健脾祛湿解毒方治疗宫颈高危型HPV感染的临床疗效

目的:观察健脾祛湿解毒方治疗宫颈高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的临床疗效。方法:选取符合纳入标准的68例脾虚湿热型宫颈HR-HPV感染患者,依据随机数字表随机分为观察组和对照组,每组各34例。对照组给予重组人干扰素α2b阴道泡腾片治疗,观察组在对照组用药的基础上口服健脾祛湿解毒方,3个月为1个疗程,共治疗2个疗程。比较两组HR-HPV转阴率、临床有效率以及治疗前后中医证候积分变化情况。结果:观察组HR-HPV转阴23例,对照组HR-HPV转阴14例,观察组HR-HPV转阴率显著高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组中医证候积分均较治疗前降低,且观察组明显低于对照组(P<0.01)。观察组总有效率91.18%(31/34),对照组总有效率70.59%(24/34),观察组明显优于对照组(P<0.05)。结论:健脾祛湿解毒方联合重组人干扰素α2b阴道泡腾片能明显改善脾虚湿热型宫颈高危HR-HPV感染患者的中医临床证候,有效清除持续感染的HR-HPV,临床疗效较好。

基于中性粒细胞胞外诱捕网途径探讨胃黏膜肠上皮化生的发生机制及中药预测研究

目的探讨中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对胃黏膜肠上皮化生(Intestinal metaplasia,IM)的作用机制及治疗靶点,为中医药防治IM提供新思路和新方向。方法从公共数据库下载IM及NETs相关数据集,通过免疫浸润分析、差异分析及基因相关性分析获得IM与NETs共表达的关键基因集;采用功能富集分析、蛋白互作网络、分子对接技术及实验验证等方法进一步阐述IM及NETs的相关性;最后将获得的关键基因与Coremine Medical平台相互映射,预测中医治疗IM的有效中药和治法。结果共筛选出6个IM与NETs形成相关的共表达的差异基因,分别为THBD、HDAC9、FGA、AQP9、DECR1和PIK3CD,这些基因与NETs的3个标记性蛋白(NE、PADI4、MPO)存在不同程度的相关性,其功能主要富集在呼吸爆发与防御反应、纤维蛋白溶解等生物学过程上;中药预测共映射出中医治疗IM的中药112味,按照功效可归为34类,其中清热解毒类中药出现频次最高,其次为活血化瘀药、温里药、补气药等。结论在IM的病理发生及发展过程中存在NETs,靶标基因NE和THBD可能存在相互关联作用,共同通过NETs通路参与IM进展;健脾化瘀解毒法是中医治疗IM的核心治法,其可能通过抑制NETs的形成,从而减缓IM的发展进程。

健脾解毒方通过Hippo信号通路抑制大肠癌上皮间质转化的机制研究

目的探讨健脾解毒方对大肠癌转移能力和上皮间质转化(EMT)的影响及可能的作用机制。方法①采用细胞活力检测(CCK-8)法观察不同浓度健脾解毒方对人肠癌细胞生长的抑制作用;分别采用Transwell实验和划痕愈合实验检测健脾解毒方对肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot法检测健脾解毒方对细胞中EMT和Hippo信号通路相关蛋白表达的影响。②采用肠癌肺转移模型体内验证健脾解毒方对肠癌肺转移的影响及对Hippo信号通路的影响,使用苏木精-伊红(HE)染色检测肺转移灶转移情况,采用免疫组织化学法检测肺转移灶中Yes相关蛋白(YAP)的表达。③使用小分子抑制剂(XMU-MP-1)干预Hippo信号通路后,Transwell实验、划痕实验和Western blot法检测健脾解毒方对肠癌细胞侵袭转移和EMT的影响。结果①健脾解毒方以剂量和时间依赖性方式抑制人肠癌细胞的生长。与对照组比较,健脾解毒方能够明显抑制人肠癌细胞的侵袭和迁移能力(P<0.05),同时健脾解毒方能够抑制肠癌细胞EMT进程;进一步研究显示健脾解毒方可以促进Hippo信号通路的激活,减少YAP入核。②体内实验的肺转移灶HE染色结果显示,健脾解毒方可以抑制肠癌肺转移灶的体积,免疫组织化学检测提示健脾解毒方可以减少转移灶中YAP的表达。③使用XMU-MP-1抑制Hippo信号通路能够增加YAP在细胞核内的积累,促进肠癌细胞的侵袭迁移能力及EMT相关蛋白的表达,促进肠癌转移;健脾解毒方可以显著减少小分子抑制剂组肠癌细胞侵袭迁移能力以及EMT的进程。结论健脾解毒方能够抑制人肠癌细胞的转移能力,其作用机制与激活Hippo信号通路有关。

