基于SIRT1/NF-κB炎性通路探讨加味脑泰方对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马组织病理形态的影响

目的探讨加味脑泰方(以下简称JWF)对血管性痴呆(vasculardementia,VD)大鼠SIRT1/NF-κBp56炎性通路的调控作用。方法采用双侧颈总动脉结扎法(two-vesselocclusion,2-VO)复制VD大鼠模型。实验设正常组,假手术组,模型组,JWF高、中、低剂量组和奥拉西坦组,其中JWF高、中、低剂量组和奥拉西坦组分别灌胃给予JWF17.0、34.0、51.0g/kg和奥拉西坦0.216g/kg,其余3组灌服等容量蒸馏水,连续干预30d。采用Morris水迷宫、HE染色分别检测大鼠学习记忆能力和海马组织病理形态变化;采用免疫组化检测沉默信息调节因子-1(silentinformatioregulator-1,SIRT1)、核因子κB抑制蛋白d亚基(ThenuclearfactorκBinhibitstheproteinsubunit,IκBα)、核因子-κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠学习记忆能力显著降低(P<0.05),海马神经元变性、坏死,炎性细胞浸润增加,且SIRT1、IκBα表达下调,NF-κBp56表达上调(P<0.05);与模型组比较,奥拉西坦组和JWF高、中剂量组大鼠学习记忆能力显著增强(P<0.05),海马组织中神经元锥体细胞排列较整齐,轮廓清晰,炎性细胞浸润显著减少,且海马组织内SIRT1、IκBα表达上调,NF-κBp56表达下调(P<0.05)。结论JWF对血管性痴呆大鼠炎性相关信号通路SIRT1/NF-κBp56具有明显的调控作用,这可能是其保护VD大鼠海马神经元继而改善学习记忆能力的重要机制之一。

加味脑泰方对去势脑缺血大鼠海马ATF4/CHOP/Puma通路的影响

目的:研究加味脑泰方对去卵巢脑缺血大鼠海马活化转录因子4 (ATF4)/C/EBP同源蛋白(CHOP)/p53上调凋亡调控因子(Puma)通路的影响。方法:将雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、加味脑泰方组和阳性对照组,除假手术组外,其它大鼠均行去卵巢术;术后11 d,阳性对照组和加味脑泰方组给予相应药物灌胃,连续灌胃3 d后行脑缺血术。术后24 h进行行为学评价,取海马组织行RT-qPCR检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA表达,Western blot检测各组大鼠海马组织中Bax、Bcl-2、caspase-3、ATF4、CHOP和Puma蛋白表达。结果:与假手术组比较,各组的海马神经功能评分明显增高;与模型组比较,加味脑泰方组与阳性对照组的神经功能评分明显降低(P <0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠海马Bax、caspase-3、ATF4、CHOP和Puma的蛋白表达及Bax和caspase-3的mRNA表达明显升高,而Bcl-2的mRNA和蛋白表达明显降低(P <0.05);与模型组比较,加味脑泰方明显降低Bax、caspase-3、ATF4、CHOP和Puma表达,提高Bcl-2表达(P <0.05)。结论:加味脑泰方可能通过抑制ATF4/CHOP/Puma通路相关mRNA及蛋白的表达而减轻脑缺血损伤。

基于SIRT1介导的凋亡相关信号通路探讨加味脑泰方对缺氧/复氧损伤海马神经元的保护作用

目的:基于沉默信息调节因子1(SIRT1)介导的凋亡相关信号通路探讨加味脑泰方含药血清对缺氧/复氧(H/R)损伤海马神经元细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。方法:原代分离、培养及鉴定SD大鼠胎鼠海马神经元,采用缺氧24h、复氧2h处理建立H/R细胞模型,将培养的海马神经元随机分为5组:正常对照组、空白血清对照组、模型组、奥拉西坦含药血清组和加味脑泰方含药血清组,待缺氧24h后,除正常对照组与模型组给予等量培养液外,其余各组分别给予相应体积分数10%的含药血清或空白血清,复氧后继续培养2h;采用MTT法检测细胞活力;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用免疫荧光与高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)检测SIRT1、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况;采用RT-PCR法检测SIRT1、Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达情况。结果:与正常对照组比较,模型组海马神经元细胞活力显著降低(P<0.01),细胞受损、神经网络及树突棘断裂或减少,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),且神经元内SIRT1、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05),Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);与模型组比较,阳性药奥拉西坦含药血清组和加味脑泰方含药血清组海马神经元细胞活力显著增加(P<0.05),神经网络、树突棘受损情况得到明显恢复,细胞凋亡显著减少(P<0.01),且神经元内SIRT1、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著上调(P<0.05),Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05)。结论:加味脑泰方对H/R受损海马神经元内SIRT1介导的凋亡相关Bcl-2、BAX、Caspase-3 mRNA及蛋白表达具有明显的调控作用,这可能是其抑制细胞凋亡继而保护H/R损伤海马神经元的重要机制之一。

雌激素抑制剂对去势脑缺血大鼠ATF4/CHOP/Puma通路的影响及加味脑泰方的干预作用

目的:探讨雌激素抑制剂作用下加味脑泰方对去势脑缺血大鼠海马ERα蛋白及ATF4/CHOP/Puma通路相关蛋白的影响。方法:将30只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、ICI组、溶剂组、ICI+雌激素组、ICI+加味脑泰方组,每组5只。除假手术组外,其余各组大鼠均制备去势模型(行双侧去卵巢术);行去卵巢术后第11天ICI+雌激素组、ICI+加味脑泰方组分别给予0.18mg/kg 17β-E2、24g/kg加味脑泰方灌胃,连续灌胃3d。在去卵巢术后第14天ICI组、ICI+雌激素组、ICI+加味脑泰方组大鼠制备脑缺血模型前10min侧脑室注射ICI182780,溶剂组给予等量的DMSO进行侧脑室注射。制备脑缺血模型后24h取海马,Western blotting检测ERα、ATF4、CHOP、Puma、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果:大鼠去双侧卵巢、造脑缺血模型后海马ATF4、CHOP、Puma、Bax、caspase-3蛋白的表达显著升高(P<0.01),ERα、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01);给予侧脑室注射ICI182780后ATF4、CHOP、caspase-3、Puma蛋白表达升高更显著(P<0.01,P<0.05),ERα蛋白表达下降更显著(P<0.01);而给予加味脑泰方干预后大鼠海马ATF4、CHOP、Puma、caspase-3蛋白表达显著下降(P<0.01),ERα、Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.01)。ERα蛋白表达与Bcl-2蛋白表达呈正相关(P<0.05),ERα蛋白表达与ATF4、CHOP、Puma、Bax、caspase-3蛋白表达呈负相关(P<0.01)。结论:加味脑泰方可能通过提高ERα表达而调节ATF4/CHOP/Puma通路相关蛋白的表达而抗脑缺血损伤。