血清药理法研究补肾化瘀解毒方对肺癌耐药细胞内药物浓度的作用

为了探讨补肾化瘀解毒方对肺癌耐药细胞内Rh123浓度的作用,选择人肺腺癌A549/DDP耐药细胞株为模型,采用荷瘤动物血清药理及流式细胞法,并与正常动物药物血清为对照,结果补肾化瘀解毒方荷瘤动物药物血清能显著提高肺癌A549/DDP耐药细胞内Rh123浓度(P<0.05),与正常动物药物血清无显著性差异(P>0.05),表明补肾化瘀解毒方药物血清能提高肺癌耐药细胞内药物浓度作用。

解毒化瘀方对内毒素血症大鼠肝细胞线粒体能量代谢的影响

目的:观察解毒化瘀方对内毒素血症(endotoxemia,ETM)大鼠肝细胞线粒体能量代谢的影响。方法:将56只大鼠随机分为正常对照组及脂多糖(LPS)注射后6、12、24小时组和解毒化瘀方6、12、24小时组。取肝组织分离线粒体,测定其Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。同时行高压液相色谱检测线粒体内腺苷酸含量及能荷(EC)水平。结果:在注射LPS 6小时后,线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性降低,ATP、ADP含量及EC值减少;24小时后,线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明显降低,ATP、ADP、AMP含量及EC值明显减少。与对应的LPS组比较,经解毒化瘀方处理后,肝细胞线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性增加,ATP、ADP、AMP含量及EC值均升高。结论:解毒化瘀方能增加ETM大鼠肝线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,提高线粒体氧化磷酸化水平,增加线粒体腺苷酸EC值,改善能量代谢,具有保护肝细胞的作用。

养阴化瘀解毒方对结肠炎相关性结肠癌前病变ACF及NF-κB表达的影响

观察养阴化瘀解毒方对结肠炎相关性结肠癌前病变变异腺窝区(ACF)及核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法将小鼠随机分为空白对照组、模型组、预防组、治疗组,以ip氧化偶氮甲烷(AOM)及饮水中添加葡聚糖硫酸钠(DSS)复制结肠炎相关性结肠癌前病变动物模型,观察养阴化瘀解毒方18.72 g.kg-1预防(与造模同时开始ig 7周)和治疗(造模开始7周后ig,连续7周)对结肠炎相关性结肠癌前病变ACF及NF-κB表达的影响。结果预防组及治疗组ACF数量明显减少,与模型组比较,有极显著性差异(P<0.01);模型组、预防组、治疗组NF-κB蛋白表达与正常组相比,均具有极显著性差异(P<0.01),预防组、治疗组NF-κB蛋白表达与模型组比较,具有极显著性差异(P<0.01)。结论养阴化瘀解毒方用于预防和治疗实验小鼠结肠炎相关性结肠癌前病变,可逆转小鼠结肠ACF和上皮内瘤变,其机制可能与抑制结肠NF-κB蛋白表达、促进细胞凋亡有关。

解毒化瘀方对内毒素血症大鼠肝线粒体COX的影响

目的:观察解毒化瘀方对内毒素血症(endotoxemia,ETM)大鼠肝细胞线粒体COX的影响。方法:将56只大鼠随机分为正常对照组及内毒素(脂多糖LPS注射后)6小时、12小时、24小时组和解毒化瘀方6小时、12小时、24小时组。取肝组织分离线粒体,采用紫外分光光度计检测COX活性,采用RT-PCR法检测COXⅠ、COXⅡ、COXⅢ的表达变化。结果:内毒素造模后6小时、12小时、24小时,肝线粒体内COX活性明显下降,与正常组相比有统计学意义(P<0.01),24小时降为最低。解毒化瘀方组与内毒素组相同时相点比较,解毒化瘀方12小时组、24小时组COX活性增加,两组比较差异有显著性意义(P<0.05)。内毒素组6小时、12小时、24小时,COXⅠmRNA、COXⅡmRNA表达逐步下降,与正常组相比有统计学意义(P<0.01),COXⅢmRNA表达与正常组比较无统计学意义(P>0.05)。解毒化瘀方24小时组COXⅠmRNA表达高于内毒素同时相组(P<0.05)。结论:解毒化瘀方能提高COX活性,上调线粒体编码基因COX表达水平,这可能是改善能量代谢、保护肝细胞的一个作用机制。

解毒化瘀方对凝血酶合并缺氧诱导PC12细胞损伤ERK1/2信号通路表达的影响

目的探讨急性缺血性中风(AIS)瘀毒病机的分子机制及解毒化瘀方对凝血酶合并缺氧损伤的保护作用。方法(1)用凝血酶合并缺氧损伤PC12细胞,模拟急性缺血性中风的体外细胞模型。(2)将细胞分为空白组,模型组,解毒化瘀方含药血浆组和PD98059组(MEK抑制剂组),应用荧光定量实时RT-PCR方法检测MEK1、PAR-1及ERK1/2的m RNA表达,应用免疫荧光法检测ERK1/2、P-ERK1/2的蛋白表达。结果 PCR结果提示:模型组MEK1、PAR-1及ERK1/2的m RNA表达与空白对照组相比显著升高(P<0.01),解毒化瘀方组和PD98059组MEK1、PAR-1及ERK1/2的m RNA表达较模型组显著降低(P<0.01),免疫荧光结果提示:解毒化瘀方组和PD98059组ERK1/2、P-ERK1/2的蛋白表达较模型组显著降低(P<0.01)。结论解毒化瘀方以凝血酶为作用的分子靶点,能够显著降低ERK1/2信号通路在缺血性中风体外细胞模型中的表达。

