瘀解毒方可能在一定程度抑制AKT/p38信号通路进而改善胃癌前病变小鼠脾虚症状,与其以健脾法为基础的治法相符合,进而发挥抑制甚至逆转胃癌前病变的作用。

健脾化瘀解毒方调控PI3K/Akt/HIF-1α通路干预胃癌前病变大鼠胃黏膜上皮细胞自噬及凋亡

目的探讨健脾化瘀解毒方(JPHY)调控PI3K/Akt/HIF-1α通路干预胃癌前病变(GPL)大鼠胃黏膜上皮细胞自噬及凋亡的机制。方法采用200μg·mL^(-1) N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)自由饮用+隔日禁食法造模28周复制GPL模型。将SD大鼠随机均分为空白组、模型组、维酶素组(270 mg·kg^(-1))、JPHY高剂量组(9 g·kg^(-1))和JPHY低剂量组(4.5 g·kg^(-1)),每组18只。第15周起,各给药组大鼠每天灌胃给药(10 mL·kg^(-1))1次,连续25周。分别于第18、28和39周,每组随机取6只大鼠,采用HE染色法观察大鼠胃黏膜组织病理学形态变化;Western Blot法测定胃黏膜组织PI3K、Akt、HIF-1α、Beclin1、Bcl-2、BAX蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组大鼠胃黏膜组织固有腺变薄,非固有腺锯齿样变,弥漫性细胞空泡样变,固有腺细胞变为体积小、胞质少、核质比例大、深染的异型增生细胞,呈假复层、跨腺腔灶状分布,有炎性细胞浸润,表现为以肠上皮化生为主;第18周,大鼠胃黏膜组织的PI3K、Akt蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),HIF-1α、Beclin1、Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/BAX比值明显上调(P<0.05,P<0.01);第28周,PI3K、Akt、BAX蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),HIF-1α、Beclin1蛋白表达及Bcl-2/BAX比值明显上调(P<0.01);第39周,Akt蛋白表达明显下调(P<0.05),HIF-1α、Beclin1、Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/BAX比值明显上调(P<0.05,P<0.01),PI3K、BAX蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,JPHY高剂量组的胃黏膜改善作用最明显,异型增生细胞数量、分布范围和分布密度有明显减少,固有层厚度明显增加,腺腔结构趋于正常;第18周的PI3K、Akt蛋白表达明显上调(P<0.01),HIF-1α、Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/BAX比值明显下调(P<0.05);第28周的PI3K、Akt、BAX蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01),HIF-1α、Beclin1蛋白表达及Bcl-2/BAX比值表达明显下调(P<0.01);第39周Akt蛋白表达明显上调(P<0.01),HIF-1α、Beclin1蛋白表达及Bcl-2/BAX比值明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论JPHY对GPL不同阶段的黏膜损伤均有明显保护作用,可能与其通过PI3K/Akt/HIF-1α通路调节肿瘤缺氧微环境以及调控细胞自噬、凋亡作用有关。

健脾化瘀解毒方调控PI3K/AMPK-mTOR-ULK1抑制ROS诱导GPL细胞自噬的机制研究

目的:探讨健脾化瘀解毒方通过抑制氧化应激所致胃癌前病变(GPL)大鼠胃黏膜上皮细胞(GECs)自噬,保护胃黏膜、防治癌变的机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、维酶素组及健脾化瘀解毒方高(9 g/kg)、低(4.5 g/kg)剂量组,复制GPL大鼠模型,于造模第12 w连续灌胃给药10 w,实验结束时麻醉大鼠后,取血分离血清检测ROS、SOD、MDA水平;取胃窦部胃黏膜,观察组织病理学(HE染色)和肠上皮化生(AB-PAS染色),检测GECs的PI3K、mTOR、AMPK、Raptor、ULK1、ATG13、Beclin1、ATG4B mRNA及miR182、miR30a、miR206和Beclin1、HMGB1、ATG5、MUC2、CDX2、ATG2B蛋白表达。结果:正常对照组大鼠胃黏膜无异常;模型组大鼠胃黏膜萎缩,空泡样变、组织异型性变,异型增生灶占胃黏膜厚度的1/3,各给药组胃黏膜病理学改变不同程度减轻;与模型组比较,健脾化瘀解毒方组PI3K、mTOR mRNA及miR30a、miR206显著升高,AMPK、Raptor、ULK1、ATG13、Beclin1、ATG4B mRNA及miR182和Beclin1、HMGB1、ATG5、MUC2、CDX2蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:健脾化瘀解毒方可通过影响miR182、miR30a、miR206等miRNAs活化,调控PI3K/AMPK-mTOR-ULK1通路,从而抑制氧化应激诱导自噬,逆转GPL大鼠GECs的肠化和损伤,防止GPL癌变。

疏肝健脾、化瘀解毒法治疗早期肝癌术后临床体会

通过在临床诊治过程中对早期肝癌的病因病机及治疗的认识,总结出有效防治早期肝癌术后复发及转移的思路:以疏肝健脾、化瘀解毒法治疗早期肝癌及肝癌术后复发人群,临床诊治常常收到良效,并树立上工治未病、长期服药、坚持治疗的思想。