Effect of Jianpi Huoxue Decoction(健脾活血方)-containing Serum on Tumor Necrosis Factor-α Secretion and Gene Expression of Endotoxin Receptors in RAW264.7 Cells Induced by Lipopolysaccharide

Objective:To evaluate the effect of Jianpi Huoxue decoction(健脾活血方,JHD)-containing serum on tumor necrosis factor-α(TNF-α) secretion and endotoxin receptor gene expression in RAW264.7 cells induced by lipopolysaccharide(LPS).Methods:The cytotoxicity of blank-control serum and JHD-containing serum at different concentrations were evaluated through the lactate dehydrogenase(LDH) assay in RAW264.7 cells.RAW264.7 cells were divided into six groups:5%blank-control serum group(C1,n=3),5%blank-control serum plus LP...

健脾活血方含药血清对肝癌细胞肝细胞生长因子/c-Met通路、尿激酶型纤溶酶原激活因子分泌及缺氧状态下细胞活性及增殖的影响

目的探讨健脾活血方含药血清对肝癌细胞肝细胞生长因子(HGF)/c-Met通路、尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)分泌及缺氧状态下细胞活性及增殖的影响。方法将20只大鼠随机均分为实验组及对照组,分别给予健脾活血方及生理盐水连续灌胃7d后,取血制备含药血清。取对数生长期肝癌细胞株SMMC-7721分为对照组、实验组,加入相应含药血清,并加入氯化钴模拟缺氧状态,培养72h后检测各组细胞的活力与增殖能力、侵袭能力。另取SMMC-7721细胞分为对照组、实验组分别加入相应含药血清培养72h后,检测细胞培养液上清uPA浓度、HGF及其细胞中mRNA表达水平、c-Met蛋白及mRNA表达水平。结果实验组SMMC-7721细胞的A值、细胞增殖率、迁移到下室的细胞数量均低于或少于对照组(均P<0.05)。实验组细胞培养液上清uPA浓度、HGF以及细胞中HGFmRNA表达水平、c-Met蛋白及其mRNA表达水平均低于对照组(均P<0.05)。结论健脾活血方含药血清可抑制缺氧状态下肝癌细胞的活力及增殖能力,其或通过抑制HGF/c-Met通路及uPA的分泌,阻止肝癌的复发和转移。

健脾益肾活血方对慢性肾炎患者BUN、SCR、LN、Ⅳ-Col、TNF-α的影响

目的:观察健脾益肾活血方对慢性肾炎患者疗效及血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,SCR),层粘连蛋白(laminin,LN)、Ⅳ型胶原(tyPeⅣcollagen,Ⅳ-Col)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响。方法:将58例慢性肾炎患者随机分为对照组和治疗组各29例。对照组患者给予低盐低脂饮食以及控制血压、血脂等常规治疗,治疗组在对照组治疗的基础上采用健脾益肾活血方治疗,观察对比两组患者临床治疗疗效和BUN、SCR、LN、Ⅳ-Col、TNF-α的变化。结果:对照组有效率为62.07%,治疗组有效率为86.21%。两组有效率比较,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后中医证候积分、24 h尿蛋白定量均较治疗前减少(P<0.05),组间比较有统计学意义(P<0.05);两组患者治疗后BUN、SCR均较治疗前明显降低(P<0.05),组间比较差异有统计学意义(P<0.05);两组慢性肾炎患者治疗后血清LN、Ⅳ-Col、TNF-α均下降(P<0.05),组间比较治疗组低于对照组(P<0.05)。结论:健脾益肾活血方可有效降低慢性肾炎患者尿蛋白,改善肾功能,其机制可能与改善慢性肾炎患者肾纤维化、调节免疫因子有关。

