Identifying the molecular basis of Jinhong tablets against chronic superficial gastritis via chemical profile identification and symptom-guided network pharmacology analysis

Chronic superficial gastritis(CSG)is a common disease of the digestive system that possesses a serious pathogenesis.Jinhong tablet(JHT),a traditional Chinese medicine(TCM)prescription,exerts therapeutic effects against CSG.However,the molecular basis of its therapeutic effect has not been clarified.Herein,we employed ultra-performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry(UPLC-Q/TOF-MS)based chemical profile identification to determine the chemical components in JHT.Further,we applied network pharmacology to illustrate its molecular mechanisms.A total of 96 chemical constituents were identified in JHT,31 of which were confirmed using reference standards.Based on the bioinformatics analysis using the symptom-guided pharmacological networks of“chi,”“blood,”“pain,”and“inflammation,”and target screening through the interaction probabilities between compounds and targets,matrix metalloproteinase 2(MMP2),dopamine d2 receptor(DRD2),and Aldo-keto reductase family 1 member B1(AKR1B1)were identified as key targets in the therapeutic effect exhibited by JHT against CSG.Moreover,according to the inhibitory activities presented in the literature and binding mode analysis,the structural types of alkaloids,flavonoids,organic acids,including chlorogenic acid(10),caffeic acid(13),(-)-corydalmine(33),(-)-isocorypalmine(36),isochlorogenic acid C(38),isochlorogenic acid A(41),quercetin-3-O-a-L-rhamnoside(42),isochlorogenic acid B(47),quercetin(63),and kaempferol(70)tended to show remarkable activities against CSG.Owing to the above findings,we systematically identified the chemical components of JHT and revealed its molecular mechanisms based on the symptoms associated with CSG.

UHPLC-MS/MS法同时测定金红片中6种活性成分的含量

目的 建立UHPLC-MS/MS法同时测定金红片中川楝素、延胡索甲素、延胡素乙素、木香烃内酯、莽草酸、去氢木香内酯6种活性成分的含量。方法 选用Infinitylab Poroshell 120 EC-C_(18)色谱柱(100 mm×4.6 mm, 2.7μm),以体积分数0.01%甲酸水溶液和体积分数0.01%甲酸乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5 mL·min~(-1),木香烃内酯、延胡索甲素、去氢木香内酯、延胡索乙素的离子源为ESI+,川楝素和莽草酸的离子源为ESI-,采用多反应监测扫描方式检测。结果 莽草酸在质量浓度10~1 000μg·L~(-1)内呈现良好的线性关系(r=0.999 6),其余5种活性成分的质量浓度在1~100μg·L~(-1)内呈现良好的线性关系(r=0.993 5~0.999 4),平均加样回收率为91.2%~109.0%。结论 本研究可用于金红片中多种活性成分的含量测定,为金红片质量控制的完善提供参考。

锦红片对胆管炎大鼠胸腺的影响

目的:探讨急性胆管炎状态下细胞免疫中枢胸腺的变化以及中药锦红片的干预作用。方法:雄性清洁级SD大鼠24只,随机分为3组,每组8只。胆总管单纯结扎组(简称单纯结扎组):结扎胆总管,但不注射细菌,手术后喂生理盐水;模型组:建立大鼠急性胆管炎模型,造模手术后喂生理盐水;锦红片治疗组:造模手术后喂锦红片悬液。手术后5d处死大鼠,胸腺取材,做胸腺电镜和光镜形态学观察,并检测胸腺质量、胸腺指数、凋亡指数、胸腺Bcl-2基因编码蛋白表达和胸腺Fas基因编码蛋白的表达。结果:形态学上凋亡细胞出现频率由高到低依次为模型组、锦红片治疗组和单纯结扎组。模型组胸腺质量和胸腺指数均降低,与锦红片治疗组和单纯结扎组相比,差异有统计学意义。模型组胸腺凋亡指数明显高于锦红片治疗组和单纯结扎组。锦红片治疗组Bcl-2基因编码蛋白表达高于模型组,Fas基因编码蛋白表达组间差异无统计学意义。结论:急性胆管炎时大鼠胸腺质量、胸腺指数降低,胸腺凋亡指数升高,非生理性凋亡增加。清热通下中药锦红片有一定的抑制这种非生理性凋亡的作用,这种作用可能是通过上调凋亡抑制基因Bcl-2编码蛋白的表达实现的。

