基于PI3K/Akt信号通路探讨金骨莲提取物抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的作用及机制

目的:探讨金骨莲提取物(JGL)对炎症的抑制作用及其机制。方法:实验分为空白组(10%胎牛血清),脂多糖(LPS)模型组(0.5 mg·L^(-1)),JGL给药组(10,20,40,60,80,120,160,200,250,300 mg·L^(-1)),JGL给药组同时给予LPS刺激(0.5 mg·L^(-1)),培养24 h进行后续检测。采用细胞增殖与检测试剂盒(CCK-8)试剂检测JGL对RAW264.7细胞增殖活性的影响;采用Griess法检测一氧化氮(NO)的释放;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6,IL-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)释放;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测炎症相关因子诱导型一氧化氮合酶(i NOS),前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)/环氧合酶-2(COX-2)的表达及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)途径关键蛋白的活化。结果:与空白组比较,LPS(0.5 mg·L^(-1))刺激24 h后能显著促进RAW264.7细胞增殖(P<0.01),与模型组比较,JGL对细胞增殖无显著显著影响;与空白组比较,LPS(0.5 mg·L^(-1))能显著增加NO,IL-1β,IL-6,IL-10和TNF-α的释放(P<0.01),与模型组比较,JGL(20~300 mg·L^(-1))给药24 h后能剂量依赖性显著抑制NO的释放(P<0.01);与模型组比较,JGL各剂量组IL-1β,IL-6,IL-10均明显降低(P<0.05,P<0.01),但对TNF-α的释放未见明显的抑制作用;与空白组比较,LPS(0.5 mg·L^(-1))能显著诱导i NOS,PTGS2/COX-2基因表达(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,JGL各剂量组能下调i NOS,PTGS2/COX-2 m RNA的表达(P<0.05,P<0.01);与空白组比较,LPS(0.5 mg·L^(-1))组PI3K/Akt通路显著活化(P<0.01),JGL(10,20,40,80 mg·L^(-1))显著降低PI3K p110和p-PI3K p85蛋白及Akt磷酸化水平(P<0.01),抑制PI3K/Akt通路活化。结论:金骨莲提取物能明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,减少炎症因子的释放,其抗炎作用与抑制PI3K/Akt途径有关。

正交实验优化金骨莲胶囊的提取工艺研究

目的:优化金骨莲胶囊的提取工艺。方法:设计正交实验,采用UPLC-MS测定提取液中富马酸、鹅掌楸苷、滇白珠苷A的含量,以各成分的转移率和流浸膏得率为评价指标,优选出金骨莲胶囊中透骨香、汉桃叶、大血藤和八角枫这4味药材的提取工艺;采用比色法测定金铁锁总皂苷的含量,以总皂苷转移率和总固体得率为指标,优选金铁锁的提取工艺。结果:透骨香等4味药材的优选提取工艺为加4倍水提取3次、每次2 h;金铁锁的优选提取工艺为加5倍水提取1次、每次2 h。结论:此方法简单可行、重复性好、提取效率高,可用于金骨莲胶囊的提取工艺。