解毒化瘀方对内毒素血症大鼠肝细胞线粒体ATPase 6、ATPase 8基因表达的影响

目的:观察解毒化瘀方对内毒素血症大鼠肝细胞线粒体ATPase 6、ATPase 8基因表达的影响。方法:将大鼠分成正常对照、内毒素6、12、24小时和解毒化瘀方6、12、24小时组,检测肝线粒体Na+K+-ATP、Ca+Mg+-ATP酶活性和ATPase 6、ATPase 8 mRNA的表达。结果:内毒素各组Na+K+-ATP、Ca+Mg+-ATP酶活性和ATPase 6、ATPase 8 mRNA表达与正常组比明显下降;与对应的内毒素组比,解毒化瘀方12、24小时组Na+K+-ATP、Ca+Mg+-ATP酶活性显著增加,24小时组ATPase 6、ATPase 8表达显著提高。结论:内毒素能造成大鼠肝线粒体ATPase 6、ATPase 8基因表达下降,解毒化瘀方能干预内毒素血症大鼠ATPase 6、ATPase 8基因表达下调,具有保护肝细胞的作用。

解毒化瘀健脾方对胃黏膜异型增生Thbs1基因甲基化的作用

目的:观察解毒化瘀健脾方对胃黏膜异型增生模型大鼠血小板反应蛋白1基因(thrombospondin 1,Thbs1)甲基化状态的影响,并探讨解毒化瘀健脾方治疗胃黏膜异型增生的可能机制.方法:将实验性胃黏膜异型增生病变模型大鼠分为:模型对照组(model control group,M G)、阳性对照组(positive control group,PCG)-西药维甲酸治疗组、解毒化瘀健脾方治疗组(Jiedu Huayu Jianpi Fang treatment group,A),并以健康大鼠为对照组(control group,CG),进行相应的药物干预;取胃黏膜组织,应用甲基化特异PCR技术检测Thbs1基因甲基化状态;HE染色观察各处理组胃黏膜组织结构变化差异.结果:CG组10只健康大鼠胃黏膜经检测Thbs1基因均未发生甲基化,胃黏膜异型增生MG组大鼠T h b s1基因的甲基化阳性检出率为33.33%(6/18);PCG组-西药维甲酸组同正常大鼠相同,Thbs1基因甲基化检出率为0.00%;A组治疗大鼠Thbs1基因甲基化比率(20.00%),相比MG组显著降低(P=0.0198).HE染色结果显示MG、PCG、A组呈现中轻度胃黏膜异型增生症状,经治疗后PCG、A组异型增生趋于正常.结论:解毒化瘀健脾方对发生异型增生的胃黏膜组织Thbs1基因具有显著地去甲基化作用.解毒化瘀健脾方治疗胃黏膜异型增生可能与该药物使Thbs1基因甲基化程度显著降低有关.

人工肝联合凉血解毒化瘀方治疗重型乙肝疗效观察

目的评价人工肝支持系统联合中药凉血解毒化瘀方治疗慢性乙型重型肝炎的疗效。方法根据患者病情采用本院开展的不同模式人工肝支持系统(血浆置换联合血浆灌流、胆红素吸附联合血浆置换、双重血浆吸附联合血浆置换、分子吸附再循环)联合凉血解毒化瘀方治疗46例慢性乙型重型肝炎,30例对照组仅给予基础疗法加人工肝支持系统治疗。结果两组患者治疗后临床症状、肝功能、凝血酶原活动度、血氨明显改善,治疗组优于对照组(P<0.05)。治疗组46例患者中临床治愈9例,显效25例,有效6例,无效3例,死亡3例,总有效率86.96%,优于对照组,随访半年存活率与对照组有统计学意义(P<0.05)。结论人工肝支持系统是治疗慢性乙型重型肝炎的有效手段,联合凉血解毒化瘀方中西医结合疗法可提高临床疗效,降低患者病死率。

解毒化瘀药调控白血病HL60/adr细胞NF-κB-survivin通路研究

目的探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/adr细胞NF-κB-survivin信号基因表达的影响,逆转耐药的机制。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化瘀药含药血清处理后HL60/adr细胞survivin的表达;Western blot法检测NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达。结果解毒化瘀药含药血清能够降低HL60/adr耐药细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα信号,降低survivin基因的表达。结论解毒化瘀药能够降低HL60/adr细胞NF-κB信号通路,影响NF-κB-survivin途径,逆转耐药。

化瘀截毒方对鼠结肠腺癌Lovo细胞肝转移影响的实验研究

为探讨化瘀截毒方对BALB／C裸鼠结肠腺癌Lovo细胞肝转移的影响，随机将50只雌性BALB／C裸鼠分为肿瘤组、中药组、化疗组、假手术组、空白组各10只。应用脾被膜下注射结肠腺癌Lovo细胞悬液的方法造裸鼠肝转移模型。观察指标包括一般状况、舌质颜色、耳廓微循环、大体标本、血液流变学等。结果显示，中药组对照化疗组、肿瘤组舌质颜色积分上升幅度明显较缓，至造模后24d，中药组与肿瘤组差异有统计学意义（P〈0．05）；造模24d后检测耳廓微循环，中药组血流速度高于肿瘤组和化疗组（P〈0．05），中药组血流量积分高于肿瘤组（P〈0．05）；造模24d后中药组红细胞压积低于肿瘤组（P〈0．05），中药组全血黏度10S^-1低于肿瘤组、化疗组（P〈0．05），中药组全血黏度200S^-1低于肿瘤组（P〈0．05）；中药组肝脏表面转移结节数目明显低于肿瘤组。结果表明，化瘀截毒方具有抗结肠腺癌Lovo细胞肝转移的作用，能显著改善大肠癌转移模型裸鼠的耳廓微循环并具有降低血液黏滞度的作用。