锦红片对肝胆湿热证胆石病术后证候影响的临床研究

目的:探讨锦红片对肝胆湿热证胆石病术后证候变化的影响,为其围手术期的规范运用提供依据。方法:收集本院2010年1月—2011年12月期间住院手术治疗的肝胆湿热证胆石病患者100例,随机分为对照组和锦红片组各50例,其中对照组术后服用锦红片,锦红片组在术后配合服用锦红片。观察患者一般情况、热平时间及腹痛缓解时间等。制订《胆石病术后肝胆湿热证中医证候调查表》,分析锦红片对胆石病患者术后肝胆湿热证中医证候的影响。结果:两组之间的性别、年龄、手术方式均衡性良好,无统计学差异。锦红片组的热平时间、排便时间、抗生素使用时间明显低于对照组,有显著统计学差异(P<0.01)。锦红片组的腹痛缓解时间、排气时间低于对照组,有统计学差异(P<0.05)。治疗后5 d,锦红片组的腹部嘈杂、舌体胖大、舌质淡白的出现频次均高于对照组,有统计学差异(P<0.05);对照组的低热、手足心汗、呕吐苦水、口渴饮水不多、舌质红、舌苔薄黄腻的出现频次均高于锦红片组,有统计学差异(P<0.05)。结论:对肝胆湿热证胆石病患者围手术期应用锦红片,可以缩短发热时间、腹痛时间、抗生素使用时间,加快肠功能恢复。同时术后清除湿热疗效显著,但在术后5 d容易出现脾胃虚损和肝阴虚的证候,此时应酌加养肝柔肝之药以免伤阴太过,或酌加健脾和胃之品以顾护脾胃。

锦红片对急性胆源性感染大鼠JNK、P38、ERK mRNA及蛋白表达调控的研究

目的:探讨锦红片对急性胆源性感染大鼠MAPK通路信号分子JNK、P38、ERK mRNA及蛋白表达的影响。方法:40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、锦红片组及庆大霉素组,每组10只。采用胰胆管内注入大肠杆菌法建立急性胆源性感染大鼠模型,假手术组仅开腹关腹;各药物组在造模后第1天予相应剂量药物灌胃,假手术组和模型组予等量生理盐水灌胃。各组均在药物干预后第5天取材,分别用HE染色和电镜观察小肠大体形态及超微结构变化,Real time-PCR和Western blot分别检测小肠JNK、P38、ERK mRNA及蛋白表达。结果:模型组大鼠大体形态和超微结构均有不同程度病理改变,锦红片和庆大霉素能一定程度上改善。模型组大鼠小肠组织JNK、P38及ERK mRNA表达均高于假手术组(P<0.01);锦红片及庆大霉素组大鼠小肠组织JNK、P38及ERK mRNA表达低于模型组(P<0.01);锦红片组大鼠小肠组织ERK mRNA表达低于庆大霉素组(P<0.01)。模型组大鼠小肠组织本底及磷酸化JNK、P38及ERK蛋白表达高于假手术组(P<0.01);锦红片组大鼠小肠组织本底及磷酸化JNK及P38蛋白表达低于模型组(P<0.05或P<0.01),庆大霉素组大鼠小肠组织本底JNK蛋白表达低于模型组(P<0.01);锦红片组大鼠小肠组织本底JNK蛋白表达低于庆大霉素组(P<0.01);锦红片组和庆大霉素组大鼠小肠组织本底及磷酸化ERK蛋白表达与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:"下调MAPK信号通路中JNK、P38及ERK信号分子—抑制肠黏膜上皮细胞过度凋亡—保护肠黏膜屏障—防止炎症二次打击"可能是锦红片治疗急性胆道感染的重要作用途径之一。

