艾灸对偏头痛大鼠血清5-HT、ET-1与脑干c-fos、c-jun蛋白表达的影响

目的观察艾灸风池穴对偏头痛大鼠血清5-羟色胺(5-HT)、内皮素-1(ET-1)水平及脑干组织中癌基因fos(c-fos)、癌基因jun(c-jun)表达的影响,探讨艾灸治疗偏头痛的可能机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、艾灸治疗组和艾灸预防+治疗组,每组10只。除空白组外,其余组大鼠均采用颈背部皮下注射硝酸甘油方法制备偏头痛模型。艾灸预防+治疗组于造模前7 d(连续7 d)及造模后30 min艾灸双侧风池穴,每日1次,每次30 min;艾灸治疗组于造模后30 min艾灸双侧风池穴1次,持续30 min。记录大鼠造模前及造模后0~30 min、60~90 min、90~120 min的挠头次数;测量造模前、造模结束后、造模后60 min大鼠头面部机械痛阈值;造模结束4 h后,采用酶联免疫吸附法测定血清5-HT和ET-1水平,Western blot法检测脑干组织中c-fos和c-jun蛋白表达情况。结果模型组大鼠造模后0~30 min、60~90 min、90~120 min的挠头次数均明显高于空白组(P均<0.05),艾灸治疗组、艾灸预防+治疗组大鼠造模后60~90 min、90~120 min的挠头次数均明显少于模型组(P均<0.05)。造模结束后,模型组、艾灸治疗组、艾灸预防+治疗组大鼠头面部机械痛阈值均明显低于空白组(P均<0.05);造模后60 min,艾灸治疗组、艾灸预防+治疗组大鼠头面部机械痛阈值均明显高于模型组(P均<0.05),艾灸治疗组与艾灸预防+治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠血清5-HT水平明显低于空白组(P<0.05),血清ET-1水平及脑干组织中c-fos、c-jun蛋白相对表达量均明显高于空白组(P均<0.05);艾灸治疗组、艾灸预防+治疗组大鼠血清5-HT水平均明显高于模型组(P均<0.05),血清ET-1水平及脑干组织中c-fos、c-jun蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05);艾灸预防+治疗组大鼠血清ET-1水平及脑干组织中c-fos、c-jun蛋白相对表达量均明显低于艾灸治疗组(P均<0.05)。结论艾灸风池穴可明显缓解大鼠偏头痛,且早期介入效果更显著,其机制可能与调节血管舒缩相关的血管活性物质表达和下调c-fos、c-jun蛋白表达而抑制三叉神经血管系统激活有关。

曲马多对坐骨神经痛大鼠脊髓c-jun、c-fos表达及星形胶质细胞活化的影响

目的 探究曲马多对坐骨神经痛大鼠脊髓组织中Jun原癌基因蛋白(c-jun)、fos原癌基因蛋白(c-fos)表达及对星形胶质细胞活化的影响。方法 采用腰椎间孔外口植入髓核法建立SD大鼠坐骨神经痛模型,随机分为模型组、曲马多低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(30 mg/kg)剂量组、阳性对照组(吲哚美辛,7.5 mg/kg),每组10只,另设置假手术组10只(自体髓核不植入神经部位),于造模后3 d开始给药,1次/d。给药14 d后,观察大鼠一般行为活动;检测机械缩足痛敏阈值(PWT)及热辐射刺激缩爪反应潜伏期(PWL);酶联免疫吸附法(ELISA)检测疼痛标志物前列腺素(PG)E2、P物质(SP)水平;苏木素-伊红(HE)染色检测脊髓病理形态变化;免疫组化法检测脊髓星形胶质细胞活化标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达;Western印迹法检测脊髓c-fos、c-jun、活化蛋白(AP)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶(COX)-2表达。结果 与假手术组相比,模型组大鼠活动量降低并出现易激惹行为,神经纤维紊乱及坏死严重,PWT、PWL显著降低(P<0.05),血清PGE2、SP水平、脊髓GFAP、TNF-α、IL-1β、c-fos、c-jun、AP-1、iNOS、COX-2表达水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,曲马多各剂量组大鼠易激惹行为减少,神经纤维病理损伤减轻,PWT、PWL显著升高(P<0.05),血清PGE2、SP水平、脊髓组织GFAP、TNF-α、IL-1β、c-fos、c-jun、AP-1、iNOS、COX-2表达水平均显著降低(P<0.05);阳性对照组与曲马多高剂量组的上述各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 曲马多可通过抑制c-jun/c-fos通路激活,抑制星形胶质细胞活化,缓解坐骨神经痛模型大鼠神经炎症损伤及疼痛症状。

