金复康口服液对吉非替尼耐药肺腺癌H1975细胞有氧糖酵解的影响

目的 探讨金复康口服液联合吉非替尼对肺腺癌H1975细胞有氧糖酵解的影响。方法 首先采用CCK-8法检测不同浓度金复康口服液和吉非替尼对H1975细胞增殖的影响;然后实验分为空白组、吉非替尼组、金复康口服液组和联合用药组,采用2-NBDG荧光探针和乳酸测试盒分别检测各组细胞葡萄糖摄取能力及乳酸生成量,酶活性试剂盒检测细胞中糖酵解关键限速酶[己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)]的活性,Western blot法检测细胞中己糖激酶2(HK2)、P型磷酸果糖激酶(PFKP)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)蛋白表达情况,JC-1、DCFH-DA荧光探针分别检测细胞线粒体膜电位和活性氧(ROS)水平。结果 金复康口服液对H1975细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性增强,差异均有统计学意义(P均<0.05);与不同浓度吉非替尼单独作用48 h比较,相应浓度吉非替尼联合金复康口服液作用后的H1975细胞增殖抑制率均更高(P均<0.05)。各给药组细胞葡萄糖相对摄取量与空白组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);各给药组细胞乳酸生成量均明显低于空白组(P均<0.05),且联合用药组明显低于吉非替尼组和金复康口服液组(P均<0.05);吉非替尼组PFK、PK活性,金复康口服液组HK、PFK活性,联合用药组HK、PFK、PK活性均明显低于空白组(P均<0.05),且金复康口服液组与联合用药组HK、PFK活性均明显低于吉非替尼组(P均<0.05)。金复康口服液组和联合用药组HK2、PFKP、PKM2蛋白相对表达量及吉非替尼组PFKP蛋白相对表达量均明显低于空白组(P均<0.05),且金复康口服液组和联合用药组HK2、PFKP、PKM2蛋白相对表达量均明显低于吉非替尼组(P均<0.05)。与空白组比较,各给药组细胞线粒体膜电位明显下降,ROS明显增加,且联合用药组细胞线粒体膜电位下降和ROS增加更明显。结论 金复康口服液能通过抑制有氧糖酵解途径,降低细胞线粒体膜电位,促进ROS产生,增加H1975细胞对吉非替尼的敏感性。

金复康口服液对原发性支气管鳞状细胞癌疗效及血清MMP-9的影响

目的:研究金复康口服液对支气管鳞状细胞癌患者近期疗效、生存质量及血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平的影响。方法:支气管鳞状细胞癌患者45例随机分为常规治疗组(A组,n=23)及常规治疗+金复康口服液组(B组,n=22),观察两组近期疗效(有效率)、患者生存质量(QLQ-LC13量表)及血清MMP-9水平。结果:B组治疗后有效率高于A组约33.60%(P<0.05),QLQ-LC13量表评分下降均大于A组(P<0.05),血清MMP-9水平下降显著高于A组[(11.57±3.26)ng/mL vs.(14.32±3.72)ng/mL](P<0.05)。结论:在常规治疗支气管鳞状细胞癌基础上加用金复康口服液能提高疗效,改善患者生存质量,同时可降低血清MMP-9水平。

基于网络药理学的金复康口服液治疗非小细胞肺癌机制

目的基于网络药理学分析金复康口服液治疗非小细胞肺癌机制。方法通过建立化学成分、靶点、疾病数据库,进行主要活性成分和靶标筛选,并对其进行多层次复杂网络分析、GO及KEGG通路富集分析。结果金复康口服液中筛选出85个满足类药性评估的主要活性化合物,以及130个复方的主要作用靶标。多层次网络模型分析显示,复方网络与疾病网络具有较好的节点相似性;生物功能的富集分析显示,与疾病显著共关联的信号通路主要有PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路、催乳激素信号通路及凋亡信号通路等7条通路。结论网络药理学可从整体上揭示金复康口服液治疗非小细胞肺癌的作用机制,并为该制剂二次开发及基础研究提供依据。

