急性肺损伤对大鼠脾T细胞凋亡的影响及益肺健脾方的干预作用研究

目的观察急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠脾T细胞凋亡及X-连锁凋亡抑制蛋白相关因子(XIAP-associated factor 1,XAF1)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、死亡相关因子(factor associatedsuicide,FAS)蛋白表达情况,探讨益肺健脾方治疗ALI的机制是否与下调XAF1、FAS、TNF-α蛋白表达,抑制T细胞凋亡有关。方法60只SPF级雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组、阳性组、益肺健脾方高、中、低剂量组。阳性组给予地塞米松每天0.5 g/kg灌胃,益肺健脾方高、中、低剂量组分别给予每天12、6、3 g/kg的益肺健脾方灌胃,模型组与空白组均给予等量蒸馏水灌胃,每天给药1次,连续14 d。动物肺功能检测系统检测各组大鼠肺功能情况;观察各组大鼠肺部影像学特征及脏器指数和肺组织湿重/干重(W/D)变化;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肺部组织的病理学变化;流式细胞术检测各组大鼠脾T细胞亚群(CD4^(+)/CD8^(+))及脾T细胞的凋亡情况,Western Blot检测脾中XAF1、FAS、TNF-α蛋白表达水平。结果模型组大鼠肺功能降低,脾和胸腺脏器指数减少,肺组织湿重/干重(W/D)显著升高(P<0.01),肺部组织出现炎性渗出、肺泡破裂等现象,同时伴有肺纹理增粗以及大片磨玻璃影,T细胞亚群(CD4^(+)/CD8^(+))显著减少,XAF1、FAS、TNF-α蛋白表达及T细胞凋亡率显著升高(P<0.01);经益肺健脾方干预后,大鼠肺组织湿重/干重(W/D)明显降低,胸腺的脏器指数显著升高(P<0.05,P<0.01),T细胞亚群(CD4^(+)/CD8^(+))明显增加,XAF1、FAS、TNF-α蛋白表达及T细胞凋亡率明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论ALI可诱发大鼠脾XAF1、FAS、TNF-α蛋白表达上调及T细胞凋亡,益肺健脾方可能通过下调XAF1、FAS、TNF-α蛋白表达,抑制ALI诱发的脾T细胞凋亡。

健脾益肺Ⅱ号对熏烟联合脂多糖诱导大鼠肺组织氧化/抗氧化失衡的调节及超微结构的影响

目的探讨健脾益肺Ⅱ号调节机体氧化/抗氧化平衡的作用及其对肺组织超微结构的影响,从而阐明其防治COPD的作用机理,为临床应用提供实验依据。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、健脾益肺Ⅱ号低剂量组、健脾益肺Ⅱ号高剂量组、强的松组。以熏烟联合气管内滴入脂多糖（LPS）的方法建立大鼠模型,给予相应药物干预,观察记录大鼠一般状况;检测各组动物气道阻力、胸腔内压力及肺顺应性;电镜下观察各组肺组织超微结构的变化;测量各组动物肺组织匀浆液中SOD活性、MDA、GSH、GSH-Px含量的变化。结果一般状态观察结果显示,模型组大鼠一般状态较差,体质量较正常组增长慢,具有统计学意义（P〈0.01）,而健脾益肺Ⅱ号组大鼠体一般状态较好,体质量增长较快（P〈0.01）;肺功能检测提示,健脾益肺Ⅱ号可以降低模型大鼠气道阻力和胸腔内压力（P〈0.05-0.01）,肺顺应性无明显改变;透射电镜结果表明,模型大鼠肺泡细胞外缘不完整,微绒毛稀疏,毛细血管外缘不完整,肺泡间隔结缔组织层增厚,健脾益肺Ⅱ号可改善模型大鼠肺组织超微结构的损伤;经过健脾益肺Ⅱ号干预后,模型肺组织中的SOD活性、GSH含量升高（P〈0.01）,而MDA含量下降（P〈0.01）。结论健脾益肺Ⅱ号能纠正熏烟联合脂多糖诱导的大鼠肺组织氧化/抗氧化失衡,保护肺组织免于氧化损伤,减轻气道阻力和胸腔压力,这可能是健脾益肺Ⅱ号方治疗COPD的作用机理之一。

健脾益肺化淤方对小鼠Lewis肺癌作用的研究

目的探讨健脾益肺化淤方对肺癌的抑制和对化疗的协同增效作用。方法选择小鼠移植性Lew is肺癌为模型,观察健脾益肺化淤方以及与化疗药物顺铂(DDP)联合应用时的抑瘤率。结果健脾益肺化淤方对小鼠移植性Lew is肺癌有显著的抑制作用(P<0.05),并能显著增强DDP对小鼠Lew is肺癌的抑瘤作用(P<0.01)。结论健脾益肺化淤方对小鼠Lew is肺癌有抑制和对化疗药物有协同增效作用。