健脾除痰解毒方通过PD-1/PD-L1通路平衡Th1/Th2漂移而增强Lewis肺癌小鼠免疫功能

目的:探讨健脾除痰解毒方(JCJF)增强Lewis肺癌小鼠免疫功能是否与其通过程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)通路平衡Th1/Th2细胞相关。方法:取C57BL/6J小鼠60只并建立Lewis肺癌模型,按随机数字表法分为模型(model)组,顺铂(DDP)组,低、中、高剂量JCJF(L-JCJF、M-JCJF和H-JCJF)组,以及H-JCJF+DDP组,每组10只;另取10只健康C57BL/6J小鼠作为空白组。各组小鼠均给予相应处理,连续治疗14d。处死小鼠后取小鼠瘤体和脾脏,计算抑瘤率和脾脏指数;HE染色观察小鼠肿瘤组织和肺组织的形态学变化;TUNEL法检测小鼠肿瘤细胞凋亡;免疫组化染色检测肿瘤组织PD-L1蛋白表达;ELISA法检测小鼠血清干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、IL-10和IL-13含量;RT-qPCR检测肿瘤组织PD-1、PD-L1、Bax和Bcl-2的mRNA表达;Western blot检测肿瘤组织PD-1、PD-L1、Bax、Bcl-2、IL-10和IL-13蛋白表达。结果:与model组相比,H-JCJF+DDP明显抑制移植瘤生长,能在最大程度上减小肿瘤体积和质量(P<0.05),抑瘤率达59.72%,亦显著降低小鼠脾脏指数(P<0.05);H-JCJF+DDP组小鼠肿瘤组织凋亡率显著升高(P<0.05),PD-L1蛋白表达显著减少(P<0.05);H-JCJF+DDP能显著升高小鼠血清IFN-γ和IL-2水平(P<0.05),降低IL-10和IL-13水平(P<0.05);H-JCJF+DDP亦降低肿瘤组织PD-1、PD-L1和Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),增加Bax的mRNA和蛋白表达(P<0.05),且显著减少IL-10和IL-13蛋白表达(P<0.05)。结论:JCJF可诱导肺癌细胞凋亡,明显抑制肺癌小鼠瘤体生长,还可上调小鼠血清IFN-γ和IL-2水平,下调IL-10和IL-13水平,从而平衡Th1/Th2漂移,改善小鼠免疫功能,抑制肿瘤细胞免疫逃逸,其机制可能与下调PD-1/PD-L1通路有关。

自拟益气健脾解毒化瘀方联合艾曲泊帕治疗恶性肿瘤化疗相关性血小板减少症的临床效果

目的 探讨自拟益气健脾解毒化瘀方联合艾曲泊帕治疗恶性肿瘤化疗相关性血小板减少症的临床效果。方法 选取2018年1月—2022年4月收治的78例恶性肿瘤化疗相关性血小板减少症作为研究对象,按照治疗方法分为观察组(自拟益气健脾解毒化瘀方联合艾曲泊帕治疗)和对照组(艾曲泊帕治疗),每组39例。观察2组治疗后的临床效果,并比较治疗前后症状积分、血清炎性因子[白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、细胞因子[血小板第4因子(PF4)、血小板生成素(TPO)、血管性血友病因子(vWF)]及凝血功能指标[血小板计数(PLT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)]。结果 治疗后,观察组临床总有效率为94.87%(37/39)高于对照组79.49%(31/39)(P<0.05)。治疗后,2组血清IL-10、TNF-α、PF4、TPO、vWF水平及各症状积分均低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组PLT高于治疗前,PT、APTT短于治疗前;且观察组PLT高于对照组,PT、APTT短于对照组(P<0.05)。结论 自拟益气健脾解毒化瘀方联合艾曲泊帕治疗恶性肿瘤化疗相关性血小板减少症,能够提高疗效,减轻临床症状及炎症反应,改善凝血功能。