富氢水协同金复康口服液阻断硫代乙酰胺诱发大鼠胆管癌上皮癌变的实验研究

目的观察富氢水、中成药(金复康口服液)或两者协同干预对胆管癌成瘤的影响。方法实验分为四组:对照组(n=10),富氢水组(n=10),金复康口服液组(n=5)和富氢水+金复康口服液组(n=5)。对照组予以成年SD雄性大鼠自由饮用含有硫代乙酰胺(300mg/L)水,实验组在饮用含硫代乙酰胺水的同时,分别经胃灌注适量富氢水、金复康口服液、富氢水+金复康口服液,20周处死所有大鼠,肉眼和显微镜下观察肝成瘤情况。结果9只可评价对照组大鼠在第20周时均形成肉眼以及镜下可见的肿瘤100%(9/9),而富氢水干预组7只大鼠可评价,肝肿瘤发生率为57.1%(4/7),金复康口服液干预组大鼠肝内肿瘤的成瘤率为40%(2/5),富氢水联合金复康口服液干预组大鼠肝内成瘤率为0(0/5)。结论富氢水+金复康口服液的协同作用能够成功阻断大鼠肝内胆管癌的发生。

金复康口服液对气阴两虚型非小细胞肺癌患者的疗效和血清MMP-9水平的影响

目的:研究金复康口服液联合吉西他滨对气阴两虚型非小细胞肺癌患者的疗效和血清MMP-9水平的影响。方法:选取符合纳入标准的120例气阴两虚型非小细胞肺癌患者作为研究对象,随机分为对照组和治疗组,每组60例。对照组给予吉西他滨,治疗组给予金复康口服液联合吉西他滨。比较两组患者临床疗效、血压情况、雌激素水平和不良反应发生情况。结果:治疗后,治疗组的有效率和临床获益率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P <0. 05);治疗组FACT-L评分下降率显著低于对照组,差异具有统计学意义(P <0. 05);治疗组中医证候有效率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P <0. 05);两组患者MMP-9水平均显著优于治疗前,差异具有统计学意义(P <0. 05);且治疗组患者改善程度高于对照组,差异具有统计学意义(P <0. 05)。治疗组患者不良反应发生率显著低于对照组,差异具有统计学意义(P <0. 05)。结论:金复康口服液联合吉西他滨治疗气阴两虚型非小细胞肺癌,具有较好的治疗效果,并且能够改善患者生活质量和中医证候,安全性好,值得在临床上推广应用。

金复康口服液对Lewis肺癌荷瘤小鼠PD-1、PD-L1表达及相关免疫因子的影响

目的:观察金复康口服液对Lewis肺癌小鼠肿瘤微环境中程序性死亡受体1(PD-1)、配体(PD-L1)表达及相关免疫因子的影响。方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,而后随机分为模型组、中药低、中、高剂量组每组8只;实验第1天开始中药低、中、高剂量组小鼠分别按15、30、60 g/(kg·d)灌胃给药,模型组按照等量生理盐水给药,1次/d,连续给药14 d;称取各组小鼠的瘤质量,计算抑瘤率;荧光定量PCR检测荷瘤小鼠肿瘤组织中PD-1和PD-L1的mRNA,Western blot法检测肿瘤组织PD-1、PD-L1的蛋白表达水平,HE染色观察肺组织,同时ELISA法检测血清中免疫因子IFN-γ和IL-12表达量。结果:与模型组比较,金复康口服液中、高剂量组能够抑制肺癌移植瘤生长,抑瘤率分别是36.35%和28.59%;金复康口服液中、高剂量组能明显降低肿瘤组织PD-1、PD-L1 mRNA含量,抑制PD-1、PD-L1蛋白表达;HE染色显示中、高剂量组肺组织形态完整,未见明显癌巢;中剂量组明显增加血清中IFN-γ和IL-12的含量。结论:金复康口服液对肺癌移植瘤的生长有一定抑制作用,机制可能与降低肿瘤微环境中PD-1、PD-L1水平并增加血清中免疫因子IFN-γ和IL-12的含量有关。

基于Meta分析的金复康口服液辅助化疗治疗肺癌临床评价研究

目的:系统评价金复康口服液联合化疗治疗肺癌的临床疗效和安全性。方法:计算机检索PubMed、Embase、the Cochrane Library、CNKI、WanFang Data、VIP、SinoMed数据库,搜集关于金复康口服液联合化疗治疗肺癌的随机对照试验,检索时限均为从建库至2020年7月14日,由两名研究者独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险后,通过RevMan 5.3、Stata 12.0软件进行Meta分析和敏感性分析。结果:共纳入8项研究,累计818例患者。Meta分析结果显示,对比单纯化疗,加用金复康口服液不仅可以提高临床总有效率[RR=1.20,95%CI(1.11,1.29),P<0.000 01],改善生存质量[RR=3.40,95%CI(1.37,8.44),P=0.008],而且有助于缓解化疗导致的不良反应,改善机体免疫功能。结论:临床证据显示,在化疗基础上加用金复康口服液对肺癌有一定辅助治疗作用。但本研究结论尚需更多设计合理、严格执行的大样本随机双盲对照试验加以证实。