健脾益肾泄浊活血方治疗糖尿病肾病Ⅳ期临床研究

目的:观察健脾益肾泄浊活血方对糖尿病肾病Ⅳ期尿微量白蛋白/尿肌酐、血肌酐(SCr)、血清胱抑素C(Cys-C)的临床疗效。方法:将80例2型糖尿病肾病Ⅳ期患者随机分为治疗组和对照组各40例。对照组采用西医基础治疗,治疗组在对照组治疗方案的基础上加用健脾益肾泄浊活血方治疗,2组疗程均为3个月,观察2组治疗前后中医证候评分、尿微量白蛋白/尿肌酐、血白蛋白、SCr、Cys-C的变化情况。结果:治疗后,治疗组尿微量白蛋白/尿肌酐明显低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.01),且治疗组尿微量白蛋白/尿肌酐明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗后,2组血白蛋白治疗前后及治疗后组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗组40~49岁、50~59岁患者治疗后SCr及Cys-C均有下降,治疗前后比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);治疗组60~70岁患者SCr及Cys-C治疗前后比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。对照组40~49岁、50~59岁、60~70岁患者SCr及Cys-C治疗前后比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,治疗组40~49岁、50~59岁患者SCr及Cys-C分别与对照组同年龄段比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);治疗组60~70岁患者SCr及Cys-C分别与对照组同年龄段比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,中医证候总有效率治疗组92.5%,对照组62.5%,差异有统计学意义(P<0.01)。临床疗效总有效率治疗组90.0%,对照组65.0%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:在西医基础治疗方案的基础上加用健脾益肾泄浊活血方可明显改善糖尿病肾病Ⅳ期的临床症状,减少蛋白尿,可以降低60岁以下患者SCr、Cys-C水平,延缓肾病进展。

健脾疏肝法、活血化瘀法对肝纤维化小鼠肝组织TIMP-1及血清纤维化指标的影响

目的:观察健脾疏肝法、活血化瘀法分别对肝纤维化小鼠肝组织TIMP-1及血清纤维化指标的影响。方法:选雄性Wistar小鼠75只,随机分为正常对照组、模型对照组、健脾疏肝组、活血化瘀组、秋水仙碱组各15只,除正常对照组外,各组采用40%CCL4橄榄油腹腔注射诱导小鼠肝纤维化。空白对照组15只,腹腔注射0.9%生理盐水0.5 mL,给药方法及时间同上。造模后第5周,各组给予不同药物干预(10mL/kg),正常对照组和模型对照组给予0.9%生理盐水10 mL/kg体重灌胃;健脾疏肝组予健脾疏肝方;活血化瘀组予复方鳖甲软肝片;秋水仙碱组给予秋水仙碱。8周后处死动物取肝组织,检测肝脏组织中的TIMP-1、血清纤维化指标。结果:活血化瘀组、健脾疏肝组、秋水仙碱组小鼠血清纤维化指标明显低于模型对照组(P<0.05),其中健脾疏肝组优于其他两组。并且活血化瘀组、健脾疏肝组、秋水仙碱组大鼠肝组织中TIMP-1均低于模型对照组(P<0.05),其中健脾疏肝组优于其他两组。结论:疏肝健脾法能够有效的治疗肝纤维化,其机制可能与抑制肝脏组织中的TIMP-1的表达有关。

疏肝健脾活血方对大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的探讨疏肝健脾活血方含药血清对活化的大鼠肝星状细胞(HSC)的转化因子β1(TGF-β1)/Smads信号通路相关基因表达的影响。方法利用病毒转染得到沉默Smad4基因(Smad4 RNAi)的HSCs-T6细胞株(Smad4 RNAi HSCs-T6)。HSCs-T6细胞株随机分为空白对照组、TGF-β1模型组、TGF-β1+含药血清组;Smad4 RNAi HSCs-T6细胞株随机分为Smad4 RNAi组、Smad4RNAi+TGF-β1模型组、Smad4 RNAi+TGF-β1+含药血清组。各组干预后酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠肝星状细胞Ⅰ型胶原含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HSC-T6细胞Smad2、Smad3、Smad4、Smad7 mRNA相对表达量。结果 TGF-β1促进HSC的I型胶原表达[(40.88±5.49)pg/mL比(26.42±3.33)pg/mL,P<0.05]及Smad2、Smad3、Smad7表达[TGF-β1模型组:(1.51±0.10)、(1.27±0.21)、(3.76±0.59);空白对照组:(1.07±0.10)、(1.00±0.09)、(1.00±0.09),P<0.05],含药血清干预下HSC的I型胶原表达下调[(26.40±3.30)pg/mL比(40.88±5.49)pg/mL,P<0.05]及Smad2、Smad3、Smad4、Smad7表达下调[TGF-β1+含药血清组:(0.31±0.02)、(0.16±0.09)、(0.31±0.30)、(0.38±0.30);TGF-β1模型组:(1.51±0.10)、(1.27±0.21)、(1.28±0.26)、(3.76±0.59),P<0.05],沉默Smads4基因后得到相同结果(P<0.05)。结论疏肝健脾活血方在离体条件下可以延缓肝纤维化的进程,其机制可能与阻断TGF-β1/Smads信号通路有关。