健脾解毒方联合经皮肝动脉化疗栓塞术治疗原发性肝癌疗效观察

目的观察健脾解毒方联合经皮肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗原发性肝癌患者的临床疗效。方法将66例患者按平行对照研究方法,分为治疗组34例和对照组32例,两组患者在性别、年龄、病情方面比较,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组使用TACE术及对症治疗,治疗组在对照组治疗基础上联合口服中药健脾解毒方,并随症加减。两组均治疗3个月后观察患者临床症状、疗效、KPS积分、肝功能及甲胎蛋白(AFP)指标。结果两组中医症状、肝功能、AFP方面与治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。治疗组在中医症状、KPS积分、γ-GT、AFP方面的疗效明显优于对照组(P<0.01),在证候疗效、ALB、AKP方面的改善与对照组比较,亦有统计学差异(P<0.05)。结论健脾解毒方联合TACE术治疗肝癌,在改善症状、提高生活质量以及对肝功能、AFP等指标影响方面有显著优势。

健脾解毒方对大肠癌肿瘤血管形成相关基因表达的影响

目的:探讨健脾解毒方对大肠癌肿瘤血管形成相关基因表达的影响。方法:采用水提法制作健脾解毒方粗提取物,MTT法检测健脾解毒方粗提取物对大肠癌HT29细胞增殖的影响,Graph Pad Prism 5软件计算IC50(50%inhibitory concentration)值,Affymetrix基因表达谱芯片检测健脾解毒方干预后有显著差异表达的基因并进行路径富集分析,基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路利用IPA(Ingenuity Pathway Analysis)软件对肿瘤血管形成的相关差异表达基因进行生物信息学分析并构建网路关系图,Western印迹法验证肿瘤血管形成相关差异表达的关键基因的蛋白表达水平。结果:健脾解毒方粗提取物能够抑制大肠癌HT29细胞增殖,处理24,48及72 h后的IC50值分别为13.060,9.646及8.448 mg/m L。Affymetrix基因表达谱芯片检测健脾解毒方干预后显著上调的基因218个,显著下调的基因252个,主要为生物合成、新陈代谢、细胞凋亡、抗原提取、血管生成等相关基因,其中肿瘤血管形成相关差异表达基因12个。IPA软件分析结果显示健脾解毒方干预后可使大肠癌中的鞘磷脂磷酸二酯酶3(sphingomyelin phosphodiesterase 3,SMPD3),VEGF,血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA),整合数α亚基1(integrin subunit alpha 1,ITGA1),组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB),组织蛋白酶S(cathepsin S,CTSS)等基因下调,GRB2相关结合蛋白2(GRB2 associated binding protein 2,GAB2),PLAUR(plasminogen activator,urokinase receptor)等基因上调。Western印迹检测显示健脾解毒方能明显下调磷酸化mTOR(phospho-mTOR,P-mTOR),信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3),缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和VEGF蛋白表达,明显上调磷酸化P53(phospho-P53,P-P53)蛋白表达。结论:健脾解毒方可能通过影响mTOR-HIF-1α-VEGF信号通路抑制大肠癌肿瘤血管形成,这可能是健脾解毒方治疗大肠癌的作用机制之一。