豌豆蚜Jun蛋白的原核表达与抗体制备

对豌豆蚜Jun蛋白进行原核表达进而进行抗体制备,可为探究JNK通路对靶基因的调控机制奠定材料基础。本研究提取豌豆蚜的总RNA,经反转录、PCR扩增后进行原核表达与抗体制备,并用ELASA法测定其抗血清效价、Western-Blot法检测抗体特异性。结果表明:本文所构建的pET-28a-SUMO表达载体能在大肠杆菌体内成功表达出Jun蛋白,并通过免疫兔子成功制备了多克隆抗体,其抗血清效价良好、抗体特异性较好。本研究成功表达出豌豆蚜Jun蛋白,并成功制备出抗体,可用于下步试验,对进一步探究JNK通路对靶基因的调控机制具有重要意义。

基于生物信息学及动物实验对芪黄固肾通络方治疗糖尿病肾病的研究

目的:探讨芪黄固肾通络方治疗糖尿病肾病(DKD)的作用机制。方法:通过人类基因数据库(GeneCards)、治疗靶点数据库(TTD)、人类疾病相关基因和突变基因数据库(DisGeNET)、综合性药物数据库(DrugBank)等数据库查找芪黄固肾通络方的活性成分、作用靶点、DKD相关的靶点。将药物目标点与病变靶点进行映射,将所获得的交集目标点构造蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络与活性组分-联合目标网络,并进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。通过动物实验对网络药理学结果中芪黄固肾通络方治疗糖尿病肾病核心靶点中富集节点较多的前3靶点进行验证。选取C57BL/6J小鼠为研究对象,链脲佐菌素(STZ)连续2次腹腔注射制备动物模型,8周后测小鼠24 h尿蛋白定量,分为正常组、模型组、模型+芪黄固肾通络方组,干预8周后,测胰岛素、C肽、尿素氮、24 h尿蛋白定量,qPCR及蛋白质印迹法(Western Blotting)检测小鼠肾脏CTNNB1、JUN、NCOA1表达。结果:GO与KEGG富集分析显示芪黄固肾通络方治疗DKD的有效靶点主要涉及晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)信号通路、血脂和动脉粥样硬化、流体剪切应力与动脉粥样硬化、神经活性配体-受体交互作用等;动物实验表明,芪黄固肾通络方能够降低DKD小鼠肾组织中连环蛋白β1(CTNNB1)、JUN、核受体辅激活蛋白1(NCOA1)的信使核糖核酸(mRNA)及蛋白表达,改善肾脏损伤。结论:通过网络药理学和实验验证,发现芪黄固肾通络方可能通过降低CTNNB1、JUN、NCOA1蛋白的表达水平干预AGE-RAGE等通路治疗DKD。

c-Jun和CBP在槲皮素抑制前列腺癌中的作用

目的探讨槲皮素抑制前列腺癌的作用机制。方法应用蛋白印迹技术检查槲皮素(quercetin)对雄激素受体(androgen receptor,AR)的辅调节因子c-Jun和cAMP应答元件结合蛋白的结合蛋白[cAMP response elem entb ind ing prote in(CREB)-b ind ing prote in,CBP]蛋白表达的影响;利用细胞转染技术检测c-Jun和CBP对AR功能的影响;免疫沉淀技术检验c-Jun与AR的蛋白-蛋白相互作用。结果槲皮素能够明显诱导c-Jun的高表达,高表达的c-Jun能够抑制AR的功能。槲皮素对CBP的蛋白表达水平无明显影响,而增加CBP的表达并不能逆转槲皮素对AR功能的抑制作用。免疫沉淀结果表明,c-Jun与AR存在蛋白-蛋白相互作用。结论槲皮素抑制前列腺癌的机制可能是通过c-Jun与AR的蛋白相互作用,而不是通过c-Jun竞争结合AR的辅激活因子CBP来实现的。

