解毒通络方对大鼠心肌纤维化的影响及作用机制

目的:基于氧化应激和NF-κB探讨解毒通络方对异丙肾上腺素(ISO)所诱导大鼠心肌纤维化的影响及作用机制。方法:将雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、卡托普利(5 mg/kg)阳性对照组及解毒通络方低(1.8 g/kg)、中(3.6 g/kg)、高(7.2 g/kg)剂量组。除正常对照组外,其余各组大鼠均采用皮下注射ISO(5 mg/kg)连续7 d的方法建立大鼠心肌纤维化模型,造模成功后第2天开始灌胃,连续28 d。HE、Masson染色观察大鼠心肌组织病理改变和胶原纤维沉积;DHE染色观察各组大鼠心肌组织ROS表达;碱水法检测大鼠心肌组织中HYP水平;ELISA法检测大鼠血清LDH、CK-MB水平;试剂盒检测大鼠血清和心肌组织中氧化应激指标;qPCR和Western Blot检测大鼠心肌组织NF-κBP65、TGF-β_1、CTGF mRNA及蛋白和Smad2/3、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达。结果:与模型组比较,各给药组大鼠心肌结构紊乱和胶原纤维沉积明显改善,心肌组织中ROS及心脏指数和心肌损伤标志物LDH、CK-MB水平显著降低,血清及心肌组织SOD、GSH水平显著升高,MDA水平显著降低,心肌组织NF-κBP65、TGF-β_1、CTGF mRNA及蛋白和Smad 2/3、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达显著降低。结论:解毒通络方能有效缓解ISO诱导的心肌纤维化大鼠心肌结构紊乱和间质胶原纤维化沉积,其作用机制可能与抗氧化应激和抑制NF-κB信号通路有关。

化浊解毒活血通络方联合通督调神针刺法治疗急性脑梗死疗效及NLRP3信号通路研究

目的观察化浊解毒活血通络方联合通督调神针刺法治疗急性脑梗死(ACI)的疗效,以及对患者神经功能和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体信号通路的影响。方法80例ACI患者采用随机数字表法分为两组,对照组采用化浊解毒活血通络方治疗,观察组采用化浊解毒活血通络方联合通督调神针刺治疗。观察两组疗效、神经功能、残疾程度、NLRP3炎性小体信号通路相关分子mRNA表达、炎症因子和氧化应激的差异。结果观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.05)。两组治疗后中医证候积分、美国国立卫生院脑卒中量表(NIHSS)、改良RANKIN量表(mRS)评分,外周血单核细胞NLRP3 mRNA、凋亡相关点样蛋白(ASC)mRNA、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)mRNA表达,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)水平较治疗前降低(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)水平较治疗前增高(P<0.05)。观察组治疗后中医证候积分、NIHSS、mRS评分,外周血单核细胞NLRP3 m RNA、ASC mRNA、Caspase-1 mRNA表达,血清TNF-α、IL-6、MDA水平低于对照组(P<0.05),SOD水平高于对照组(P<0.05)。结论化浊解毒活血通络方联合通督调神针刺法可更有效抑制NLRP3炎性小体信号通路,缓解炎症反应和氧化应激,改善神经功能,减轻残疾程度,提高临床疗效。

基于“毒损”理论探讨“态靶结合”治疗糖尿病大血管病变

糖尿病大血管病变作为糖尿病的重要并发症之一,其病理机制复杂,为糖尿病并发症防治过程中的难点和重点。中医认识本病从“毒损”理论角度切入,正虚邪盛,痰、瘀、湿、浊蕴结不解而成毒,损伤脉管,致使结构和组织功能失常。朴春丽教授根据“态靶结合”辨证组方思想,以正虚毒损为态,痰瘀湿浊、糖脂之毒、动脉粥样硬化为靶,补虚、解毒、通络,开创解毒通络开痹方,态靶同调,取得良好临床疗效。

