Jr(a-)稀有血型ABCG2^(*) 376T等位基因高分辨熔解曲线检测方法的建立及分布频率研究

目的 建立针对Jr(a-)稀有血型ABCG2^(*)376T等位基因的高通量分子检测方法,并将其应用于中国人群该等位基因的分布频率研究。方法 设计针对ABCG2基因376位点的特异性引物,利用前期已获得的携带ABCG2^(*)376T等位基因的纯合子和杂合子标本作为阳性对照,不携带该突变的野生型标本作为阴性对照,建立该等位基因的高分辨熔解曲线(HRM)检测方法。应用建立的方法对广州地区献血人群的DNA标本进行筛查,对筛查出携带ABCG2^(*)376T等位基因的标本进行测序确证,以验证HRM方法的准确性。结果 成功建立可检测ABCG2^(*)376T等位基因,并可同时对纯合子及杂合子进行准确分型的HRM方法,在1 560例广州地区献血者中筛查出携带杂合型等位基因个体15例,尚未筛查出携带纯合型等位基因的个体。结论 HRM方法可用于准确筛查ABCG2^(*)376T等位基因并进行分型,该等位基因在中国人群的分布频率约为0.48%(15/3120)。

Junior血型基因检测技术的建立与1例部分DVI.3型且Jr(a-)稀有血型的鉴定

目的建立Junior血型基因分型技术,用于Jr(a-)稀有血型的鉴定和筛查。方法选取2021年1月至2021年5月于深圳市血液中心无偿献血的O型RhD+健康受试者(n=1568)和1个疑难交叉配血家系(n=3),共1571例,为研究对象。用血清学检测技术进行先证者血型鉴定、意外抗体鉴定以及抗体效价测定。用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术进行先证者RHD基因分型。建立ABCG2基因编码区测序和PCR-SSP基因分型技术,对先证者及其家系成员进行基因型检测,并在深圳地区无偿献血者人群(n=1568)中开展Jra抗原阴性的稀有血型献血者筛查。结果先证者ABO血型为B型,RhD血型为部分D(RHD*DVI.3/RHD*01N.01),Junior血型Jra抗原为阴性,血浆存在抗-D合并抗-Jra。ABCG2基因测序发现先证者等位基因型为ABGG2*01N.01/ABGG2*01N.01[c.376C>T(p.Gln126X)纯合变异],为亚洲人群中最常见的Jr(a-)血型等位基因。在深圳地区无偿献血者人群中进行筛查,无Jr(a-)稀有血型献血者检出。通过杂合子的统计分析,发现ABCG2*01N.01(c.376T)的等位基因型频率约为0.45%,这一分子背景的Jr(a-)稀有血型在深圳地区的出现频率约为0.2‰。结论本研究发现国内首例部分DVI.3型且Jr(a-)稀有血型,并成功建立Junior血型ABCG2基因编码区测序以及PCR-SSP基因分型技术。

Jr(a-)孕妇产生抗-Jr^(a)的鉴定及分子遗传学分析——附报道1例

目的对1例无输血史但产生高频抗体的孕妇进行抗体特异性鉴定。方法采用盐水试管法鉴定ABO、RhD血型抗原;采用盐水和间接抗球蛋白方法(微柱凝胶卡)进行抗体筛选及抗体鉴定检测;采用菠萝酶、胰酶和抗胰蛋白酶处理过的抗体鉴定细胞进行进一步的抗体鉴定检测;对患者血清进行抗体效价测定;提取DNA标本,对ABCG2基因的16个外显子进行PCR扩增及测序分析。结果患者血型为B型,RhD阳性;血清与抗筛细胞以及抗体鉴定细胞盐水介质反应阴性,抗球蛋白介质反应阳性(均为2+),自身对照为阴性;与菠萝酶处理后细胞反应增强(4+),与胰酶和抗胰蛋白酶处理后细胞反应强度不变(2+)。患者血清IgG抗体效价为1∶2。ABCG2基因测序发现其外显子4存在纯合无义突变(c.376C>T,p.Gln126X)。结论结合血清学与基因分型结果,确定患者为Jr(a-)稀有血型个体,由于母婴不合孕产而导致母体产生了抗-Jr^(a)。

应用全基因组测序技术鉴定1例Jr(a-)稀有血型

患者, 产妇, 生育史为G2P2, 因血清与谱细胞呈全凝集反应而进行红细胞血型鉴定。血清学方法检测结果显示产妇为O型, RhD表型为CcDEe, 其血清与26个O型谱细胞反应凝集强度均为2+。全基因组测序在编码红细胞血型抗原的50个基因中获得4 014个SNP和958个INDEL位点数据, 仅编号rs72552713的SNP位点预测为高度有害变异。该SNP位点是编码JR血型抗原的ABCG2基因c.376C>T变异, 导致提前形成终止密码(p.Gln126Ter), c.376C>T变异已被国际输血协会红细胞免疫遗传学与血型术语工作小组命名为ABCG2*01N.01。结果发现产妇为稀有Jr(a-)表型, 提示全基因组测序技术可对稀有疑难血型标本进行准确红细胞血型鉴定。