锦红片治疗急性腹腔感染脓毒症临床观察与实验研究

目的本研究通过临床试验及动物实验,观察锦红片治疗急性腹腔感染脓毒症的临床疗效与安全性,为腹腔感染脓毒症的预防和治疗提供可能存在靶点,提高中医药参与重症感染性疾病的可能性及其临床疗效。方法临床试验:纳入2016年10月—2010年10月上海中医药大学附属龙华医院和龙华金山分院普外科急诊和住院病人,将符合急性腹腔感染脓毒症诊断标准共62例患者随机分为对照组和治疗组各31例。对照组采用对症处理,治疗组在对照组的基础上加用锦红片治疗,比较两组治疗前后并发症率、病死率、中医症状评分、住院天数和住院费用等。实验研究:将144只雄性SD大鼠(体质量:220~250 g)随机分为正常组、模型组、假手术组、中药组、西药组、联合组,每组24只,采用公认的盲肠结扎穿孔(cecum ligation and puncture,CLP)脓毒症模型进行造模。各组造模后行相应的药物干预,每组大鼠再按术后0、2、6、24 h 4个时间节点分为4个亚组,每组6只,在各时间点取腹主动脉血6 mL,离心后取血清检测炎性介质指标[白细胞(WBC)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)]和肠黏膜屏障功能指标(sIgA、PepT1、DAO)。结果临床研究试验组并发症发生率为3.23%,病死率为0.00%,平均住院时间为(11.27±4.52)d,平均住院费用为(2.45±1.90)万元,均少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验研究中正常组、假手术组WBC、CRP、PCT 3个指标基本维持在低位,模型组、中药组、西药组、联合组在造模后出现上升趋势,其中模型组持续维持在高位。西药组WBC、CRP在6 h后开始出现了下降,联合组CRP、WBC在2 h后即开始下降,程度更为明显,观察结束WBC、CRP水平低于模型组、中药组、西药组;随时间推移中药组、西药组、联合组PCT出现下降,联合组下降较中药组、西药组明显。在观察时间内,模型组、中药组、西药组、联合组较正常组、假手术组sIgA、PepT1、DAO出现上升趋势,其中模型组持续上升,中药组、西药组、联合组则出现缓慢下降。观察24 h后联合组sIgA、PepT1、DAO水平低于模型组、中药组、西药组,接近于假手术组,高于正常组。结论临床研究证实锦红片对急性腹腔感染脓毒症患者有一定的临床疗效,可以明显改善患者体征和减轻脓毒症症状,在一定程度上可减少并发症的发生率和降低病死率,进而间接的缩短了患者的住院时间并减轻了住院负担。实验研究表明中药锦红片在一定程度上能够减轻炎性因子产生,起到保护和修复肠黏膜屏障功能,减轻脓毒症症状,达到改善疾病预后的作用。

锦红片对急性胆源性感染大鼠TLR4及claudin-1表达的影响

目的:观察锦红片对急性胆源性感染大鼠Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)及claudin-1表达的影响。方法:将40只大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、锦红片组及庆大霉素组,每组各10只。模型组、锦红片组及庆大霉素组胰胆管内逆行注入大肠杆菌建立急性胆源性感染大鼠模型,对照组仅开腹静置10 min后关腹。造模后第1天,锦红片组给予锦红片溶液0.33 g·(kg·d)^-1灌胃,庆大霉素组给予庆大霉素溶液21.9 mg·(kg·d)^-1灌胃,对照组和模型组均在造模后第1天给予等量生理盐水灌胃。HE染色观察小肠大体形态学变化,ELASA法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)含量。分别用real time-PCR和Western blot法检测小肠组织TLR4、claudin-1 mRNA及蛋白表达。结果:模型组大鼠小肠组织大体形态学存在病理改变,锦红片和庆大霉素均能改善以上病理改变。与对照组比较,模型组IL-1β、IL-6和TNF-α含量增加;与模型组比较,锦红片组IL-1β、IL-6和TNF-α含量降低,庆大霉素组IL-1β和TNF-α含量降低;与庆大霉素组比较,锦红片组IL-1β和TNF-α含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。庆大霉素组与锦红片组IL-6含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,模型组TLR4、claudin-1 mRNA表达增强;与模型组比较,锦红片组TLR4、claudin-1 mRNA表达降低,庆大霉素组claudin-1 mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。庆大霉素组与锦红片组TLR4、claudin-1 mRNA表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:锦红片治疗急性胆源性感染的作用机制可能为降低机体炎性因子水平,下调小肠TLR4、claudin-1 mRNA及蛋白表达,从而保护和修复肠黏膜屏障。