丹参酮ⅡA对AngⅡ诱导的心肌肥大中c-fos、c-myc和c-jun mRNA表达的影响

目的在原代培养的新生大鼠心肌细胞上，观察丹参酮ⅡA（tanshinoneⅡ，TSN）对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡA，AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的影响。方法实验用新生大鼠，差数贴壁法体外分离培养大鼠心肌细胞。用血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大，丹参酮ⅡA和缬沙坦（valsartan）进行干预；采用相差显微镜测量细胞大小；测定心肌细胞^3H-亮氨酸参入作为心肌细胞肥大的指标；用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）检测心肌细胞原癌基因c—fos、c—myc和c-jun mRNA的表达；MTT法检测细胞活力。结果用MTT法检测发现，培养的心肌细胞中加入TSN（5～80μmol·L^-1），24h后会产生微弱的细胞毒性，但心肌细胞单层在TSN存在的情况下可以继续同步收缩。在AngⅡ持续作用7d后，血管紧张素Ⅱ组心肌细胞直径增大（28．5±3．8）μm，与对照组（19．8±1．9）μm相比差异有显著性（P〈0．05）；TSN抑制AngⅡ介导的心肌细胞直径增大（21．3±2．5）μm，与AngⅡ组相比差异有显著性（P〈0．05），AngⅡ作用24h后，心肌细胞合成速率AngⅡ组（1900±100）cpm较对照组（1205±129）cpm明显增加（P〈0．01），TSN和valsartan本身对心肌细胞蛋白质的合成没有影响，但均能抑制AngⅡ刺激的心肌细胞蛋白质合成速率的增加（P〈0．01）。在培养液中加入AngⅡ作用30min后，c-los、c-myc和c-jun mRNA的表达明显增强（P〈0．01），预先加入TSN或valsartan作用30min，可阻断AngⅡ的作用（P〈0．01），而TSN和valsartan本身对原癌基因c-los、c—myc和c-jun mRNA的表达无影响。结论TSN可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大，这可能与其抑制了原癌基因c—fos、c—myc和c-jun的表达有关。

c-Jun氨基末端激酶在慢性低O_2高CO_2大鼠海马损伤中的作用

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)在慢性低O2高CO2大鼠海马损伤中的作用。方法:采用慢性低O2高CO2肺动脉高压大鼠模型。30只SD大鼠随机分为正常对照(NC)组、低O2高CO22周(2WH)组和低O2高CO24周(4WH)组,每组10只。Morris水迷宫检测行为学,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)动态观察海马p-JNKmRNA的转录情况,免疫组织化学法测定p-JNK在海马CA1/CA3区的变化,TUNEL法检测海马CA1/CA3区神经细胞凋亡。结果:与NC组相比,低O2高CO22WH、4WH组大鼠寻找站台的平均逃避潜伏期延长、游泳总距离增加(P<0.01或P<0.05),且4WH组比2WH组潜伏期延长及游泳总距离增加更加明显(P<0.05);NC组大鼠海马仅见少量JNKmRNA及蛋白表达,低O2高CO2各组较NC组JNK表达明显增加(P<0.01或P<0.05),且4WH组比2WH组增加更明显(P<0.05)。低O2高CO22WH、4WH组的TUNEL阳性细胞数均明显多于NC组(P<0.01或P<0.05),且4WH组比2WH组增多明显(P<0.01)。结论:低O2高CO2能导致大鼠学习记忆障碍,可能与激活海马神经细胞内JNK有关。