健脾解毒方通过抑制环氧化酶2下调幽门螺杆菌诱导的人胃癌细胞血管内皮生长因子表达

目的:探讨健脾解毒方对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染胃癌细胞诱导的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的调控作用及可能的机制。方法:采用Hp标准株NCTC11637与人胃癌MKN45细胞共培养的方法感染MKN45细胞,实验中共分7组:对照组、Hp感染组、NS398抑制组、空白血清组和5%、10%、20%健脾解毒方药物血清组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测Hp感染对人胃癌MKN45细胞VEGF和环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA表达的影响及健脾解毒方血清对Hp感染诱导的人胃癌MKN45细胞VEGF和COX-2mRNA表达的影响;采用COX-2特异性抑制剂NS398(50μmol/L)抑制COX-2的表达后,检测Hp感染后人胃癌MKN45细胞VEGF mRNA表达的变化。结果:与对照组比较,Hp感染MKN45细胞6h后,Hp感染组COX-2mRNA的表达明显上调(P<0.01);感染12h后,VEGF mRNA表达亦明显上调(P<0.01);而采用COX-2特异性抑制剂NS398抑制COX-2表达后,Hp感染组VEGF mRNA的表达相比抑制前明显下调(P<0.01)。与Hp感染组比较,5%、10%和20%健脾解毒方药物血清均可下调Hp诱导的人胃癌MKN45细胞VEGF和COX-2mRNA的表达,并呈一定的剂量依赖效应。结论:Hp感染可诱导人胃癌细胞VEGF和COX-2表达,健脾解毒方通过下调COX-2表达进而下调VEGF的表达,这可能是其防治胃癌的重要作用机制之一。

健脾解毒方调控TLRs/NF-κB信号通路对5-FU致大鼠肠黏膜炎的保护作用

目的观察健脾解毒方通过TLRs/NF-κB信号通路对5-FU致大鼠肠黏膜炎的保护作用。方法将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、健脾解毒方低、中、高剂量组(0.31 g/mL,0.62 g/mL,1.24 g/mL)、培菲康组6组,每组10只。除空白组外,每组大鼠予5-FU(50 mg/kg)腹腔注射,每日1次,连续5 d;中药治疗组在化疗的同时分别灌胃给予低、中、高剂量健脾解毒方(3.1 g/kg,6.2 g/kg,12.4 g/kg),每天1次,连续7 d;培菲康组在化疗的同时灌胃给予培菲康(151 mg/kg),每天1次,连续7 d。每日观察大鼠腹泻情况、测量大鼠体质量,7天后HE染色观察大鼠小肠组织结构,免疫组化检测小肠组织中紧密连接蛋白Occludin蛋白的表达,ELISA法检测各组大鼠血清TNF-α、IL-10表达,Western blot法检测肠组织中MyD88、p65与TLRs含量。结果 (1)实验过程中空白组大鼠体质量进行性增加,实验第3天起模型组及各给药组大鼠体质量开始下降,实验第5天起,健脾解毒方高剂量组大鼠体质量下降小于模型组(P<0.05);第5天起,除空白组外的其他组大鼠出现腹泻,至第6天达到腹泻高峰,且第6天健脾解毒方高剂量组的腹泻发生率低于模型组(P<0.05)。(2)与空白组比较,模型组Occludin蛋白表达量减少(P<0.01);与模型组比较,健脾解毒方各剂量组Occludin蛋白表达量均增加,其中以健脾解毒方高剂量组增加最显著(P<0.01)。(3)模型组大鼠血清TNF-α表达高于空白组(P<0.05),各治疗组的TNF-α均低于模型组,且健脾解毒方中、高剂量组的TNF-α低于健脾解毒方低剂量组(P<0.05);模型组大鼠的IL-10低于空白组(P<0.05),健脾解毒方高剂量组、培菲康组高于模型组(P<0.05)。(4)模型组MyD88、p65、TLR4蛋白表达高于空白组(P<0.01),健脾解毒方中、高剂量组、培菲康组低于模型组,且健脾解毒方中、高剂量组的蛋白表达低于健脾解毒方低剂量组(P<0.01)。结论健脾解毒方能够抑制TLRs/NF-κB信号通路,调节炎性相关因子,减轻5-FU所致大鼠肠道黏膜炎症。

