健脾软肝方对四氯化碳致肝纤维化大鼠α-SMA及其mRNA表达的影响

目的:明确健脾软肝方对肝纤维化大鼠α-SMA及其mRNA表达的影响,初步探讨健脾软肝方防治肝纤维化的作用机制,为肝纤维化的中医临床治疗提供实验依据。方法:选取Wistar雄性大鼠72只,随机分为正常组、模型组、扶正化瘀胶囊组、健脾软肝方高、中、低剂量组。模型组利用CCl4对大鼠进行腹腔注射,按0.2 m L/100 g腹腔注射30%CCl4与70%橄榄油混合溶液,正常组注射等量生理盐水,2次/周,4周后复制大鼠肝纤维化动物模型,该实验采用免疫组化ABC法检测肝纤维化大鼠α-SMA蛋白的表达水平,采用Real-time PCR法检测肝纤维化大鼠α-SMA mRNA的表达水平,采用H-E染色和Mallory染色观察大鼠肝纤维化的病变程度。结果:模型组α-SMA蛋白表达显著上升(P<0.05);健脾软肝方高、中、低剂量组组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中高、中、低剂量组之间α-SMA蛋白阳性表达逐渐升高,可以呈一定的药物依赖关系。模型组α-SMA mRNA表达显著上升(P<0.05);健脾软肝方高、中、低剂量组组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且高、中、低剂量组之间α-SMA mRNA表达水平逐渐升高,呈一定的药物依赖关系。结论:健脾软肝方抗肝纤维化的作用机制可能与抑制大鼠肝脏内α-SMA及其mRNA的表达有关。

鳖甲软肝健脾方对肝星状细胞活化及细胞外基质代谢的影响

目的:通过研究鳖甲软肝健脾方对肝星状细胞(HSC)活化及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关信号分子蛋白表达水平的影响,探讨鳖甲软肝健脾方抗肝纤维化的作用机制。方法:运用血清药理学,以鳖甲软肝健脾方,鳖甲软肝健脾方拆方扶正组、拆方祛邪组,鳖甲煎丸含药血清干预HSC-T6细胞,24 h后,采用CCK8、凋亡荧光、流式细胞术、Western Blot检测鳖甲软肝健脾方对HSC活化、细胞外基质代谢[α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、组织金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9]及Wnt/β-catenin信号通路[β-catenin、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、p-GSK-3β、p-β-catenin]中相关信号分子蛋白表达水平的影响。结果:与阴性对照组比较,鳖甲软肝健脾方可抑制HSC-T6细胞增殖并促进其凋亡,同时,可显著抑制HSC-T6细胞中α-SMA、TGF-β1、TIMP-1、p-GSK-3β蛋白表达(P<0.05,P<0.01),促进MMP-2、MMP-9、p-β-catenin蛋白表达(P<0.05)。结论:鳖甲软肝健脾方可抑制HSC活化,并能促进细胞外基质降解,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路激活有关。