Fos蛋白和Jun蛋白在犬颅脑枪弹伤局部脑组织的表达

目的 研究犬颅脑枪弹伤后脑神经元早期快反应基因c fos和c jun表达产物Fos蛋白和Jun蛋白的变化规律。方法 2 0只杂种犬 ,随机分为正常对照组、损伤组。以德国小口径步枪子弹致犬颅脑贯通伤 (PCI)模型为对象 ,采用免疫组化法检测脑组织伤后 30min、2h、6h弹道挫伤区、震荡区及脑干神经元中Fos和Jun蛋白的表达。结果 对照组脑皮质神经元中Fos和Jun蛋白弱表达 ,弹道挫伤区、震荡区及脑干神经元中Fos和Jun蛋白表达于伤后 30min开始增加 ,2h达到高峰 ,6h逐渐下降。且Fos和Jun蛋白表达在弹道震荡区较挫伤区更为明显 (P <0 .0 5 )。结论 Fos蛋白和Jun蛋白在弹道挫伤区、震荡区及脑干神经元均有表达 ,c jun在脑组织内表达的分布范围及变化趋势与c fos基本一致 ,其表达是对损伤刺激的早期反应 ,可能是由Leao播散性抑制引起 ,并与细胞内外信号转导和细胞凋亡有关。

铅对大鼠脑细胞凋亡的诱发作用及对fos、jun、p53基因和一氧化氮合酶表达的影响

背景与目的通过对醋酸铅诱导大鼠脑细胞凋亡及对fos、jun、P53基因和一氧化氮合酶表达的影响,进一步揭示铅的神经毒作用机制。材料与方法成年SD大鼠经腹腔注射醋酸铅染毒,分别用原位末端标记法观测细胞凋亡,用SP法测定脑组织中fos、jun、P53及nNOS和iNOS的蛋白表达情况。结果25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg剂量染铅组大鼠海马、皮层组织凋亡细胞数量明显增加,并和染铅剂量有良好的剂量效应关系;大鼠脑组织海马、皮层fos、jun、P53、iNOS表达阳性细胞数显著增加,表达强度有升高趋势;各剂量染铅组海马组织中nNOS表达明显升高,而皮层组织nNOS表达无明显变化;相关分析表明,铅诱导的神经细胞凋亡与fos、jun、P53及iNOS的表达呈正相关。结论在铅诱导神经细胞凋亡的过程中,高表达的NOS使得NO生成过多进而引起DNA损伤,激活P53,同时使fos、jun表达增加也可激活P53,启动凋亡过程,诱导细胞发生凋亡。

增生性瘢痕中磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶和c-Jun蛋白的表达特征及其与瘢痕形成的关系

目的 观察磷酸化 P38丝裂原活化蛋白激酶 (P38MAPK)和 c- Jun蛋白在增生性瘢痕组织中的表达特征及其影响瘢痕形成和成熟的机制。 方法 取 16例住院的增生性瘢痕患者的瘢痕组织 ,并将其分为生长活跃期组(形成时间在 1年以内 ,含 1年者 )、生长稳定期组 ,每组各 8例 ;另取正常皮肤 8例。所有取材均未经任何治疗。用免疫组织化学方法和常规病理技术检测磷酸化 P38MAPK和 c- Jun两种蛋白 ,在增生性瘢痕组织和正常皮肤组织中的表达和分布规律。 结果 正常皮肤组织中 ,磷酸化 P38MAPK主要分布于表皮基底层细胞的胞浆和胞核内 ,c- Jun蛋白则主要定位于表皮细胞和内皮细胞中 ,两种蛋白的阳性细胞率分别为 2 1.3%± 3.6 %和 33.4 %± 3.5 %。在处于生长活跃期的增生性瘢痕组织中 ,磷酸化 P38MAPK和 c- Jun的阳性信号主要定位于表皮细胞和部分成纤维细胞内 ,阳性细胞率分别上升至 6 9.5 %± 3.3%和 5 9.6 %± 4 .3% ,明显高于正常皮肤组织 (P<0 .0 1) ;而在成熟稳定的增生性瘢痕中 ,两种蛋白表达有所下降 ,但仍高于正常皮肤组织。 结论 增生性瘢痕的形成和成熟可能与激活 P38MAPK信号传递通路 ,影响c- Jun蛋白表达有关。