健脾活血方对Hp根除后萎缩性胃炎患者的临床疗效及血清PG的影响

目的探讨健脾活血方对幽门螺杆菌(Hp)根除后萎缩性胃炎患者的临床疗效及血清胃蛋白酶原(PG)的影响。方法经14C呼气试验确诊为Hp感染的患者为观察对象,经四联抗Hp治疗,选择Hp根除成功、胃镜病理仍报萎缩性胃炎的300例患者,采用前瞻性、双盲、随机对照研究分为观察组和对照组,每组各150例。对照组给予胃复春片治疗,观察组给予中药健脾活血方治疗,两组均连续治疗6个月后观察两组患者的疗效,并复查胃镜、病理及胃蛋白酶指标。通过比较两组治疗方案的疗效及对PG指标、胃黏膜组织病理学积分的影响,分析健脾活血方对Hp根除后萎缩性胃炎患者的临床疗效及血清PG的影响。结果观察组有效率为84%,对照组有效率为60.67%,观察组明显高于对照组(χ^2=20.404,P<0.05)。同时,两组患者PG Ⅰ、PGR水平均较治疗前水平升高(均P<0.05),且观察组的PG Ⅰ、PGR水平均高于对照组(均P<0.05),而治疗前后两组的PGI水平均无明显变化(P>0.05)。此外,经治疗后,两组患者的慢性炎症、异型增生及肠上皮化生病理积分均明显下降(P<0.05),且观察组慢性炎症、异型增生病理积分均明显低于对照组(均P<0.05)。在治疗期间及治疗后3个月内,两组患者均未出现明显不良事件。结论健脾活血方对改善Hp根除后萎缩性胃炎患者的胃黏膜病理状态临床效果较好,且能改善PG指标,值得临床推广。

基于HIF-1α/VEGF信号通路观察健脾补肾活血方对大鼠脑微血管内皮细胞的影响

目的:基于低氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路观察健脾补肾活血方对大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC)的影响,以期为缺血性中风的治疗提供理论依据。方法:选用SPF级8周龄雄性SD大鼠12只,随机选取其中8只给予3.25 g·m L^(-1)的健脾补肾活血方药液灌胃10 m L·kg^(-1),连续灌胃5 d,提取含药血清,保存备用,余下4只给予同体积生理盐水灌胃,后续操作与上述8只大鼠相同,最终获得正常大鼠血清,保存备用。对RBMEC细胞进行复苏、培养、传代后随机分为正常组(20%正常大鼠血清+80%高糖DMEM培养基)、模型组(缺氧复氧损伤,20%正常大鼠血清+80%无糖DMEM培养基)、含药血清组(20%健脾补肾活血方含药血清+80%无糖DMEM培养基),含药血清+HIF-1α抑制剂组(20%健脾补肾活血方含药血清+HIF-1α抑制剂1 mg+80%无糖DMEM培养基)、含药血清+VEGF抑制剂组(20%健脾补肾活血方含药血清+VEGF1 mg抑制剂+80%无糖DMEM培养基)。观察各组RBMEC中Claudin-l和Claudin-5蛋白相对表达水平、RBMEC培养上清液中HIF-1α、VEGF表达水平、RBMEC的损伤修复能力和RBMEC培养72 h时的节点数目、微血管形成数量和长度。结果:RBMEC细胞在复氧24 h后划痕愈合率比较,与正常组比较,模型组划痕愈合率显著下降(P<0.01);与模型组比较,含药血清组、含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组细胞划痕愈合率明显提高(P<0.05);与含药血清组比较,含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组细胞划痕愈合率明显下降(P<0.05)。RBMEC体外微管形成的节点数目、管腔数目及管腔总长度比较,与正常组比较,模型组体外微管形成能力显著下降(P<0.01);与模型组比较,含药血清组、含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组体外微管形成能力明显提高(P<0.05);与含药血清组比较,含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组体外微管形成能力明显下降(P<0.05)。RBMEC中Claudin-l和Claudin-5蛋白相对表达量比较,与正常组比较,模型组Claudin-l和Claudin-5蛋白表达显著下降(P<0.01);与模型组比较,含药血清组、含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组Claudin-l和Claudin-5蛋白表达明显提高(P<0.05);与含药血清组比较,含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组Claudin-l和Claudin-5蛋白表达明显下降(P<0.05)。RBMEC培养上清液中HIF-1α、VEGF表达水平比较,与正常组比较,模型组HIF-1α、VEGF表达显著下降(P<0.01);与模型组比较,含药血清组、含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组HIF-1α、VEGF表达明显提高(P<0.05);与含药血清组比较,含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组HIF-1α、VEGF表达明显下降(P<0.05)。结论:健脾补肾活血方可促进缺氧复氧损伤大鼠脑微血管内皮细胞增殖、迁移和细胞成小管等血管新生活动;其机制可能是通过调控HIF-1α/VEGF信号通路来实现。