健脾益肺膏方治疗小儿反复呼吸道感染肺脾两虚、卫表不固证的临床疗效分析

目的观察健脾益肺膏方治疗小儿反复呼吸道感染(RRTI)肺脾两虚、卫表不固证的临床疗效,探析其运用于小儿RRTI预后的可行性。方法将84例RRTI肺脾两虚、卫表不固证患儿随机分为治疗组和对照组,每组42例。治疗组患儿给予健脾益肺膏方口服治疗,对照组给予脾氨肽口服冻干粉口服治疗,疗程为3个月。观察2组患儿治疗前后血中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM水平的变化情况,并评价2组的临床疗效及安全性。结果(1)治疗3个月后,治疗组总有效率为95.24%(40/42),对照组为76.19%(32/42);治疗组疗效明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)治疗后,2组患儿的血中IgG、IgA和IgM水平均较治疗前明显提高(P<0.05),且治疗组对患儿血中IgG、IgA和IgM水平的作用均明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)治疗组的不良反应发生率为2.38%(1/42),对照组为7.14%(3/42),组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论健脾益肺膏方治疗小儿RRTI肺脾两虚、卫表不固证疗效确切,可有效改善患儿临床症状,提高患儿免疫功能,且具有较高的安全性,可用于小儿RRTI的临床预后治疗。

健脾补肾益肺方改善慢性阻塞性肺疾病大鼠气流受限的机制研究

目的观察健脾补肾益肺方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠COX-2和p38MAPK蛋白的影响,研究其改善气流受限的作用机制。方法将40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、COX-2抑制剂组、健脾补肾益肺方组,每组10只。模型组、COX-2抑制剂组、健脾补肾益肺方组采用气管滴注脂多糖加熏香烟方法建立COPD大鼠模型。COX-2抑制剂组给予塞来昔布[10 mg/(kg·d)]灌胃,健脾补肾益肺方组给予健脾补肾益肺方[合生药量25.2 g/(kg·d)]灌胃,正常组和模型组予同等体积的生理盐水灌胃。采用动物肺功能分析系统测定各组大鼠FEV0.3、FVC、PEF、MMEF并留取标本。采用免疫组织化学法测定各组大鼠肺组织COX-2、p38MAPK蛋白的表达量。结果模型组、COX-2抑制剂组及健脾补肾益肺方组大鼠FEV0.3、FEV0.3/FVC、PEF、MMEF较正常组显著降低(P<0.01);COX-2抑制剂组、健脾补肾益肺方组大鼠FEV0.3、FEV0.3/FVC、PEF、MMEF较模型组显著增高(P<0.01);健脾补肾益肺方组大鼠MMEF较COX-2抑制剂显著增高(P<0.05)。模型组、COX-2抑制剂组、健脾补肾益肺方组大鼠肺组织COX-2、p38MAPK的表达较正常组显著增加(P<0.01或P<0.05);COX-2抑制剂组、健脾补肾益肺方组大鼠肺组织COX-2的表达较模型组显著降低(P<0.01);健脾补肾益肺方组大鼠p38MAPK的表达较模型组、COX-2抑制剂组显著降低(P<0.05)。结论健脾补肾益肺方通过抑制COPD大鼠的COX-2表达,改善气流受限;可能与下调p38MAPK的表达有关。

中西医结合治疗对慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者炎症因子及免疫功能的影响

目的:观察中西医结合治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者的临床效果以及对炎症因子、免疫功能的影响。方法:将60例AECOPD患者按随机数字表法分为治疗组和对照组各30例。2组均予现代医学综合性常规治疗,治疗组则加服补肾益肺健脾膏方,并配合离子导入活血祛痰中药。2组疗程均为6周。比较2组治疗前后血清前降钙素原(PCT)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、Ig A、Ig G、Ig M、CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+比值及自然杀伤(NK)细胞活性。结果:治疗后,2组血清PCT、hs-CRP、TNF-α、IL-6含量均较治疗前降低,IL-10含量均较治疗前增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。2组各指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗组血清Ig A、Ig G、Ig M、CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+比值及NK细胞活性均较治疗前增加,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组以上7项指标值与治疗前比较虽有升高趋势,但差异均无统计学意义(P>0.05);2组以上7项指标比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:在现代医学规范化治疗的基础上加用补肾益肺健脾膏方内服联合离子导入活血祛痰中药治疗AECOPD,能够有效抑制炎症反应,增强机体免疫功能。