健脾解毒方对大肠癌细胞mTOR信号通路相关蛋白表达的影响

目的探讨健脾解毒方对大肠癌细胞增殖的影响及可能作用机制。方法采用水提法制作健脾解毒方提取物,利用超高效液相-高分辨飞行时间质谱法分析健脾解毒方的主要成分,MTT法检测健脾解毒方对大肠癌细胞增殖的影响,Graphpad Prism5软件计算IC50值,流式细胞术检测细胞周期,Western Blot技术检测Phospho-m TOR、Phospho-P53和P21的蛋白表达。结果健脾解毒方能够抑制大肠癌细胞增殖,处理24、48、72 h后四种大肠癌细胞系的IC50值分别为HCT116(6.894、5.668、3.648 mg/m L)、Lo Vo(14.65、8.737、7.849 mg/m L)、SW48(8.029、7.026、5.740 mg/m L)及HT29(13.06、9.646、8.448 mg/mL);健脾解毒方使大肠癌细胞周期阻滞在G1期;并能够下调Phospho-mTOR蛋白表达(P<0.05),上调Phospho-P53和P21蛋白的表达(P<0.05),使大肠癌细胞周期阻滞在G1期。结论健脾解毒方可能通过m TOR-P53-P21途径抑制大肠癌细胞的增殖,这可能是健脾解毒方治疗大肠癌的作用机制之一。

健脾化湿解毒方对急性肝损伤小鼠肠屏障功能的影响

目的:探讨健脾解毒凉血方治疗肝损伤肠屏障功能障碍的作用靶点。方法:选取C57BL/6雄性小鼠32只,随机分为正常组、模型组、中药组、培菲康组,腹腔注射硫代乙酰胺100 mg/kg造模;中药组予以健脾解毒凉血方灌胃,培菲康组给予培菲康溶液灌胃;16 h后采集小鼠血清、肝组织、小肠组织,观察小鼠肝功能、肠道组织HE染色变化,免疫组织化学染色方法观察小肠闭锁小带蛋白-1表达。结果:模型组、中药组、培菲康组小鼠的ALT、AST均显著高于正常组,模型组、中药组、培菲康组比较差异无统计学意义(P>0.05)。小肠组织在光镜和电镜下均可观察到中药组病变轻于模型组和培菲康组,免疫组织化学染色在小肠上皮细胞上可见闭锁小带蛋白-1棕黄色阳性标记,模型组、中药组、培菲康组阳性标记均显著少于正常组,中药组阳性标记显著多于模型组(P<0.05)。结论:健脾解毒凉血方治疗硫代乙酰胺诱导急性肝损伤小鼠,可维护肠上皮细胞紧密连接部闭锁小带蛋白-1表达,修复肠屏障功能。

解毒化瘀健脾方对慢性萎缩性胃炎伴异型增生大鼠PTEN、E-cad表达的影响

目的观察解毒化瘀健脾方对慢性萎缩性胃炎伴异型增生模型大鼠的抑癌基因磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)和上皮细胞钙黏蛋白(E-cad)基因的影响。方法运用综合造模方法 N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG),建立慢性萎缩性胃炎伴异型增生病变大鼠模型,随机分为模型组、西药组(维甲酸)、中药组(解毒化瘀健脾方),进行相应药物干预,另选取正常大鼠作为正常对照组。应用Real-time PCR、Western blotting技术检测大鼠PTEN、E-cad mRNA及蛋白表达水平的变化。结果与正常对照组比较,模型组PTEN、E-cad mRNA及蛋白表达量显著降低(P<0.01);中药组E-cad mRNA及蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,中药组和西药组PTEN、E-cad mRNA及蛋白表达量显著增加(P<0.05)。与西药组比较,中药组PTEN、E-cad mRNA表达量明显升高(P<0.01);中药组PTEN蛋白表达量降低,E-cad蛋白表达升高(P<0.01)。结论解毒化瘀健脾方可诱导慢性萎缩性胃炎伴异型增生胃黏膜细胞PTEN、E-cad基因的蛋白表达量上升,从而实现对慢性萎缩性胃炎伴异型增生的治疗,逆转胃癌前病变。