解毒通络方对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的:探讨解毒通络方对脑缺血再灌注损伤的防治作用。方法:制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、模型组、尼莫地平阳性药组、解毒通络方高、中、低剂量组,观察各组大鼠神经功能损伤症状、脑梗死面积、脑组织各指标的变化。结果:解毒通络方高、中剂量组能显著降低神经功能缺失症状评分,各剂量组均能显著减少脑梗死面积,解毒通络方可提高模型大鼠脑组织中SOD含量,降低MDA含量,可明显降低NO、IL-1β、IL-6、i NOS、NF-κB的水平。结论:解毒通络方通过缓解大鼠神经功能损伤症状,减少脑梗死面积对脑缺血再灌注损伤大鼠起到保护作用。

中医综合疗法治疗气阴两虚血瘀型糖尿病周围神经病变的临床疗效

目的研究中医综合疗法治疗气阴两虚血瘀型糖尿病周围神经病变(DPN)的临床疗效及作用机制。方法将110例气阴两虚血瘀型DPN患者随机分为对照组和治疗组,每组55例。对照组和治疗组分别给予口服甲钴胺片和益气养阴活血解毒方联合通络外洗方浴足治疗。对比两组治疗后临床疗效,多伦多临床评分系统(TCSS)评分,右下肢腓总神经和胫神经的运动神经传导速度(MNCV)、感觉神经传导速度(SNCV)及神经营养因子[血清胰岛素样生长因子(IGF-1)和脑源性营养因子(BNDF)]改善情况。结果治疗组和对照组总有效率分别为94.0%和74.0%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组各神经传导速度较对照组显著加快,TCSS评分较对照组明显降低(P<0.05),差异有统计学意义。治疗组IGF-1、BNDF均较对照组有大幅度的增加(P<0.05),差异有统计学意义。结论中医综合疗法可明显改善DPN患者的临床症状,加快神经传导速度,疗效优于单纯口服甲钴胺片,其作用机制可能与增加DPN患者的IGF-1和BNDF表达,从而修复受损神经有关。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤小鼠血清IL-6和TNF-α水平的影响

目的:观察化浊解毒活血通络方对小鼠脑缺血再灌注损伤的局部炎症反应的影响。方法:将50只昆明小鼠随机均分为模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、尼莫地平组、假手术组。采用双侧颈总动脉结扎法合并尾端放血制造脑缺血再灌注模型。手术造模成功分别给予高、低剂量组化浊解毒活血通络方中药灌服。在治疗后用放免法检测各组小鼠血清中IL-6、TNF-α的表达水平。结果:化浊解毒活血通络方高剂量组小鼠中IL-6和TNF-α的表达水平明显低于模型组,与假手术组及尼莫地平组比较无统计学意义。结论:化浊解毒活血通络方可以抑制小鼠脑缺血再灌注损伤时炎症细胞因子的表达,减少白细胞的浸润,降低脑缺血再灌注损伤的程度。

解毒通络生津方对阴虚型干燥综合征患者外周血PD-1及其配体表达影响的临床研究

目的观察解毒通络生津方联合西药治疗阴虚型干燥综合征的临床疗效及其对外周血单核细胞程序性死亡分子-1(PD-1)和配体表达的影响。方法将60例阴虚型干燥综合征患者随机分为治疗组与对照组,每组30例。对照组予醋酸泼尼松加羟基氯喹治疗,治疗组在对照组治疗措施基础上,加用解毒通络生津方。两组疗程均为3个月,观察中医证候积分、疾病损害评分、疾病活动度评分、生活质量评分及外周血单核细胞PD-1、PD-L1、PD-L2、CD20的表达情况。结果 1治疗前后组内比较,两组中医证候积分差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗前后中医证候积分的差值大于对照组(P<0.05)。2治疗前后组内比较,两组SSDDI评分差异均有统计学意义(P<0.05);组间治疗后比较,SSDDI评分的差值差异无统计学意义(P>0.05)。3治疗前后组内比较,两组ESSDAI评分差异均有统计学意义(P<0.05);组间治疗后比较,ESSDAI评分差异无统计学意义(P>0.05)。4治疗前后组内比较,两组生活质量评分总分(PCS)差异均有统计学意义(P<0.05);组间治疗前后,PCS评分差值差异无统计学意义(P>0.05)。5治疗前后组内比较,对照组PD-1、PD-L1、PD-L2、CD20的差异无统计学意义(P>0.05),而治疗组有统计学意义(P<0.05);组间PD-1、PD-L1、PD-L2、CD20治疗前后差值差异有统计学意义,治疗组优于对照组(P<0.05)。结论解毒通络生津方联合西药治疗阴虚型干燥综合征,可显著改善患者的临床症状,可能与提高外周血单核细胞PD-1及其配体表达有关。

