基于网络药理学和动物实验探讨加味升降散治疗糖尿病肾脏病的分子机制

目的:通过网络药理学研究预测加味升降散治疗糖尿病肾脏病(DKD)的潜在作用机制,并通过db/db小鼠动物模型验证药物疗效及机制,拓展经典方剂的临床运用。方法:首先通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)收集加味升降散药物的主要化学成分和潜在的作用靶点,然后通过Drug Bank数据库、GenCards数据库、OMIM数据库收集DKD的疾病靶点;利用Draw Venn的Diagram平台获取药物与疾病的交集靶点,再使用String平台建立PPI网络系统,获取药物与疾病的核心作用靶点。通过Metascape解析“中药-成分-靶点”及参与的主要生物学过程及相关通路,然后通过Cytoscape 3.7.2软件系统建立“加味升降散成分-糖尿病肾脏病靶点-通路”的网络系统。将30只8周龄db/db小鼠按照体质量分层法随机分为模型组,培哚普利组和加味升降散低、中、高剂量组,每组6只。另取6只8周龄db/m小鼠,为空白对照组。空白对照组和模型组以7.00 g/(kg·d)纯水灌胃,加味升降散低、中、高剂量组分别予低[3.50 g/(kg·d)]、中[7.00 g/(kg·d)]、高[14.00 g/(kg·d)]剂量加味升降散灌胃,培哚普利组予培哚普利[0.48 mg/(kg·d)]灌胃,连续治疗12周。实验结束后,采用全自动生化分析仪检测小鼠血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠24 h尿白蛋白、NGAL、TNF-α、IL-1β、VCAM-1、MCP-1、HbA1c;采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测小鼠p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-NF-κB p65、NF-κB p65蛋白表达水平。结果:通过分析,共获取加味升降散中85种主要药物活性成分、976个靶点,糖尿病肾脏病主要靶点872个,取得药物及疾病的交集靶点226个,其中药物核心活性成分为槲皮素、木犀草素、β-谷固醇、山柰酚、毛茛黄素、棕榈油酸等,核心靶点有PIK3CA、PIK3R1、AKT1、AKT2、MAPK14、IL1β、TNF、IL6等,参与的主要通路为AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用。动物实验结果表明,与空白对照组比较,模型组小鼠SCr、BUN明显升高,24 h尿白蛋白增加,血清NGAL、TNF-α、IL-1β、VCAM-1、MCP-1、HbA1c水平升高,p-PI3K、p-PI3K/PI3K、p-Akt、p-Akt/Akt降低,p-NF-κB p65、p-NF-κB p65/NF-κB p65升高。与模型组比较,加味升降散可使db/db小鼠SCr、BUN下降,24 h尿微量白蛋白减少,NGAL、HbA1c水平降低,TNF-α、IL-1β、VCAM-1、MCP-1等炎症因子的表达含量降低,并能上调p-PI3K、p-Akt的表达水平(P<0.05),抑制p-NF-κB p65蛋白的活化(P<0.05)。结论:加味升降散可通过多靶点、多通路治疗糖尿病肾脏病,其机制可能为调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路。

肺肠合治法对哮喘小鼠血清总IgE影响的实验研究

目的:采用肺肠合治法原理,运用加味升降散方药,探讨该方法治疗哮喘的免疫学作用机理。方法:将小鼠随机分为空白组、模型组、肺肠合治组、治肺组、治肠组和阳性对照组共6组,除空白组外均用鸡卵清蛋白致敏并激发哮喘,采用酶连免疫法检测各组血清总IgE。结果:腹腔注射鸡卵清蛋白可使小鼠血清总IgE水平增高,药物干预可使IgE水平降低;模型组与空白组比较血清总IgE水平明显升高(P(0.01);阳性对照组、肺肠合治组、治肺组、治肠组血清总IgE含量依次升高,与模型组比较均有显著差异(P(0.01)。结论:本方法对哮喘小鼠有治疗作用,其平喘作用与降低哮喘模型小鼠异常升高的血清总IgE水平,参与机体的免疫调节有关。

加味升降散治疗阴虚热毒伏络型过敏性紫癜性肾炎疗效观察

目的观察加味升降散治疗过敏性紫癜性肾炎的临床疗效。方法将符合纳入标准的患者60例,随机分为治疗组和对照组,每组30例。在一般治疗的基础上,对照组用黄葵胶囊,治疗组用加味升降散治疗。观察两组患者治疗后中医证候积分、实验室指标[尿红细胞(RBC)计数、24小时尿蛋白定量(24 h Pro)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及血免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)]的变化情况。结果两组患者治疗后,治疗组与对照组总有效率分别为86.67%和56.67%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组疗效优于对照组。治疗组在控制中医证候积分,改善尿RBC计数、24 h Pro、hs-CRP方面明显优于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论加味升降散治疗过敏性紫癜性肾炎疗效显著,值得临床推广。

基于网络药理学探讨加味升降散治疗膜性肾病的作用机制

目的:基于网络药理学探讨加味升降散治疗膜性肾病(MN)的作用机制,为后续实验研究开拓思路,为临床应用提供科学依据。方法:基于网络药理学预测得到加味升降散治疗MN的可能作用靶点和通路,采用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)建立MN大鼠模型,给予加味升降散27.3 g/kg和盐酸贝那普利1 mg/kg干预4 w。给药结束后处死大鼠,免疫组化法检测大鼠肾组织中PI3K、AKT、MAPK1和IKBKG蛋白表达水平。结果:最终获得加味升降散活性成分75种,核心靶点114个。加味升降散可影响细胞周期、DNA生物合成、DNA代谢过程的调控、细胞对氧化应激的反应、蛋白质修饰等多个生物过程,影响PI3K/AKT信号通路、癌症及癌症相关MicroRNA信号通路、内分泌抵抗等多个信号通路。动物模型验证结果:加味升降散27.3 g/kg能够显著降低MN大鼠肾组织中PI3K、AKT、MAPK1和IKBKG蛋白表达水平。结论:加味升降散可通过参与物质代谢和氧化应激等生物过程,调控PI3K/AKT信号通路,改善MN肾损伤。