刘万里教授辨治脾虚湿毒型大肠腺瘤经验采撷

总结刘万里教授辨治脾虚湿毒型大肠腺瘤经验。刘教授认为大肠腺瘤的基本病机为脾虚湿毒内蕴,气血壅滞而成瘤,其主要病理因素为痰湿之邪,病理核心为脾虚湿毒内蕴。刘教授重视辨识患者体质,认为该病患者多为本虚标实之体,治疗当以健脾助运为先,重在利湿解毒散结。自拟健脾利湿解毒方(党参,白术,土茯苓,忍冬藤,连翘,白薇),在减少腺瘤数目,改善患者临床症状以及预防复发方面疗效显著。

疏肝健脾解毒方对乳腺癌癌前病变肝郁证大鼠模型乳腺组织血管生成的影响

目的研究中药疏肝健脾解毒方对乳腺癌癌前病变肝郁证大鼠模型乳腺组织微血管密度(microvesseldensity,MVD)、血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)及乳腺组织结构的影响,探讨其防治乳腺癌的作用机制。方法采用二甲基苯蒽灌胃及夹尾法制备乳腺癌癌前病变肝郁证大鼠模型,随机分为模型组(蒸馏水)、中药组(疏肝健脾解毒方10.35g/kg)、三苯氧胺组(2.0mg/kg),另取10只为空白对照组,分别相应干预4周后,制备乳腺组织石蜡切片进行病理学观察,采用免疫组织化学方法及Western-blot法检测各组大鼠乳腺组织中MVD及VEGF表达情况。结果免疫组化结果显示,与模型组比较,中药组及三苯氧胺组乳腺组织非典型增生现象减少,乳腺组织MVD及VEGF水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),中药组MVD及VEGF水平稍低于三苯氧胺组,差异无统计学意义(P>0.05);Western-blot结果显示:与模型组比较,中药组及三苯氧胺组乳腺组织非典型增生现象减少,乳腺组织MVD及VEGF水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),中药组MVD及VEGF水平与三苯氧胺组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论中药疏肝健脾解毒方可在一定程度上降低乳腺癌癌前病变乳腺组织非典型增生倾向,其机制可能与降低VEGF水平、抑制新生血管生成有关。

基于ERK/Cyclin E通路探讨健脾化瘀解毒方逆转CAG大鼠胃黏膜癌变效应机制

目的探讨健脾化瘀解毒方对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠增殖、分化ERK/Cyclin E信号通路的影响。方法选用SPF级SD大鼠,运用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)复合造模法复制CAG大鼠模型,设立分组:正常组,模型组,叶酸组,健脾化瘀解毒方高、中、低组。HE染色观察大鼠胃黏膜组织病理学改变;采用qRT-PCR法检测胃黏膜组织ERK1、ERK2、Cyclin E mRNA转录水平;免疫组化法检测胃黏膜组织ERK1、ERK2、Cyclin E蛋白表达。结果健脾化瘀解毒方可显著改善CAG大鼠胃黏膜上皮腺体结构、形态紊乱及细胞异型性等病理表现。模型组CAG大鼠胃黏膜上皮的ERK1、ERK2、Cyclin E mRNA水平及蛋白表达评分均较正常组显著增加(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,健脾化瘀解毒方能显著下调CAG大鼠胃黏膜上皮的ERK1、Cyclin E mRNA水平及蛋白表达评分(P<0.05,P<0.01),以高剂量组疗效最佳;健脾化瘀解毒方对ERK2无显著调控作用。结论健脾化瘀解毒方能显著下调ERK1、Cyclin E的表达,抑制胃黏膜上皮细胞的过度增殖,进而阻断CAG恶性转变。