金红片联合西药对老年腹泻型肠易激综合征胃肠道及生活质量的影响

目的:观察金红片联合西药对腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome-diarrhea,IBS-D)老年患者胃肠道及生活质量的影响,以探讨金红片的临床效果。方法:研究对象为80例老年IBS-D患者,选取随机数字表法将其分为两组,研究组40例和对照组40例。所有患者给予马来酸曲美布汀治疗,研究组加用金红片治疗,对照组加用藿香正气水治疗,均给予连续治疗1个月。观察两组在治疗前后胃肠道的症状、大便的频率、Bristol评分和生活质量量表(Quality of Life,QOL)评分变化情况,比较金红片与藿香正气水的临床治疗效果。结果:研究组经治疗后显效例数为28例,有效例数为10例,经治疗后总有效率达到95.0%,对照组经治疗后显效例数为14例,有效例数为16例,经治疗后总有效率为75.0%,两组比较具有显著性差异(P<0.05),提示临床诊疗效果研究组明显优于对照组。研究组经治疗胃肠道症状评分、大便频率评分、Bristol评分降低显著优于对照组(P<0.05),QOL评分升高显著优于对照组(P<0.05)。结论:金红片可明显改善老年IBS-D患者的胃肠道症状,缓解焦虑情绪,提高老年人的生活质量。

超高效液相色谱-串联质谱法测定金红片中川楝素的含量

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法测定金红片中川楝素含量的方法。方法:采用Phenomenex Kinetex XB C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),水和乙腈作为流动相行梯度洗脱,流速为0.5 ml/min,离子源为电喷雾离子源负离子模式(ESI-),采用多反应监测扫描方式检测金红片中川楝素的含量。结果:川楝素在0.01~200μg/L范围内线性关系良好(r=0.9979),定量限为0.01μg/L。方法重复性和精密度良好,低、中及高3个水平下的加样回收率为96.9%~105.8%,RSD为1.88%~3.21%。稳定性试验结果表明供试品溶液在室温(25℃)放置48 h内稳定。结论:本方法线性范围大,线性关系好,精密度高,分析时间短,可用于金红片中川楝素的质量控制。

金红片中活性成分在正常大鼠和浅表性胃炎大鼠体内的药代动力学研究

目的:基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对金红片中化学成分进行成分鉴定,建立UPLC-MS/MS法测定口服给药后不同时间点主要活性成分的血药浓度,比较其在正常大鼠体内和慢性浅表性胃炎模型大鼠体内药代动力学特征的差异。方法:构建慢性浅表性胃炎大鼠模型,正常组与模型组大鼠各6只,灌胃给予金红片混悬液(mg·kg^(-1)),眼内眦取血,采用UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆样品中延胡索甲素、延胡索乙素和莽草酸含量,使用DAS 2.0软件计算主要药动学参数。结果:金红片鉴定出54个化学成分,延胡索甲素、延胡索乙素和莽草酸在各自范围线性关系良好(r>0.9912);3个成分的日内、日间精密度在0.86%~7.8%;提取回收率在77.9%~110.6%,基质效应在92.2%~106.2%;在室温条件下存放12 h,4℃冷藏24 h,-80℃冻融3次的稳定性试验的RSD均<8.6%,符合生物样品分析要求。主要药动学参数:模型组大鼠延胡索甲素的Cmax、AUC0-t高于正常组(P<0.01,P<0.05),延胡索乙素的Cmax、AUC0-t也高于正常组(P<0.01,P<0.01),莽草酸的Cmax、AUC0-t低于正常组,T1/2、MRT长于正常组。结论:金红片在正常大鼠体内和慢性浅表性胃炎模型大鼠体内药代动力学行为存在差异,这是由于病理状态会引起体内环境的变化,对药物有效成分的吸收和代谢发生了变化。