金复康口服液精简方对顺铂所致肾小管上皮细胞凋亡的作用

为研究金复康口服液精简方(ALG-12)对顺铂(cisplatin,DDP)所致肾小管损伤的作用,将48只C57小鼠随机分为对照组(control)、模型组(model)、DDP组及DDP联用ALG-12低、中、高剂量组,在构建小鼠皮下Lewis肺癌异位移植瘤模型后连续给药16 d,对小鼠肾组织病理变化、血清肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肾损伤分子1(kidney injury molecule 1,Kim-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)、肾组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总超氧歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)及肾小管细胞凋亡程度进行分析,考察ALG-12对DDP治疗非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)所致肾损伤的影响。体外构建人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)模型,通过cell counting kit(CCK)-8、细胞周期及凋亡实验评价ALG-12含药血清对DDP的HK-2的细胞毒性影响。实时荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)及免疫组化用于分析ALG-12对肿瘤蛋白p53(tumor protein p53,p53)介导的凋亡相关基因的表达水平。结果显示,ALG-12可显著缓解Scr、BUN、Kim-1、NGAL、MDA、T-SOD的异常,减轻肾小管损伤、肾间质纤维化及肾小管细胞凋亡程度,提示ALG-12在体内可以减轻DDP所致的肾损伤。体外细胞实验发现ALG-12含药血清可以抑制DDP造成的HK-2细胞凋亡及周期抑制。另外ALG-12可抑制p53信号通路上共济失调毛细血管扩张突变基因Rad3相关激酶(ataxia-telangiectasia mutated-and Rad3-related gene,ATR)、肿瘤蛋白p53基因(tumor protein p53 gene,Tp53)、Bcl-2绑定组件3(Bcl-2 binding component 3,BBC3)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的转录,降低p53、Bax、剪切的半胱天冬蛋白酶3(cleaved caspase-3)的蛋白表达水平,增加B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia 2,Bcl-2)及半胱天冬蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达。研究结果表明,ALG-12对DDP所致肾小管上皮细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抑制p53介导的细胞凋亡相关,为进一步开发ALG-12提供依据。

金复康口服液联合培美曲塞对非小细胞肺癌患者免疫功能、肿瘤标志物及血清VEGF、MMP-9水平的影响

目的:观察金复康口服液联合培美曲塞对非小细胞肺癌(NSCLC)患者免疫功能、肿瘤标志物及血清血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平的影响。方法:研究所涉及的60例NSCLC患者均为2017年8月至2020年8月期间我院收治的患者。根据随机数字表法将患者分为对照组和观察组,分别为30例。其中对照组给予培美曲塞联合顺铂化疗,观察组在对照组的基础上联合金复康口服液治疗,均以21 d为1个疗程,治疗4个疗程。对比两组治疗4个疗程后的疗效,对比两组治疗前、治疗4个疗程后的免疫功能、肿瘤标志物[细胞角质素片段抗原21-1 (CYFRA21-1)、糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)]及血清VEGF、MMP-9水平,对比两组毒副反应。结果:观察组的疾病控制率高于对照组(P<0.05)。治疗4个疗程后,两组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)下降,但观察组高于对照组(P<0.05)。治疗4个疗程后,两组CA125、CYFRA21-1、CEA水平下降,且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗4个疗程后,两组血清MMP-9、VEGF水平下降,且观察组低于对照组(P<0.05)。两组的毒副反应总发生率对比无差异(P>0.05)。结论:金复康口服液联合培美曲塞治疗NSCLC患者,可控制病灶,降低血清MMP-9、VEGF水平,减轻免疫抑制,安全有效。