健脾化瘀解毒方调节NLRP3炎症小体活化的生物信息学研究

目的基于生物信息学方法分析健脾化瘀解毒方对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化的作用机制。方法通过GEO数据库公开发表的基因芯片信息获取NLRP3炎症小体活化的相关基因,并进行差异基因表达分析。利用中药系统药理分析平台(TCMSP)筛选健脾化瘀解毒方的主要活性成分,并结合相关文献对其进行适当补充。借助Pubchem数据库和Swiss Target Prediction数据库查找主要活性成分的作用靶基因。绘制韦恩图得到活性成分靶点与差异基因的交集,即健脾化瘀解毒方调节NLRP3炎症小体活化的潜在作用靶点;构建健脾化瘀解毒方活性成分-靶点网络及靶蛋白相互作用(PPI)网络,并进行GO功能及KEGG通路富集分析。结果共获得健脾化瘀解毒方9味中药的93个主要活性成分,798个作用靶点;得到NLRP3炎症小体活化相关靶点743个,交集靶基因62个;关键靶点包括IL-6、VEGFA、TNF、SRC、IL-1β、PTGS2、BCL2L1、CCND1、FGF2、ICAM1等;共涉及26条GO条目与25条相关信号通路。结论健脾化瘀解毒方可能主要通过槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、豆甾醇等活性成分,作用于IL-6、IL-1β、TNF等核心治疗靶点,通过PI3K-Akt、HIF-1及MAPK等信号通路,调节NLRP3炎症小体活化来影响细胞焦亡,发挥防治胃癌前病变的作用。

健脾化瘀解毒方调控PI3K/AMPK-mTOR-ULK1抑制ROS诱导GPL细胞自噬的机制研究

目的:探讨健脾化瘀解毒方通过抑制氧化应激所致胃癌前病变(GPL)大鼠胃黏膜上皮细胞(GECs)自噬,保护胃黏膜、防治癌变的机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、维酶素组及健脾化瘀解毒方高(9 g/kg)、低(4.5 g/kg)剂量组,复制GPL大鼠模型,于造模第12 w连续灌胃给药10 w,实验结束时麻醉大鼠后,取血分离血清检测ROS、SOD、MDA水平;取胃窦部胃黏膜,观察组织病理学(HE染色)和肠上皮化生(AB-PAS染色),检测GECs的PI3K、mTOR、AMPK、Raptor、ULK1、ATG13、Beclin1、ATG4B mRNA及miR182、miR30a、miR206和Beclin1、HMGB1、ATG5、MUC2、CDX2、ATG2B蛋白表达。结果:正常对照组大鼠胃黏膜无异常;模型组大鼠胃黏膜萎缩,空泡样变、组织异型性变,异型增生灶占胃黏膜厚度的1/3,各给药组胃黏膜病理学改变不同程度减轻;与模型组比较,健脾化瘀解毒方组PI3K、mTOR mRNA及miR30a、miR206显著升高,AMPK、Raptor、ULK1、ATG13、Beclin1、ATG4B mRNA及miR182和Beclin1、HMGB1、ATG5、MUC2、CDX2蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:健脾化瘀解毒方可通过影响miR182、miR30a、miR206等miRNAs活化,调控PI3K/AMPK-mTOR-ULK1通路,从而抑制氧化应激诱导自噬,逆转GPL大鼠GECs的肠化和损伤,防止GPL癌变。

健脾解毒方对裸鼠胃癌皮下移植瘤氟尿嘧啶治疗的增效作用

目的：探讨健脾解毒方对氟尿嘧啶（5-Fu）治疗人胃癌细胞皮下移植瘤的增效作用。方法：采用皮下接种构建裸鼠人胃癌MKN45异位移植瘤模型,建立模型后,随机分为6组：A生理盐水组;B健脾解毒方低剂量组;C健脾解毒方中剂量组;D健脾解毒方高剂量组;E5-FU组;F健脾解毒方联合5-FU组。治疗4周后处死各组老鼠,观察健脾解毒方对移植瘤体积及裸鼠体质量的影响及对5-FU治疗效果的影响。结果：（1）对体质量的影响：经健脾解毒方及5-Fu干预后,除5-Fu组体质量增加不显著外,其余各组组间比较无统计学意义（P〉0.05）。（2）对抑瘤率的影响：治疗后,健脾解毒方低、中、高剂量组、5-FU组及联合组各组的瘤体抑瘤率分别为18.96%、40.97%、50.94%、51.03%、54.43%。（3）对瘤重的影响：健脾解毒方组及5-FU组瘤体质量虽然小于模型组,但是差异无统计学差异（P〉0.05）;联合给药组同模型组及低剂量组比较有统计学差异（P=0.011、P=0.032）。结论：健脾解毒方煎剂具有一定抑制肿瘤生长的能力,在联合化疗药物作用下,其抑制效果明显,在有效治疗剂量中,健脾解毒方以剂量依赖性方式抑制裸鼠异位瘤的生长。