锦红片联合西医常规疗法治疗急性腹腔感染脓毒症的临床观察

目的:观察锦红片联合西医常规疗法治疗急性腹腔感染脓毒症的临床疗效。方法:将62例急性腹腔感染脓毒症患者随机分为治疗组和对照组,每组31例。对照组在西医常规疗法的基础上加用锦红片安慰剂,治疗组在西医常规疗法的基础上加用锦红片。治疗14 d后,观察两组临床疗效,比较中医证候积分、急性生理与慢性健康(APACHE)Ⅱ评分、实验室指标的变化情况及并发症的发生率、病死率。结果:①治疗组、对照组并发症发生率分别为3.2%、35.5%,病死率分别为0.0%、19.4%,治疗组并发症发生率、病死率均低于对照组(P<0.05)。②治疗组、对照组总有效率分别为96.8%、64.5%,治疗组临床疗效优于对照组(P<0.05)。③治疗前后组内比较,治疗组中医证候总积分及各分项积分均降低(P<0.05),对照组发热、腹胀、气促、烦躁、排便不畅积分及中医证候总积分降低(P<0.05);组间治疗后比较,治疗组中医证候总积分及各分项积分低于对照组(P<0.05)。④治疗前后组内比较,治疗组APACHEⅡ评分降低(P<0.05),对照组APACHEⅡ评分差异无统计学意义(P>0.05);组间治疗后比较,治疗组APACHEⅡ评分低于对照组(P<0.05)。⑤治疗前后组内比较,治疗组白细胞计数(WBC)及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-2(IL-2)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)水平均降低(P<0.05),对照组WBC、TNF-α、CRP、PCT水平降低(P<0.05);组间治疗后比较,治疗组WBC、TNF-α、IL-2、CRP、PCT水平均低于对照组(P<0.05)。结论:与单纯西医常规疗法相比,加用锦红片有利于提高急性腹腔感染患者的临床疗效,改善患者的临床症状,减少并发症的发生,降低病死率;其机制可能与改善患者的急性炎症状态有关。

UPLC-TQ-MS同时测定金红片中12个成分

目的采用超高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱(UPLC-TQ-MS)技术建立了同时快速测定金红片(Jinhong Tablets)中12个成分(莽草酸、绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C、普洛托品、别隐品碱、延胡索乙素、紫堇碱、巴马汀、槲皮素、异川楝素、川楝素)的定量分析方法。方法采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.3mL/min;采用多反应监测模式同时对金红片中12个成分进行定量分析。结果在17 min内完成12个成分的准确定量;12个定量成分的线性范围分别为50.00~6 400.00μg/mL(r=0.999 1)、2.28~292.00μg/mL(r=0.999 9)、0.82~104.80μg/mL(r=0.999 8)、1.56~200.00μg/mL(r=0.999 7)、0.91~116.00μg/mL(r=0.999 0)、0.94~120.00μg/mL(r=0.999 0)、9.38~1 200.00μg/mL(r=0.997 4)、2.93~375.00μg/mL(r=0.999 0)、1.25~160.00μg/mL(r=0.999 9)、31.25~4 000.00μg/mL(r=0.999 7)、0.93~120.90μg/mL(r=0.999 8)、1.41~180.70μg/mL(r=0.999 7),平均加样回收率分别为101.9%、101.2%、97.9%、96.8%、100.8%、100.1%、108.7%、100.0%、99.2%、102.0%、99.0%、103.2%,15批金红片中12个成分的质量分数分别为10.11~22.72 mg/g、0.16~0.43 mg/g、0.06~0.23 mg/g、0.13~0.42 mg/g、0.08~0.26 mg/g、0.08~0.25 mg/g、1.94~2.59 mg/g、0.20~0.96 mg/g、0.07~0.30 mg/g、1.72~2.14mg/g、0.03~0.06mg/g、0.03~0.06mg/g。结论采用UPLC-TQ-MS所建立的多指标成分定量分析方法可适用于金红片中不同结构类型成分的同时检测,该方法简单、灵敏度高、专属性好,为金红片的整体质量控制研究提供参考和借鉴。