基于JNK传导通路探析解毒通络调肝方调控内质网应激治疗2型糖尿病的实验研究

观察解毒通络调肝方对肝脏JNK传导途径的影响。方法选用50只ZDF大鼠,饲养12周后48只成模,随机分组为模型组12只、二甲双胍组9只、解毒通络调肝方高、中、低剂量组各9只,ZL大鼠10只为空白对照组。模型组与空白组以蒸馏水,给药组给予相应药物,灌胃12周。定期对大鼠进行糖耐量实验,24周末切除肝脏,用于Western blot检测。结果与模型组比较,解毒通络调肝方高、中、低计量组和二甲双胍组各时点OGTT水平差异均有统计学意义(P<0.01);解毒通络调肝方高剂量与低剂量组比较,各时点差异均有统计学意义(P<0.05)。解毒通络调肝方高、中、低剂量组和二甲双胍组稳态葡萄糖输注率均较模型组提高,差异有统计学意义(P<0.01)。解毒通络调肝方高、中、低剂量组和二甲双胍组JNK及p-JNK表达量均较模型组下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论解毒通络调肝方改善治疗糖尿病可能的机制之一是抑制了JNK信号通路,降低了JNK磷酸化水平;糖毒性和胰岛素抵抗可能通过炎症激活JNK信号通路,增强JNK活性导致肝细胞损害。

解毒通络调肝方对INS-1细胞糖毒性的保护作用研究

目的研究解毒通络调肝方对大鼠胰岛细胞瘤细胞(islet cell tumor cells,INS-1)糖毒性的保护作用机制。方法以大鼠胰岛细胞瘤细胞为研究对象,用MTT比色法检测解毒通络调肝方干预后INS-1细胞存活率的情况;不同浓度的解毒通络调肝方干预高糖诱导的INS-1细胞;通过葡萄糖刺激胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion test,GSIS)检验胰岛素分泌量;实时逆转录聚合酶链反应法测定INS1、INS2、胰十二指肠同源盒因子1(pancreatic and duodenal homeobox 1,PDX1)和MafA的mRNA表达水平;蛋白印迹实验检测INS-1细胞中内质网的跨膜蛋白[阻抗性激酶lα(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)、双链RNA依赖性蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)和活化的转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)]的表达。结果通过从TCMSP数据库中总结分析解毒通络调肝方中潜在成分,表明该方具有较好的稳定性和重复性;不同浓度的解毒通络调肝方对INS-1细胞活力无抑制作用(P>0.05),但能够抑制高糖诱导的胰岛素分泌的降低(P<0.05),提高INS1、INS2、PDX1和MafA的mRNA表达(P<0.05),抑制IRE1α、PERK、ATF6蛋白表达(P<0.05)。结论解毒通络调肝方能够通过提高胰岛素合成相关基因的表达,促进INS-1细胞的胰岛素分泌,降低内质网应激,以恢复细胞内稳态平衡,减少糖毒性对β细胞损伤。

化浊解毒活血通络方通过调控核因子E2相关因子2/Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1通路发挥对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织抗氧化作用的机制研究

