解毒消癥饮抑制大肠癌细胞EMT及PD-L1表达相关研究

目的:从上皮间质转化(EMT)及免疫检查点配体-1 (PD-L1)角度探讨解毒消癥饮治疗大肠癌的生物学机制。方法:从TCGA数据库收集267例大肠癌患者相关数据,采用生物信息学分析大肠癌患者肿瘤特异性生存期与EMT和PD-L1的相关性;采用热图分析EMT相关转录因子与PD-L1之间的相关性,划痕实验检测解毒消癥饮对大肠癌细胞HCT-15和HCT-116愈合能力的影响,Western blot实验检测解毒消癥饮对大肠癌细胞HCT-15和HCT-116 EMT相关因子ZEB1、Snail、PD-L1、ZO-1和E-cadherin等蛋白表达的影响。结果:高表达EMT和高表达PD-L1显著降低了CRC患者生存期(P<0.01,P<0.05);PD-L1基因的表达与EMT相关因子基因(TWIST1、TWIST2、ZEB1、ZEB2、Snail1、Snail2、Vimentin等)表达呈正相关;解毒消癥饮干预后的大肠癌细胞愈合能力显著降低(P<0.05);同时,解毒消癥饮抑制肠癌细胞中EMT因子蛋白ZEB1、Snail、PD-L1的表达,上调ZO-1和E-cadherin蛋白的表达。结论:解毒消癥饮抑制肠癌EMT和免疫检查点配体PD-L1表达,对肠癌的抑制作用与抗肿瘤转移和调节免疫微环境相关。

解毒消癥饮调控β-catenin转位抑制人Huh7和PLC/PRF/5细胞株侧群细胞增殖的机制

目的从肝癌侧群(side population,SP)细胞的角度探讨解毒消癥饮(Jiedu Xiaozheng Yin,JXY)乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract from JXY,EE-JXY)抑制肝癌细胞生长的作用机制。方法研究时间2023年1月至5月。体外培养人肝癌细胞株Huh7和PLC/PRF/5,流式细胞仪分析肝癌细胞中SP细胞的含量并分选SP细胞;平板克隆实验检测SP细胞的克隆形成能力;克隆球形成实验检测SP细胞的体外成球能力;免疫细胞荧光染色技术检测EE-JXY对肝癌SP细胞β-catenin蛋白转位的影响。结果EE-JXY组SP细胞的含量显著低于空白组;SP细胞克隆形成能力和体外成球能力均受到显著抑制;EE-JXY使部分SP细胞β-catenin的表达从胞浆和细胞核转位到了细胞膜。结论EE-JXY能显著抑制Huh7和PLC/PRF/5肝癌SP细胞的增殖,其机制可能与其抑制β-catenin的转位有关。

解毒消癥饮诱导胃癌细胞凋亡相关基因表达的研究

目的:探讨中药复方解毒消癥饮对人胃癌细胞凋亡相关基因表达的影响。方法:将人胃癌细胞株BGC-823分成空白对照组及药物干预低、中、高剂量组,分别加入空白对照血清和相应剂量的解毒消癥饮大鼠含药血清,培养24h、48h和72h;免疫荧光染色法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Fas及Fas-L的表达,应用激光共聚焦显微镜观察并做半定量分析;另行电镜制样、观察。结果:胃癌细胞经解毒消癥饮含药血清干预后,Bax、Fas表达明显增加(P<0.05),且随药物浓度增加该趋势更加明显,Fas-L则随药物浓度的增加表达明显减弱(P<0.05);Bcl-2表达量无明显变化。电镜见胃癌细胞出现早期凋亡现象,主要为细胞核异染色质边聚;线粒体嵴消失、基质深染。结论:解毒消癥饮可能通过调控胃癌细胞Bax、Fas及Fas-L等基因,从而促进细胞凋亡,并降低细胞免疫逃逸的功能。

解毒消癥饮抑瘤机制的计算机分子水平研究

目的探讨解毒消癥饮治疗胃癌的抑瘤机制及作用。方法以解毒消癥饮所含化合物和血管内皮生长因子受体(VEGFR1、VEGFR2)为研究对象,采用Discovery Studio 2.0软件中的LigandFit分子对接模块,研究复方与受体之间的相互作用情况。结果以Dockscore值100为抑制成分阈值,分别筛选出复方中抑制VEGFR1和VEGFR2的成分49个和47个。Dockscore值110可作为化合物具有强抑制VEGFR能力的阈值,分别筛选出复方中抑制VEGFR1和VEGFR2成分16个和10个。最后,筛选出2个黄酮类化合物(田蓟苷和木犀草苷),比VEGFR1原配体抑制能力更好,与VEGFR2原配体抑制能力非常接近,与VEGFR1和VEGFR2传统抑制剂的结构不同,但作用机制相似。结论解毒消癥饮治疗胃癌的作用机制很有可能是通过抑制血管内皮生长因子受体来阻断血管新生。筛选出田蓟苷和木犀草苷这两个黄酮类化合物,可作为VEGFR1和VEGFR2新型双重抑制剂的先导化合物。

解毒消癥饮对肝癌侧群细胞增殖和相关因子表达的影响

目的从肝癌干细胞角度探讨解毒消癥饮抑制肝癌的机制。方法解毒消癥饮乙酸乙酯提取物(EE-JXY)体外干预Hep3B细胞后采用MTT检测细胞存活率;平板克隆实验检测细胞的克隆形成能力;流式细胞仪分析细胞中侧群(SP)细胞的含量;RT-PCR检测干细胞相关基因CD133、Oct4、Nanog和Sox2mRNA的表达。不同浓度组细胞存活率值比较采用单因素方差分析。结果与空白组相比,EE-JXY剂量和时间依赖性抑制Hep3B细胞的存活,0.25mg/ml浓度干预24h后,抑制率达34.37﹪(P<0.01)。克隆形成能力也受到明显抑制(吸光度从0.45±0.06下降至0.29±0.03,P<0.05)。EE-JXY组SP细胞的含量显著降低(从2.27﹪下降至0.8﹪),CD133、Oct4、Nanog和Sox2mRNA的表达均受到抑制。结论 EE-JXY能显著抑制Hep3B细胞的增殖,可能的机制与其下调干细胞相关因子CD133、Oct4、Nanog、Sox2mRNA的表达及SP的比例,干扰肝癌干细胞自我更新有关。

解毒消癥饮对血管生成因子A诱导人脐静脉内皮细胞的体外血管生成抑制作用

目的:探讨解毒消癥饮(JXY)对血管生成因子A(VEGFA)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡、迁移以及血管生成的体外影响。方法:HUVECs分为对照组、诱导组(VEGFA 10ng/mL)、JXY低剂量组(VEGFA10ng/L+JXY0.05mg/mL)、JXY中剂量组(VEGFA10ng/mL+JXY0.1mg/mL)、JXY高剂量组(VEGFA10ng/mL+JXY 0.2mg/mL),通过MTT、Hoechst、划痕实验,管腔形成实验、Transwell以及Western blot分别检测细胞活力、凋亡、修复能力、血管生成、细胞迁移和VEGFR2、MMP2、MMP9蛋白表达。结果:与诱导组比较,JXY以剂量依赖性地抑制VEGFA诱导的细胞增殖、修复能力,迁移以及体外管腔的形成能力(P<0.01),促进凋亡(P<0.05,P<0.01)。进一步研究表明JXY剂量依赖性降低VEGFR2、MMP2、MMP9蛋白表达量。结论:JXY显著抑制VEGFA诱导的HUVECs细胞体外血管生成,与其降低VEGFR2、MMP2、MMP9表达直接相关。