金复康口服液对吉非替尼耐药人肺腺癌PC9/R的增敏作用和机制研究

目的研究金复康口服液对人肺腺癌PC9细胞及耐药PC9/R细胞的吉非替尼增敏作用及机制。方法金复康口服液20 mg/mL联合不同浓度的吉非替尼(40、20、10、5、2μmol/L)作用于PC9/R细胞,CCK-8法检测细胞增殖;培养PC9、PC9/R细胞,分为对照组、金复康口服液组、吉非替尼组、联合用药组,流式细胞术检测PC9、PC9/R细胞周期和凋亡。在BALB/c裸鼠右前肢腋窝皮下接种PC9/R细胞建立裸鼠移植瘤模型,观察金复康口服液联合吉非替尼的体内抑瘤作用;对AKT、p-AKT、PTEN、PDCD4蛋白表达的影响和对miRNA-21表达的影响。结果与吉非替尼(2、5、10、20μmol/L)组比较,吉非替尼(2、5、10、20μmol/L)+金复康口服液(20 mg/mL)组的PC9/R细胞抑制率显著增加(P<0.01);与吉非替尼组比较,联合用药可以通过显著增加早期凋亡细胞比例诱导PC9及PC9/R细胞凋亡,并使PC9、PC9/R细胞停滞在DNA合成前期,从而抑制细胞增殖,差异均具有统计学意义。体内实验表明,与吉非替尼组比较,联合用药显著抑制裸鼠PC9/R移植瘤的生长(P<0.05),且能显著降低裸鼠PC9/R组织p-AKT表达(P<0.05),增强PTEN、PDCD4的表达(P<0.05),联合用药组裸鼠PC9/R瘤组织miRNA-21的表达显著降低(P<0.05)。结论金复康口服液能提高人肺腺癌PC9/R细胞对吉非替尼的敏感性,其作用的可能机制为通过降低miRNA-21的表达从而增强PTEN、PDCD4的表达以抑制AKT通路活性。

基于循环肿瘤细胞金复康口服液联合化疗治疗术后Ⅰb~Ⅱb期非小细胞肺癌的临床研究

目的:基于循环肿瘤细胞(CTC)比较单纯化疗与金复康口服液联合化疗治疗Ⅰb~Ⅱb期非小细胞肺癌(NSCLC)术后患者的疗效差异。方法:采用多中心随机对照研究方法,纳入144例Ⅰb~Ⅱb期NSCLC术后患者,随机分为治疗组72例与对照组72例,对照组患者给予含铂双药化疗方案治疗,治疗组患者在对照组治疗基础上给予金复康口服液口服。21~28 d为1个化疗周期,共治疗4个周期。分别于化疗前、化疗中(第2周期化疗后)、化疗后(第4周期化疗后)及化疗结束后1年、1.5年、2年,检测所有患者的CTC计数,并于化疗前检测所有患者的肿瘤标志物及免疫指标水平。采用重复测量分析探讨CTC变化趋势,采用Spearman分析法对CTC计数与肿瘤标志物、免疫指标水平进行相关性分析,采用多因素线性回归对CTC计数与免疫指标水平进行相关性分析。结果:研究中,3例患者被剔除,最终纳入统计分析者治疗组70例、对照组71例。(1)对照组患者的CTC计数在化疗期间下降,但在化疗结束后出现反弹,治疗组患者的CTC计数在化疗中及化疗后均持续下降,无反弹趋势。(2)Ⅱb期患者化疗结束后1年CTC计数治疗组低于对照组(P<0.05),其他观察时点组间差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)相关性分析结果显示,CTC计数与癌胚抗原(CEA)、CD8+T淋巴细胞水平呈正相关(P<0.05)。结论:金复康口服液联合化疗可在一定程度上降低Ⅰb~Ⅱb期NSCLC术后患者外周血CTC计数,并在一定程度上抑制化疗结束后CTC计数的反弹趋势,尤其对Ⅱb期患者效果更显著。

金复康口服液二次开发总体研究思路与技术体系框架

已上市中成药大多具有良好临床疗效和应用基础,但基础研究不足,物质基础不清,工艺水平落后,产品价值难以体现,质量控制指标选择不明,产品质量水平难以保持。中成药金复康口服液是临床中成药的典型代表。以金复康口服液作为模型药物,以中药整体观和系统论为指导,构建现代中药二次开发研究思路和技术体系。该体系包括"基础研究——明晰组分结构和作用机制"、"工艺提升——优化工艺提高质量"、"拓展产业——形成产业链"3个内容层次。该研究思路和技术体系立足现代中药物质基础与开发,以中药组分结构为向导,以临床需求为依归,为中药二次开发提供策略和方法。

金复康口服液联合培美曲塞治疗非小细胞肺癌的临床研究

目的研究金复康口服液联合注射用培美曲塞二钠治疗非小细胞肺癌的临床疗效。方法选取2016年1月-2018年1月南京市胸科医院诊治的120例非小细胞肺癌患者作为研究对象,采用随机对照表法将患者分为对照组和治疗组,每组各60例。对照组静脉滴注注射用培美曲塞二钠500 mg/m^2,静脉输注10 min以上;治疗组患者在对照组治疗的基础上口服金复康口服液,30 mL/次,3次/d。21 d为1个疗程,两组均持续治疗2个疗程。观察两组患者的临床疗效,同时比较两组治疗前后的生活质量(QOL)评分、KPS评分、无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)和免疫功能指标水平。结果治疗后,对照组和治疗组的客观缓解率和疾病控制率比较差异无统计学意义。治疗后,两组患者QOL和KPS评分均显著升高,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.05);且治疗后治疗组QOL评分和KPS评分显著高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组患者PFS和OS显著长于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者CD3^+、CD4^+、NK和CD4^+/CD8^+水平显著升高,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.05);且治疗后治疗组免疫功能指标水平显著高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论金复康口服液联合注射用培美曲塞二钠治疗非小细胞肺癌具有较好的临床疗效,能够改善患者生活质量,提高免疫功能,且安全性较高,具有一定临床推广应用价值。