目的 观察化浊解毒活血通络方通过调控核因子E2相关因子2(Nrf2)/Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)通路对脑缺血再灌注损伤大鼠的抗氧化作用,探讨其可能的神经保护机制。方法 将80只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组及化浊解毒活血通络方高、低剂量组,每组16只。除假手术组外,其余组采用Longa法制备大脑中动脉闭塞模型大鼠。造模成功后,化浊解毒活血通络方高、低剂量组给分别予化浊解毒活血通络方25、6.25 g/(kg·d)灌胃,尼莫地平组予尼莫地平混悬液9.375 mg/(kg·d)灌胃,模型组及假手术组均予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃。灌胃3 d后比较各组大鼠改良神经功能缺损评分(mNSS),评分后处死取脑,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色比较各组大鼠脑梗死体积;制作苏木精-伊红(HE)染色切片观察脑组织病理变化;干湿法测量脑组织含水量;检测脑组织丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;蛋白免疫印迹法检测脑组织Nrf2、Keap1蛋白表达量;逆转录聚合酶链式反应检测脑组织Nrf2、Keap1基因表达。结果 与假手术组比较,模型组、尼莫地平组及化浊解毒活血通络方高、低剂量组mNSS均升高(P<0.05);与模型组比较,尼莫地平组及化浊解毒活血通络方高、低剂量组mNSS均降低(P<0.05);与尼莫地平组比较,化浊解毒活血通络方高、低剂量组mNSS均升高(P<0.05);与化浊解毒活血通络方高剂量组比较,化浊解毒活血通络方低剂量组mNSS升高(P<0.05)。假手术未见明显脑梗死灶,其余组脑组织均见白色梗死灶。与假手术组比较,模型组、尼莫地平组及化浊解毒活血通络方高、低剂量组脑梗死体积均升高(P<0.05);与模型组比较,尼莫地平组及化浊解毒活血通络方高、低剂量组脑梗死体积均降低(P<0.05);与尼莫地平组比较,化浊解毒活血通络方高、低剂量组脑梗死体积均升高(P<0.05);与化浊解毒活血通络方高剂量组比较,化浊解毒活血通络方低剂量组脑梗死体积升高(P<0.05)。光镜下可见假手术组大鼠脑组织神经元细胞密集,排列整齐,胞浆丰富,染色均匀,胞核居中,核仁清楚,未见明显异常;模型组缺血区脑组织神经元细胞排列紊乱,水肿明显,胞浆染色变淡,出现核固缩、碎裂、溶解现象。与模型组比较,尼莫地平组及化浊解毒活血通络方高、低剂量组缺血坏死区有所减少,细胞排列紊乱、水肿、胞浆淡染色变淡、细胞核固缩、碎裂、溶解现象均有减轻。尼莫地平组、化浊解毒活血通络方高剂量组缺血坏死区减少更为明显。与假手术组比较,模型组、尼莫地平组及化浊解毒活血通络方高、低剂量组脑组织含水量均升高(P<0.05);与模型组比较,尼莫地平组及化浊解毒活血通络方高、低剂量组脑组织含水量均降低(P<0.05);与尼莫地平组比较,化浊解毒活血通络方低剂量组脑组织含水量均升高(P<0.05);与化浊解毒活血通络方高剂量组比较,化浊解毒活血通络方低剂量组脑组织含水量升高(P<0.05)。尼莫地平组与化浊解毒活血通络方高剂量组脑组织含水量比较差异无统计学意义(P>0.05)。与假手术组比较,模型组、尼莫地平组及化浊解毒活血通络方高、低剂量组脑组织MDA含量均升高(P<0.05),SOD、CAT活性均降低(P<0.05);与模型组比较,尼莫地平组及化浊解毒活血通络方高、低剂量组脑组织MDA含量均降低(P<0.05),SOD、CAT活性均增高(P<0.05);与尼莫地平组比较,化浊解毒活血通络方低剂量组脑组织MDA含量升高(P<0.05),SOD、CAT活性降低(P<0.05);与化浊解毒活血通络方高剂量组比较,化浊解毒活血通络方低剂量组脑组织MDA含量升高(P<0.05),SOD、CAT活性降低(P<0.05)。尼莫地平组与化浊解毒活血通络方高剂量组脑组织MDA含量及SOD、CAT活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。与假手术组比较,模型组、尼莫地平组及化浊解毒活血通络方高、低剂量组脑组织Nrf2蛋白表达水平及mRNA表达水平均降低(P<0.05),Keap1蛋白表达水平及mRNA表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,尼莫地平组及化浊解毒活血通络方高、低剂量组脑组织Nrf2蛋白表达水平及mRNA表达水平均升高(P<0.05),Keap1蛋白表达水平及mRNA表达水平均降低(P<0.05);与尼莫地平组比较,化浊解毒活血通络方低剂量组脑组织Nrf2蛋白表达水平及mRNA表达水平均降低(P<0.05),Keap1蛋白表达水平及mRNA表达水平均升高(P<0.05);与化浊解毒活血通络方高剂量组比较,化浊解毒活血通络方低剂量组脑组织Nrf2蛋白表达水平及mRNA表达水平均降低(P<0.05),Keap1蛋白表达水平及mRNA表达水平均升高(P<0.05)。尼莫地平组与化浊解毒活血通络方高剂量组脑组织Nrf2、Keap1的蛋白表达水平及mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 化浊解毒活血通络方具有减轻脑缺血再灌注损伤的作用,其作用机制可能与其通过调控Nrf2/Keap1通路减轻氧化应激反应对机体的损伤作用有关。

