重组人Jo-1抗原的表达、纯化以及免疫特异性检测

目的表达纯化重组人Jo-1抗原,免疫印迹和ELISA检测其免疫特异性。方法IPTG诱导含有Jo-1基因的重组菌,获得高表达的可溶性融合蛋白(MBP-Jo-1),亲和层析纯化该表达蛋白,免疫印迹和ELISA分别检测其抗原性并与生化提取的Jo-1抗原比对。结果表达的重组Jo-1蛋白具有Jo-1抗原的特异性。结论重组Jo-1蛋白与天然Jo- 1抗原具有相同的免疫原性和免疫原特异性。

Jo-1抗原的质谱分析

目的制备纯化的Jo-1抗原,进一步研究Jo-1/抗Jo-1系统的本质。方法从兔胸腺中提取粗制Jo-1抗原后经亲和层析纯化,采用液相色谱-电喷雾离子阱质谱分析肽谱和各肽段的氨基酸序列,经数据库检索鉴定Jo-1抗原的生化性质。结果用液相色谱-电喷雾离子阱质谱对Jo-1抗原进行分析,发现得分较高的有谷氨酰-tRNA合成酶和酪氨酰-tRNA合成酶。结论谷氨酰-tRNA合成酶和酪氨酰-tRNA合成酶有可能是Jo-1抗原的不同亚型。

人自身抗原Jo-1的基因克隆和原核表达

Jo-1抗原是组氨酰-tRNA合成酶（HARS）基因的表达产物。与多发性肌炎／皮肌炎（PM／DM）的发病机理有关。应用RT—PCR技术，我们在国内首次克隆表达成功人自身抗原Jo-1，为下一步建立以多种基因重组自身抗原为配体的自身抗体金标快速检测方法奠定了基础。