金复康口服液诱导肺癌细胞A549凋亡的机制

目的：研究金复康口服液（JFK）诱导人非小细胞肺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法：取对数生长期的人非小细胞肺癌细胞A549,随机分为空白组和药物组,采用溴化四甲基偶氮（MTT）比色法,考察不同质量浓度JFK（0.3,1.5,3,7.5,15,30 g·L（-1））对A549细胞体外增殖能力的影响。通过平板克隆形成实验考察JFK对A549细胞平板克隆形成的影响,利用流式细胞仪考察JFK对A549细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法（Western blot）考察JFK对裂解DNA修复酶（cleaved PARP）,活化型半胱天冬酶-3（actived Caspase-3）,Wnt/β-联蛋白（β-catenin）,细胞周期蛋白D1（cyclin D1）的蛋白表达及对促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路和蛋白激酶B（Akt）信号通路的影响,实验中设置空白组和药物组,药物组为A549细胞加入15,30 g·L（-1）JFK,分别干预24 h,30 min。结果：JFK在1.5-30 g·L（-1）呈质量浓度依赖性的抑制A549细胞外增殖（P〈0.01）。JFK抑制A549细胞的平板克隆形成在15-30 g·L（-1）,其中JFK 30 g·L（-1）时抑制A549细胞的平板克隆最显著（P〈0.01）。与空白组比较,JFK 15-30 g·L（-1）可提高AnnexinⅤ和PI双阳细胞率,诱导A549细胞凋亡（P〈0.05）,且呈浓度依赖性提高cleaved PARP和actived Caspase-3的蛋白表达,并抑制β-catenin和cyclin D1在蛋白水平的表达（P〈0.05,P〈0.01）。JFK上调MAPK信号通路中JNK和p38的蛋白磷酸化水平（P〈0.05）,同时下调Akt信号通路中Akt在T308和S473的位点磷酸化水平（P〈0.05）。结论：金复康口服液抑制人非小细胞肺癌细胞A549的体外增殖、平板克隆的形成并诱导其凋亡,部分通过调控JNK/p38/MAPK信号通路和Akt信号通路,抑制β-catenin和cyclin D1,同时提高凋亡相关蛋白cleaved PARP和actived Caspase-3的表达。

金复康口服液联合吉非替尼对H1975肺癌裸鼠移植瘤生长及有氧糖酵解的影响

目的 观察金复康口服液联合吉非替尼对肺癌H1975细胞裸鼠移植瘤生长及有氧糖酵解的影响。方法 采用生物信息学分析HK2、PFKP、PKM2、LDHA在肺腺癌中的表达及对诊断和预后的影响;建立人肺腺癌H1975细胞荷瘤裸鼠模型后随机分为模型组、吉非替尼组(38 mg/kg)、金复康口服液组(25 g/kg生药)和联合用药组(38 mg/kg吉非替尼+25 g/kg金复康口服液生药),每组6只。每周测量移植瘤体积及裸鼠体质量2次,给药21日后取肿瘤组织称重并计算相对肿瘤增殖率及抑瘤率;采用RT-PCR、Western Blot法检测各组移植瘤组织HK2、PFKP、PKM2、LDHA的m RNA及蛋白表达;微量法检测糖酵解酶活性、ATP及乳酸含量。结果 生物信息学分析显示PFKP、PKM2和LDHA在肺腺癌中高表达,对肺腺癌的诊断和预后判断具有一定参考意义。与模型组及单药组比较,联合用药组肿瘤体积及肿瘤质量降低(P<0.01),抑瘤率提高(P<0.01)。与模型组比较,联合用药组HK2、PFKP及PKM2的m RNA及蛋白表达下调(P<0.01),LDHA蛋白表达无明显变化,移植瘤内HK、PFK活性下调,ATP和乳酸含量降低(P<0.01)。结论 复康口服液能增强耐药H1975细胞荷瘤裸鼠对吉非替尼的敏感性延缓肿瘤生长,其机制可能是通过下调HK2、PFKP和PKM2水平,减少ATP及乳酸生成,抑制有氧糖酵解实现的。