补肾解毒通络方阻止白血病复发机制的网络药理学分析

目的:探讨补肾解毒通络方(BSJDTLF)的作用机制。方法:使用网络药理与蛋白组学相结合的研究方法,对其靶点与作用通路进行了分析、预测。将补肾解毒通络方进行液相色谱质谱分析,对质谱结果中的化合物通过TCMSP与CTD数据库进行分析,得到对应化合物的作用靶点,再通过NCBI和GENE CARD数据库筛选与白血病相关的作用靶点基因。分选给药小鼠的间充质干细胞进行高通量蛋白组学分析筛选出差异蛋白。将差异蛋白与靶点基因进行比对,经GO、KEGG和K核分析得到BSJDTLF作用机制通路。结果:共筛选到潜在靶点50个,关键靶点10个,包括Mmp2、Stmn1、Icam1等。主要涉及慢性白血病、急性白血病、VEGF信号等通路。结论:预测了补肾解毒通络方作用于间充质干细胞的具体机制。

益气解毒通络方治疗乙肝肝硬化有效性及其控制癌变的研究

目的探讨分析益气解毒通络方治疗乙肝肝硬化有效性及其控制癌变的研究。方法选取我院2018年1月至2019年1月收治的乙肝肝硬化患者50例进行研究,随机分为两组,其中研究组行益气解毒通络方治疗,对比组行常规西药治疗,统计记录两组患者接受治疗后癌变发生率以及肝功能指标,并进行对比。结果两组患者经过不同治疗后,研究组患者癌变发生率低于对比组患者,其肝功能指标优于对比组患者(P<0.05),差异有统计学意义。结论益气解毒通络方应用在乙肝肝硬化临床治疗中,肝功能得以恢复,同时降低了肝区癌变的概率,疗效显著,值得临床推广。