健脾益肺Ⅱ号治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期178例临床研究

目的评价中药健脾益肺Ⅱ号对慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期的疗效和安全性。方法选取COPD稳定期患者263例,将病例按2∶1比例随机分为治疗组178例和对照组85例,两组分别予健脾益肺Ⅱ号和安慰剂,疗程2个月,随访4个月。观察治疗前、治疗后及随访后两组患者6分钟步行距离、生存质量评分(SGRQ)、肺功能、BODE指数、中医证候评分变化及不良反应。结果治疗组患者治疗后和随访后与治疗前比较6分钟步行距离明显增加(P<0.01);两组患者治疗后、随访后SGRQ总分、中医证候评分与本组治疗前比较差异均有统计学意义(P<0.01),且在治疗后两组间比较差异有统计学意义(P<0.05);中医证候疗效治疗组优于对照组(P<0.01);两组患者肺功能、BODE指数、安全性指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论健脾益肺Ⅱ号治疗COPD稳定期患者疗效确切,可提高患者生存质量,增加运动耐量,改善症状,安全性好。

益肺宣肺降浊方对血管性痴呆大鼠脑组织海马CaMPK-Ⅱ及突触蛋白表达的影响

目的探讨益肺宣肺降浊方治疗血管性痴呆的可能作用机制。方法 165只SD大鼠造模前随机选出24只作为假手术组,其余141只大鼠采用结扎双侧颈总动脉阻断血流法建立血管性痴呆模型,将造模成功的96只大鼠随机分为中药高、中、低剂量组和模型组、石杉碱甲组、脑复康组,每组16只。造模第15天开始灌胃给药,中药高、中、低剂量组分别给予益肺宣肺降浊方24.36、12.18、6.09 g/(kg·d),石杉碱甲组、脑复康组分别给予石杉碱甲片、脑复康片0.15 mg/(kg·d),模型组及假手术组均予等体积双蒸水。各组均灌胃30天后采用Western blot法检测大鼠脑组织海马钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MPK-Ⅱ)及突触蛋白水平。结果模型组大鼠脑组织海马Ca MPK-Ⅱ、突触蛋白表达均明显低于假手术组(P<0.05),石杉碱甲组、脑复康组和中药中、高剂量组Ca MPK-Ⅱ、突触蛋白表达均较模型组升高(P<0.05),并且以中药高剂量组Ca MPK-Ⅱ升高最明显(P<0.05)。结论益肺宣肺降浊方可能通过上调脑组织海马Ca MPK-Ⅱ、突触蛋白表达,改善学习和记忆功能,从而治疗血管性痴呆。

健脾益肺Ⅱ号方对烟草烟雾暴露联合脂多糖气道滴注诱导大鼠膈肌损伤的影响

目的探讨健脾益肺Ⅱ号方对烟草烟雾暴露联合脂多糖(LPS)气道滴注大鼠膈肌的保护作用及其机制。方法58只8周龄SD大鼠,根据出生时间均衡分配为正常组、模型组、健脾益肺Ⅱ号高剂量组[20 g/(kg·d)]、健脾益肺Ⅱ号低剂量组[10 g/(kg·d)]。模型组及药物干预组给予熏烟12周,并于熏烟第7、21天分别滴注200μL LPS。正常组暴露于空气,气道滴注生理盐水。用药组于第9周开始灌胃给药,正常组及模型组给予相应生理盐水灌胃,至第12周。记录并比较大鼠体重变化;HE染色方法观察肺部病理和膈肌病理改变;检测跨膈压和膈肌肌电;免疫组化法观察膈肌中Bax表达;通过qPCR方法检测泛素蛋白酶体通路C2蛋白亚基、E2/14k、MRuf-1、MAFbx mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠体重增长较少(P<0.01),单位视野内肺泡个数减少(P<0.01),跨膈压增高(P<0.05),膈肌炎症细胞浸润增多,Bax蛋白表达和MRuf-1 mRNA表达增多(P<0.01);与模型组比较,健脾益肺Ⅱ号高、低剂量组大鼠体重增长未见增加(P>0.05),健脾益肺Ⅱ号高剂量组大鼠肺泡数量明显增多,跨膈压明显降低(P<0.05);膈肌纤维间炎症细胞的浸润减少;膈肌组织中Bax的蛋白表达减少(P<0.01);健脾益肺Ⅱ号高、低剂量组膈肌组织中泛素E3连接酶MRuf-1的mRNA表达降低(P<0.01)。结论健脾益肺Ⅱ号方可减少膈肌细胞凋亡,其机制可能与减轻模型大鼠肺泡扩张程度和胸腔压力,减少膈肌炎症浸润和抑制泛素—蛋白酶体通路的激活有关。