补阳还五汤对大鼠脑缺血后蛋白激酶B1和c—Jun氨基末端激酶1／2表达的影响

目的探讨补阳还五汤对脑缺血后大鼠蛋白激酶B1（AKT1）和c-Jun氨基末端激酶1/2（JNK1/2）的影响。方法将48只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组、补阳还五汤组，每组12只。采用大脑中动脉闭塞法（MCAO）建立右侧局灶性脑缺血大鼠模型。补阳还五汤组大鼠于术后2h起灌服补阳还五汤（主要由生黄芪120g、当归6g、赤芍4.5g、川芎3g、西红花3g、桃仁3g、广地龙3g组成）14.2 g/kg，每日1次，连续7 d。其他各组动物均给予等体积生理盐水。于第7日处死大鼠，取脑组织，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定AKT1 mRNA表达，采用免疫组化法检测JNK1/2蛋白表达。结果与正常对照组和假手术组比较，模型组AKT1 mRNA表达量〔吸光度（A）值〕明显降低（0.48±0.08比0.63±0.11、0.61±0.09，均P＜0.05），JNK1/2阳性细胞数（个/mm2）明显增多（34.13±4.57比16.15±1.09、16.23±2.05，均P＜0.05）；与模型组比较，补阳还五汤组脑组织中AKT1 mRNA表达（0.93±0.11）和JNK1/2阳性细胞数（45.04±5.68）明显增加，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。结论补阳还五汤可上调缺血脑组织AKT1 mRNA和JNK1/2阳性细胞数表达，是其脑保护作用机制之一。

人参皂苷Rg1对MPTP所致亚急性帕金森病模型小鼠中脑黒质p-c-Jun与COX-2表达的影响

本文研究了人参皂苷Rg1(Ginsenoside Rg1,Rg1)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetra-hydropyridine,MPTP)所致亚急性Parkinson病(PD)模型小鼠中脑黒质磷酸化c-Jun(p-c-Jun)与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响,以期探讨Rg1保护PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元可能的分子机制。实验采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型。通过行为学观察,免疫组织化学SP法和免疫蛋白印迹法,观察PD模型小鼠行为学变化,中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、COX-2和p-c-Jun表达水平的变化,并观察给予人参皂苷Rg1对上述变化的影响。结果显示,模型小鼠出现典型PD样症状。与对照组小鼠相比,黑质区TH阳性神经元数下降约65%(P<0.001),TH表达水平显著降低约75%;黑质区COX-2阳性细胞明显增多,p-c-Jun特异性表达于黑质区细胞核内,且COX-2与p-c-Jun表达水平均明显升高。经Rg1(10mg/kg)处理后,模型小鼠PD样症状减轻,与对照组比较,在MPTP第5次注射后7d,TH阳性细胞数和TH表达水平仅下降约15%和20%;与模型组比较,黑质区COX-2阳性细胞明显减少,p-c-Jun主要表达于细胞浆,部分表达于细胞核,表达水平也明显降低。以上实验结果表明,人参皂苷Rg1对MPTP诱导的亚急性Parkinson病小鼠中脑黑质细胞的神经保护作用可能是通过阻抑p-c-Jun核内表达,从而减弱COX-2表达及其介导的黒质区炎症反应。

预处理对缺血再灌注心肌细胞即刻早期基因c-fos、c-jun表达的调控

为探讨即刻早期基因在预处理中的作用机制 ,将培养心肌细胞分别经短暂缺血及佛波酯、去甲肾上腺素、腺苷预处理 ,行模拟缺血再灌注 ,采用Northern杂交技术对心肌细胞c fos、c junmRNA含量进行检测。结果发现 ,缺血预处理组c fos、c junmRNA明显上升 ,其他药物预处理组c fos、c jun基因均有不同程度的表达增强 ,H7能明显抑制预处理对c fos、c junmRNA的诱导。表明预处理可能通过激活PKC ,进而诱导c fos、c jun基因的转录表达增强 。