解毒通络化湿方治疗湿热型原发性干燥综合征的随机双盲对照研究

目的:评估解毒通络化湿方结合羟基氯喹片治疗无内脏累及的湿热型原发性干燥综合征(pSS)患者的临床疗效,寻求治疗pSS的新方法。方法:采用随机双盲对照研究方法,纳入86例无内脏累及的湿热型pSS患者,分为治疗组43例和对照组43例。治疗组患者给予解毒通络化湿方联合羟基氯喹片口服,对照组患者给予安慰剂联合羟基氯喹片口服,治疗周期为12周。评价两组患者的临床疗效,并采用患者可接受症状状态(PASS)和临床最小重要改善(MCII)达标率来进一步判定临床疗效;治疗前后评估并比较两组患者的中医证候总积分、欧洲抗风湿联盟干燥综合征患者报告指数(ESSPRI)评分、欧洲抗风湿联盟干燥综合征疾病活动指数(ESSDAI)评分;采用未刺激状态下唾液流率评价患者的口干情况,采用Schirmer’s试验、BUT试验评价患者的眼干情况;治疗前后检测并比较两组患者的血清免疫球蛋白(Ig)G、补体C3、补体C4水平及外周血CXC型趋化因子配体13(CXCL13)表达情况。结果:研究过程中,治疗组2例患者剔除或脱落,对照组3例患者剔除或脱落,最终纳入统计分析者治疗组41例、对照组40例。①治疗后,治疗组患者的临床总有效率为82.93%,对照组为60.00%,治疗组的疗效明显优于对照组(P<0.01)。②治疗后,两组达到PASS患者的比例较治疗前均明显升高(P<0.05,P<0.01),但组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,根据ESSPRI,治疗组中达到MCII的患者比例较对照组明显升高(P<0.05)。③治疗后,两组患者的中医证候总积分较治疗前均明显降低(P<0.05,P<0.01),且治疗组患者的积分降低程度优于对照组(P<0.05)。④治疗后,治疗组患者的ESSPRI评分及干燥、疲乏、疼痛维度评分较治疗前均明显降低(P<0.05,P<0.01),对照组患者的ESSPRI评分及疼痛维度评分较治疗前亦明显降低(P<0.05),且治疗组患者的ESSPRI评分及干燥、疲乏维度评分降低程度优于对照组(P<0.05)。⑤治疗后,两组患者的ESSDAI评分较治疗前均明显降低(P<0.05,P<0.01),但其评分降低程度组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。⑥治疗后,两组患者的未刺激状态下唾液流率较治疗前均升高(P<0.05,P<0.01),但其升高程度组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。⑦治疗后,治疗组患者的IgG、CXCL13水平较治疗前明显降低(P<0.01),且治疗组患者的CXCL13水平降低程度优于对照组(P<0.05)。结论:解毒通络化湿方结合羟基氯喹片治疗pSS,可有效改善患者的主观症状及客观指标,其作用可能与抑制CXCL13改善腺体功能、减少pSS的病情活动相关。

化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体自噬相关蛋白PINK1和Parkin的影响

目的:研究化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及对线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导激酶1(PINK1)、Parkin的影响。方法:将48只雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组(化浊解毒活血通络方)、抑制剂组[3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制剂],每组12只。按照Longa法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,造模成功给药3 d后,行大鼠神经功能缺损评分,HE染色观察脑组织病理改变,TTC染色观察脑梗死体积,Western Blot检测脑组织PINK1、Parkin蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测脑组织中PINK1、Parkin mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分和脑梗死体积显著增加(P<0.05),病理损伤加重,PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,中药组大鼠神经功能缺损评分和脑梗死体积显著减少(P<0.05),病理损伤减轻,PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型组及中药组比较,抑制剂组大鼠神经功能缺损评分和脑梗死体积显著增加(P<0.05),病理损伤加重,PINK1、Parkin蛋白及mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠具有脑保护作用,其机制可能与上调线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin的表达相关。

基于IRE1α/JNK通路探析解毒通络调肝方对2型糖尿病调控机制

目的:基于内质网应激IRE1α/JNK传导通路研究解毒通络调肝方对ZDF大鼠2型糖尿病模型胰岛素抵抗及胰岛细胞凋亡的影响。方法:将10只SPF级非糖尿病Zucker Lean(ZL)鼠设为正常组,将88只成模SPF级Zucker Diabetes Fat(ZDF)大鼠随机分为模型组,盐酸二甲双胍组(0.65g·kg-1·d-1)和解毒通络调肝方剂量组(高剂量18g·kg-1·d-1,中剂量9g·kg-1·d-1,低剂量4.5g·kg-1·d-1);4周干预后取胰腺,采用Western Blot检测各组P-IRE1α/IRE1α、P-JNK/JNK蛋白的表达;RT-PCR观察IRS-1、PI3K、Bax、Bcl-2 mRNA表达。结果:解毒通络调肝方显著降低胰腺组织中P-IRE1α/IRE1α及P-JNK/JNK的蛋白表达(P<0.01);显著增强IRS-1、PI3K mRNA表达(P<0.01)。此外解毒通络调肝方可使Bax mRNA和Bcl-2 mRNA表达量的比值呈剂量依赖性下降,进而减少凋亡发生。结论:解毒通络调肝方通过抑制IRE1α/JNK信号通路,进而改善胰岛素抵抗,并减少凋亡而保护胰岛功能。