健脾化瘀解毒方治疗慢性萎缩性胃炎的临床研究

目的探讨健脾化瘀解毒方治疗脾虚气滞、挟瘀毒内阻证型慢性萎缩性胃炎的临床疗效。方法将80例入选患者随机分为治疗组和对照组,每组40例。治疗组给予张氏"健脾化瘀解毒丸",对照组给予西药抗幽门螺杆菌及对症治疗。3个月后,比较临床综合疗效、中医证候积分、胃镜下黏膜评分、组织病理疗效、幽门螺杆菌根除率等指标变化情况。结果 2组患者中医证候积分比较,治疗组症状积分显著低于对照组,差异有统计意义(P<0.05);治疗前后胃镜下黏膜评分比较,治疗组治疗后胃镜下黏膜评分与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前后病理疗效比较,其中治疗组治疗后萎缩程度积分均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);但肠上皮化生评分和异型增生积分与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);2组患者幽门螺杆菌根除率比较,治疗前治疗组幽门螺杆菌为28例(70.0%),对照组为25例(62.5%);治疗后治疗组幽门螺杆菌阳性7例,根除率75.0%;对照组幽门螺杆菌阳性16例,根除率36.0%,2组根除率比较差异有统计学意义(χ~2=6.42,P<0.05)。结论健脾化瘀解毒方治疗后可以明显缓解患者胃痛、胃胀以及嗳气、纳呆、疲倦和嘈杂等不适症状,并能改善胃镜下胃黏膜局部循环,还能促进萎缩腺体恢复,缓解胃黏膜炎症状态,并有效提高幽门螺杆菌清除率,但对于逆转肠上皮化生、异型不典型增生,此研究不能体现2组的差异。

疏肝健脾解毒方抑制性腺轴和PI3K/AKt/mTOR信号通路影响乳腺癌前病变

目的研究疏肝健脾解毒方通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路和性腺轴来逆转大鼠乳腺癌前病变的分子机制.方法将60只SD雌性大鼠随机分为6组:空白组,乳腺癌前病变模型组(模型组),疏肝健脾解毒方低、中、高剂量组,他莫昔芬组,每组10只.采用二甲基苯蒽(DMBA)造模法造模.实验第1天用溶解有DMBA的芝麻油(10mg/mL),按100 mg/kg给予大鼠一次性灌胃处理.ELISA检测卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)、孕酮(P)、睾酮(T)及雌二醇(E2);RT-PCR检测雌激素受体(ER)、PI3K、Akt及mTOR的mRNA表达水平.结果与模型组比较,疏肝健脾解毒方各剂量组及他莫昔芬组体质量升高(P<0.05),卵巢和子宫系数均降低(P<0.05),FSH、LH、PRL、P、T、E_(2)、ER mRNA、PI3K mRNA、Akt mRNA及mTOR mRNA表达量均降低(P<0.05).与疏肝健脾解毒方低剂量组比较,疏肝健脾解毒方中、高剂量组体质量升高(P<0.05),子宫与卵巢系数降低(P<0.05);疏肝健脾解毒方高剂量组FSH、LH、PRL、P、T、E2降低(P<0.05),ER、PI3K、Akt、mTOR mRNA表达量降低(P<0.05).与他莫昔芬组比较,中药高剂量组子宫与卵巢系数小幅度升高(P<0.05).结论疏肝健脾解毒方可能通过对性腺轴的抑制,使ER的表达下降,从而抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的表达,逆转了乳腺癌前病变,其作用效果随着中药剂量增高而加强.