反义c-jun表达质粒对血管平滑肌细胞表型转化标志的影响

为研究c jun反义RNA对血管平滑肌细胞表型转化的影响 ,本文应用可表达c jun反义RNA的真核细胞表达载体转染大鼠血管平滑肌细胞 ,采用Northern印迹、Western印迹和氚标胸腺嘧啶核苷掺入实验 ,观察反义c jun对血管平滑肌细胞表型标志基因平滑肌α 肌动蛋白、平滑肌胚胎型肌球蛋白重链和骨桥蛋白表达和DNA合成的影响。结果发现 ,在血管平滑肌细胞中表达的c jun反义RNA可使血管平滑肌细胞去分化标志基因平滑肌胚胎型肌球蛋白重链和骨桥蛋白mRNA表达较对照分别下降 5 0 %和 95 % ,骨桥蛋白水平较对照下降 75 % ,同时血管平滑肌细胞的DNA合成受到显著抑制 ,实验组氚标胸腺嘧啶核苷掺入值较对照降低 37%。c jun反义RNA对血管平滑肌细胞分化标志基因平滑肌α 肌动蛋白的表达无明显影响。提示c jun基因表达产物在维持血管平滑肌细胞于去分化状态中起重要作用。

全脑缺血再灌注损伤后JUN蛋白在大鼠海马的表达及热休克预处理对其表达的影响

目的研究全脑缺血再灌注损伤后JUN蛋白在大鼠海马的表达及热休克预处理对其表达的影响。方法以四血管法建立全脑缺血再灌注模型。将大鼠置于42℃中15 min行热休克预处理,全脑缺血6 min后行2 h、6 h、12 h、24 h3、d、5 d再灌注后处死,取海马脑组织行HE染色、JUN蛋白免疫组化染色,TUNEL法检测凋亡细胞。结果缺血再灌注后2 h JUN蛋白在CA1区开始表达,6 h达到高峰,5 d时仍有表达;CA3区JUN蛋白的表达弱于CA1区(P<0.05);同时CA1区细胞损伤明显。热休克预处理组JUN蛋白表达在CA1和CA3区相应时点减弱(P<0.05),细胞损伤轻微,凋亡细胞减少(P<0.05)。结论全脑缺血再灌注损伤后JUN蛋白过度表达参与了神经元损伤过程,热休克预处理通过下调JUN蛋白过度表达具有脑保护作用。

绞股蓝总皂苷对光老化HaCaT细胞中p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达的抑制作用

目的:观察绞股蓝总皂苷含药血清对光老化HaCaT细胞p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白和Jun基因(c-Jun)mRNA表达的影响,探讨绞股蓝总皂苷含药血清抗皮肤光老化的作用机制。方法:采用中波紫外线(UVB)照射建立光老化HaCaT细胞模型,加低、中、高剂量绞股蓝总皂苷含药血清于光老化HaCaT细胞模型培养液中培养,并设空白对照组、空白血清组和UVB模型组。采用Western blotting和RT-PCR方法检测各组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA的表达水平。结果:与空白对照组比较,UVB模型组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达显著上调,差异有统计学意义(P<0.01);与UVB模型组比较,低、中和高剂量含药血清组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.01);与空白血清组比较,低、中和高剂量含药血清组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达下降(P<0.01)。结论:绞股蓝总皂苷含药血清可能通过抑制p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达抑制皮肤光老化。

黄芪对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及JUN蛋白表达的影响

目的观察黄芪对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及其相关基因JUN蛋白表达的影响,探讨其对脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法分别采用TUNEL及免疫组织化学与医学图像分析相结合的方法检测大鼠脑组织神经细胞凋亡及JUN蛋白的表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠脑组织神经细胞凋亡数目及JUN蛋白表达增多;与模型组相比,黄芪组大鼠脑组织神经细胞凋亡数目及JUN蛋白表达减少。结论黄芪可通过抑制脑缺血再灌注后神经细胞凋亡而发挥脑保护作用,其抗凋亡机制可能与下调JUN蛋白的表达有关。