基于NF-κB/Bcl-2细胞凋亡通路探讨健脾通络解毒方对胃癌前病变的作用

目的:研究健脾通络解毒方对胃癌前病变(PLGC)细胞凋亡的影响。方法:依据临床诊断及纳入标准入组的36例PLGC患者,予健脾通络解毒方干预治疗6个月,采集治疗前后症状变化及内镜下表现,应用免疫组化、RT-PCR等技术,检测治疗前后组织病理变化,细胞凋亡指数,凋亡信号通路(NF-κB/Bcl-2)上相关基因、蛋白表达(Bcl-2、Bax、NF-κB)等指标的变化。结果:①免疫组化蛋白表达:治疗后NF-κB、Bcl-2、Bax阳性表达率略为升高。经统计分析,治疗前后NF-κB积分与Bcl-2积分有明显变化,二者均存在治疗前后的差异,NF-κB(P<0.01)、Bcl-2(P<0.01),Bax积分有略升高变化,但差异无统计学意义。②细胞凋亡指数(TUNEL法):治疗后细胞凋亡指数(AI)值较治疗前有减低变化。③RT-PCR mRNA表达:Bcl-2 mRNA转录水平在治疗前表达为0.27±0.18,治疗6个月后为0.18±0.12,两者之间有显著性差异(P<0.05)。结论:健脾通络解毒方及其方药可通过促进细胞凋亡而对慢性萎缩性胃炎(CAG)伴肠上皮化生(IM)或伴有不典型增生(Dys)起到一定的治疗作用,从而达到预防PLGC向胃癌发展的作用。

清热解毒活血通络方联合复方黄柏液对糖尿病足患者的疗效分析

目的:观察清热解毒活血通络方联合复方黄柏液对于糖尿病足患者的治疗效果。方法:选取2014年4月—2015年5月期间在齐齐哈尔医学院附属第三医院内分泌科进行治疗的糖尿病足患者共178例,采用单纯随机抽样法将患者分为两组,每组89例。观察组进行清热解毒活血通络方联合复方黄柏液治疗,口服清热解毒活血通络方3周,同时外用复方黄柏液3周;对照组外用康复新液3周,观察两组患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),血管内皮生长因子(VEGF),白细胞介素-6(IL-6)的变化情况,临床症状改善情况,血流及神经指标变化情况,并对血流及神经指标与相关因子进行相关性分析。结果:观察组疗效优于对照组(P<0.01);两组患者足背动脉血流速度和腓总神经传导速度比较均具有统计学意义(P<0.01);在治疗后第1,2,3周,两组患者的血清TNF-α,IL-6,VEGF水平比较均具有统计学意义(P<0.01)。足背动脉血流速度与TNF-α和IL-6呈正相关,与VEGF呈负相关;腓总神经传导速度与VEGF呈正相关,与TNF-α和IL-6呈负相关。结论:清热解毒活血通络方联合复方黄柏液对于糖尿病足具有良好的治疗效果,值得在临床推广使用。

解毒通络生津方治疗原发性干燥综合征的临床观察

目的:探讨解毒通络生津方治疗轻度原发性干燥综合征(primary Sjogren’s Syndrome,p SS)患者的临床疗效。方法:纳入90例轻度p SS患者,随机分成治疗组和对照组,每组45例。治疗组采用解毒通络生津方治疗,对照组采用硫酸羟基氯喹片治疗,疗程为12周。分别于治疗前后检测两组患者的外周血C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR)及人软骨糖蛋白-39(YKL-40)的水平,并比较两组患者的p SS疾病活动度指数(Sjogren’s Syndrome disease activity index,SSDAI)评分的变化。结果:治疗后,两组患者的CRP、ESR及血清YKL-40水平较治疗前均明显降低(P<0.01),且治疗组患者的CRP、ESR及血清YKL-40水平低于对照组(P<0.01)。治疗后,两组患者的SSDAI评分较治疗前均明显降低(P<0.01),且治疗组患者的SSDAI评分低于对照组(P<0.01)。结论:解毒通络生津方可明显降低轻度p SS患者的疾病活动度,缓解病情发展,其作用机制可能与调节体内失调的免疫反应进而发挥有效的抗炎作用有关。