小儿健脾益肺方改善哮喘小鼠气道高反应的实验研究

目的 探讨小儿健脾益肺方通过高迁移率组蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)炎症信号通路改善哮喘小鼠气道高反应的作用机制。方法 60只SPF级Balb/c小鼠随机数字表法分为空白组、模型组、布地奈德组、小儿健脾益肺方组、布地奈德+小儿健脾益肺方组,用卵清白蛋白(OVA)致敏、激发建立小鼠急性哮喘模型,分别予布地奈德(0.2 g/L)、小儿健脾益肺方(1.875 g/kg)干预。肺功能检测气道阻力,支气管肺泡灌洗液吉姆萨染色检测小鼠各种细胞占比情况,肺组织切片HE及PAS染色观察,ELISA检测血清及支气管肺泡灌洗液中OVA-IgE、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,蛋白质印迹法及免疫荧光检测HMGB1、髓样分化因子88(MyD88)、TLR4、p-NF-κB/NF-κB等通路蛋白表达情况。结果 与空白组比较,模型组气道阻力明显升高(P<0.01),支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞比例明显升高(P<0.01),组织病理学染色较空白组出现明显炎性细胞浸润、杯状细胞增生、气道上皮水肿、管腔狭窄,血清及支气管肺泡灌洗液中OVA-IgE、IL-6、IL-1β、IFN-γ、TNF-α表达升高(P<0.01),HMGB1、MyD88、TLR4、NF-κB等通路蛋白表达升高(P<0.05),NF-κB磷酸化程度升高(P<0.05)。与模型组比较,布地奈德组、小儿健脾益肺方组、布地奈德+小儿健脾益肺方组气道阻力降低,支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞占比升高、嗜酸性粒细胞降低(P<0.05),组织病理学染色结果显示炎症细胞浸润改善、平滑肌层增厚缓解、上皮完整性增加,杯状细胞化生减少,HE评分、PAS评分与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。血清和支气管肺泡灌洗液中,小儿健脾益肺方组、布地奈德组、布地奈德+小儿健脾益肺方组与模型组比较均能明显降低各项指标的含量(P<0.01);与布地奈德组比较,小儿健脾益肺方组血清OVA-IgE含量明显升高(P<0.05),小儿健脾益肺方组和布地奈德+小儿健脾益肺方组HMGB1含量明显降低(P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,与模型组比较,小儿健脾益肺方组、布地奈德组、布地奈德+小儿健脾益肺方组均能有效降低HMGB1、MyD88和TLR4蛋白的表达和NF-κB的磷酸化程度,差异具有统计学意义(P<0.01);与布地奈德组相比,小儿健脾益肺方组HMGB1的表达明显下降,而TLR4、MyD88的表达升高,布地奈德+小儿健脾益肺方组HMGB1、TLR4、MyD88的表达均明显下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光检测结果显示,小儿健脾益肺方组、布地奈德组、布地奈德+小儿健脾益肺方组HMGB1与模型组比较明显降低(P<0.01),布地奈德+小儿健脾益肺方组的HMGB1和TLR4较布地奈德组均明显降低(P<0.05)。结论 小儿健脾益肺方和布地奈德均能有效缓解哮喘相关病理改变,降低炎症因子表达,抑制HMGB1/TLR4/NF-κB炎症信号通路,改善气道高反应。小儿健脾益肺方和布地奈德联合应用优于布地奈德单独应用。HMGB1/TLR4/NF-κB炎症信号通路是健脾益肺方改善儿童哮喘气道高反应性的潜在作用机制。

呼吸机配合健脾益肺方治疗肌萎缩侧索硬化并发呼吸衰竭9例

目的探讨双水平气道正压(BIPAP)呼吸机配合健脾益肺方治疗肌萎缩侧索硬化(ALS)并发呼吸衰竭患者的临床疗效。方法 9例ALS并发呼吸衰竭患者治疗期间给予营养支持、对症处理,在使用BIPAP呼吸机治疗的基础上加用健脾益肺方颗粒,每日1剂,分两次冲服,连续治疗1个月。治疗前后采用电极法测定pH值、二氧化碳分压(PCO2)、氧分压(PO2)血气分析,记录BIPAP呼吸机使用时间及ALS自我评估问卷(ALSAQ-40)评分。结果治疗后患者PCO2、PO2水平与治疗前比较明显好转,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后患者使用BIPAP呼吸机时间明显缩短(P<0.05);治疗后ALSAQ-40量表情绪反应评分有所改善,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05),其他各项评分比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 BIPAP呼吸机配合健脾益肺方可有效缓解ALS并发呼吸衰竭患者呼吸肌疲劳,改善其呼吸功能,并缩短BIPAP呼吸机使用时间,改善其症状。