雏鸡左眼视剥夺不同时程后记忆形成过程与脑内Jun样蛋白表达差异的研究

本实验采用一次性味觉厌恶回避学习，研究２日龄雏鸡左眼视剥夺２４小时后的记忆形成过程，并与左眼视剥夺２小时后的记忆形成过程进行比较，同时利用免疫组化技术，观察并比较单眼视剥夺不同时程及单眼学习后Ｊｕｎ样蛋白在雏鸡脑内不同区域（ＨＶ和ＬＰＯ）的表达。结果表明：１．视剥夺左眼２４小时后对雏鸡的短时记忆、中时记忆和长时记忆均无明显影响，但中时记忆保持水平略低于双眼学习条件下的中时记忆保持水平。这与视剥夺２小时后的记忆形成过程有明显不同；２．视剥夺左眼２小时、２４小时可使Ｊｕｎ样蛋白的表达随剥夺时间变长而显著增高；３．视剥夺左眼２小时、２４小时后进行学习，雏鸡脑内分别于学习后１０分钟和７０分钟观察到Ｊｕｎ样蛋白表达的明显增多。

补益营卫方、TGFβ1及bFGF对衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因表达的影响

目的:研究补益营卫方、转化生长因子β1(TGFβ1)及碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)对衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因表达的影响。方法:通过连续传代培养复制衰老人皮肤成纤维细胞模型,通过中和抗体阻断TGFβ1及b FGF后,利用荧光定量PCR法检测衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因表达。结果:人皮肤成纤维细胞衰老时,c-Jun基因表达水平24h和48h比人年轻皮肤成纤维细胞分别下降了70%和71%,72h则两者的表达水平相当。衰老人皮肤成纤维细胞补益营卫药物处理后显著提高了c-Jun基因的表达,相对于衰老人皮肤成纤维细胞,其24h、48h分别提高了4.67倍和2.12倍,而至72h其表达水平相当。中和TGF-β1蛋白后,衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因的表达水平24h和72h分别是年轻人皮肤成纤维细胞的2.4倍和1.7倍。而48h时,年轻人皮肤成纤维细胞的基因表达水平是衰老人皮肤成纤维细胞的9.2倍。衰老人皮肤成纤维细胞补益营卫药物处理后显著提高了c-Jun基因的表达,48h和72h时c-Jun基因的表达水平分别是衰老人皮肤成纤维细胞的2.3倍和1.5倍。中和TGF-β1和b FGF蛋白后,c-Jun基因的表达水平随着时间的不同被明显下调;与年轻人皮肤成纤维细胞相比,24h、48h和72h衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因的表达水平分别下降了64.5%、94.2%和73.7%。衰老人皮肤成纤维细胞补益营卫药物处理后c-Jun基因的表达随着时间的不同相对于衰老人皮肤成纤维细胞被显著上调。24h、48h和72h分别是衰老人皮肤成纤维细胞的9.7倍、3.6倍和9.8倍。纵向比较来看,TGF-β1蛋白对衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因的表达存在复杂的调节作用。b FGF蛋白对衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因表达有明显的促进作用。结论:衰老时人皮肤成纤维细胞c-Jun基因的表达紊乱。补益营卫方对衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因表达具有促进作用;其促进c-Jun基因表达存在不依赖于TGF-β1和b FGF的途径。b FGF蛋白是TGF-β1信号调节途径的下游蛋白;是c-Jun基因表达的重要促进因子。

小鼠皮肤切创愈合过程中c-jun的表达

目的探讨小鼠皮肤切创愈合过程中损伤区c-jun的表达及不同损伤时间c-jun的变化规律。方法应用免疫组织化学染色和Western印迹技术检测小鼠皮肤切创后各个时间段c-jun的表达变化情况。结果正常组织中有少量c-jun表达。伤后3～12h损伤区c-jun主要表达在中性粒细胞中,1～5dc-jun阳性细胞主要以单个核细胞和成纤维细胞为主,7～14dc-jun主要在成纤维细胞中表达。阳性细胞率3～12h逐渐增高,12h达高峰,1～5d有所下降,7d阳性细胞率达第二峰值,10～14d逐渐降低。Western印迹法检测显示各个时间段均有c-jun阳性条带,其中12h和7d为c-jun含量的2个高峰。结论小鼠皮肤切创愈合过程中c-jun在损伤区对诱导中性粒细胞、单个核细胞及成纤维细胞的凋亡可能起着重要作用,同时c-jun表达的规律性变化可用于损伤时间的推断。