基于AMPK/mTOR/ULK1通路探讨解毒通络保肾方改善糖尿病肾脏疾病的作用机制

目的通过动物实验及细胞实验观察解毒通络保肾方对糖尿病肾脏疾病(DKD)大鼠肾脏病理形态及大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)增殖的影响,探讨其改善DKD的作用机制。方法(1)从85只健康雄性SD大鼠中任取10只纳入正常组,其余大鼠采用高脂饲料喂养与链脲佐菌素注射诱导为DKD模型。造模成功的大鼠按体质量随机分为模型组,厄贝沙坦组(16 mg/kg),解毒通络保肾方低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0 g/kg)。正常组及模型组给予等量生理盐水灌胃。每日1次,连续灌胃8周。采用光学显微镜和透射电镜观察肾脏组织病理形态,蛋白质印迹法检测肾脏组织自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin-1)、自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)、泛素结合蛋白P62(P62)、自噬相关蛋白5(ATG5)的表达。(2)培养HBZY-1细胞,分为空白对照组(5.5 mmol/L葡萄糖),模型组(30 mmol/L葡萄糖),解毒通络保肾方低、中、高剂量组(50、100、200 mg/L),厄贝沙坦组(5μmol/L)。采用CCK8法检测细胞增殖率,划痕实验检测细胞迁移能力,蛋白质印迹法检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62、ATG5与腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、unc-51样激酶1(ULK1)及磷酸化蛋白(p-ULK1、p-AMPK及p-mTOR)的表达。结果(1)解毒通络保肾方可改善DKD大鼠肾脏基底膜、系膜、肾小管上皮细胞病理形态与超微结构,增加自噬小体、自噬溶酶体数量。与正常组比较,模型组Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、ATG5蛋白表达降低,P62蛋白表达增加(P<0.01);解毒通络保肾方干预后,肾组织中Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、ATG5蛋白表达增加,P62蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。(2)解毒通络保肾方可抑制高糖诱导的HBZY-1细胞增殖,增加LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、ATG5、p-ULK1、p-AMPK蛋白表达,降低P62、p-mTOR蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论解毒通络保肾方可改善DKD大鼠肾脏组织病理与超微结构,抑制高糖诱导的HBZY-1细胞增殖,其机制可能是通过调控AMPK/mTOR/ULK1通路,改善细胞自噬实现的。

解毒通络方对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化作用及机制研究

目的基于探讨糜酶/血管紧张素(Ang)Ⅱ途径探讨解毒通络法治疗心肌纤维化的机制。方法40只Wistar大鼠随机分为正常对照(Ctrl)组、异丙肾上腺素模型(ISO)组、解毒通络方[灌胃解毒通络方50 g/(kg·d),JTF]组和卡托普利治疗[卡托普利0.005 g/(kg·d),CAP]组,每组10只。各组行HE染色及Masson染色评价心肌纤维化程度;碱水解法测定各组大鼠羟脯氨酸含量;ELISA法测定各组心肌组织AngⅡ含量;Western Blot及相对定量实时PCR分别检测各组大鼠心肌组织糜酶蛋白及mRNA表达量。结果与Ctrl组比较,ISO组大鼠心肌组织胶原纤维面积、羟脯氨酸和AngⅡ含量、糜酶蛋白和mRNA表达增加(P<0.05,P<0.01)。与ISO组比较,JTF及CAP组大鼠心肌组织胶原纤维面积、羟脯氨酸和AngⅡ含量、糜酶蛋白mRNA表达下降(P<0.05,P<0.01),JTF组大鼠心肌组织糜酶蛋白含量下降(P<0.05)。与CAP组比较,JTF组大鼠心肌组织糜酶蛋白mRNA表达降低(P<0.05)。结论解毒通络方能够抑制和延缓大鼠心肌纤维化进程,其机制与抑制糜酶/AngⅡ途径有关。