盐霉素增强长春新碱诱导急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡研究

目的:本文旨在研究长春新碱(vincristine,VCR)与盐霉素(salinomycin,Sal)联合作用对急性T淋巴细胞白血病jurkat细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法:CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测各实验组细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、caspase-3和caspase-8表达水平。结果:VCR、Sal单独及联合处理Jurkat细胞株均显示出明显的增殖抑制作用,两药联合使用的增殖抑制作用更显著(P<0.05),具有协同作用。联合用药组BCL-2蛋白水平较VCR和Sal单独处理组明显减少,而caspase-3和caspase-8水平明显增高;VCR和Sal联合用药组细胞凋亡率较VCR和Sal单独处理组明显提高(P<0.05)。结论:长春新碱联合盐霉素作用于Jurkat细胞具有协同抑制增殖及诱导凋亡的作用。

华蟾素对Jurkat细胞株的体外作用和动物实验研究

目的:通过体外实验和动物实验,探索华蟾素对白血病细胞株的作用。方法:通过四氮唑蓝(MTT)比色法、Hoechst荧光染色法、原位末端标记(TUNEL)法、DNA凝胶电泳及流式细胞术(FCM)观察华蟾素对人白血病细胞株Jurkat的增殖、细胞凋亡、bcl-2表达的影响;在DBA/2小鼠的腹腔中注射L1210细胞,比较治疗组和对照组小鼠的生存期,评价药物疗效。结果:与对照组相比,1∶100～1∶25浓度的华蟾素能明显抑制Jurkat细胞生长,Hoechst荧光染色可见典型的凋亡形态学改变,TUNEL可见深棕色凋亡细胞,DNA电泳出现凋亡特有的“梯子”式条带,AnnexinV/PI双染色的FCM也证实凋亡的存在。在经1∶100、1∶50、1∶25浓度的华蟾素处理2d后,细胞凋亡率分别为18.78%、24.40%和40.29%。凋亡细胞的bcl-2表达由44.07%下调至16.30%。动物实验中,L1210白血病腹水瘤小鼠经华蟾素治疗后,生存期延长35.90%。结论:华蟾素能抑制Jurkat细胞生长并诱导凋亡,可能是通过下调bcl-2的表达来实现。动物实验证实,华蟾素能延长L1210白血病腹水瘤小鼠的生存期。

HLA-G在卵巢癌细胞株SKOV-3中表达的实验性研究

目的:检测卵巢癌细胞株SKOV-3中人白细胞抗原G(human leucocyte antigen-G,HLA-G)的表达。方法:用逆转录酶聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)、免疫细胞化学法及流式细胞术检测卵巢癌细胞株SKOV-3中HLA-G的表达,以绒毛膜癌细胞株JEG-3中HLA-G的表达为阳性对照。结果:(1)免疫细胞化学显色显示SKOV-3细胞膜及细胞浆内均有HLA-G的表达;(2)RT-PCR结果表明,SKOV-3细胞中有HLA-G mRNA表达;(3)流式细胞术结果提示,SKOV-3细胞中HLA-G阳性率是33.77%。结论:卵巢癌细胞株SKOV-3中HLA-G mRNA及HLA-G蛋白表达为阳性。

shRNA干扰Jurkat细胞株MDM2表达对细胞生物特性的影响

目的研究MDM2基因与白血病细胞生物学特性的关系。方法应用pSilencer4.1CMVneo构建MDM2shRNA表达载体pMDM2shRNA,采用脂质体将载体导入Jurkat细胞,利用G418筛选出稳定表达shRNA细胞后,行RTPCR和Westernblot等技术检测细胞MDM2表达水平、基础生长曲线、细胞周期变化以及UV照射后细胞生长变化。结果发现转染pMDM2shRNA的细胞MDM2mRNA及蛋白质的表达均下降>50%,细胞的生长减慢,出现一定程度的G1～S期阻滞,DNA损伤后细胞恢复较慢。结论MDM2基因表达下降后,可导致细胞增殖减慢以及降低损伤修复的能力;细胞内表达shRNA可长期敲低靶基因的表达,可作为较理想的基因功能研究细胞模型。

HIV-1VN Jurkat细胞株HIV-1病毒分泌动力学及培养优化的研究

目的：研究HIV-1VN Jurkat细胞株HIV-1病毒分泌动力学及新生小牛血清对细胞生长及病毒产量质量的影响。方法：通过对HIV-1VN Jurkat细胞分泌病毒的滴度、细胞活力指数、活细胞密度、病毒比分泌速率和细胞比生长速率进行观察来评价其动力学；通过对抗原纯度的变化来说明不同浓度的新生小牛血清对分泌的病毒质量的影响。结果：HIV-1VN Jurkat细胞分泌病毒的滴度与细胞活力指数、活细胞密度呈现正相关性；病毒滴度、病毒比分泌速率与细胞比生长速率不相关，随着小牛血清浓度的增加，抗原纯度有下降趋势。结论：细胞生长对数期几乎同步出现病毒分泌对数期，小牛血清浓度为9％～12％的培养基是最佳的培养条件。

STI571诱导Jurkat细胞表达HLA-DR、CD_(25)的实验研究

目的研究观察STI571(商品名格列卫)诱导Jurkat细胞株表达HLA-DR、CD-25分子的作用。方法不同浓度的STI571分别处理Jurkat细胞24h和48h后,用流式细胞仪检测细胞表达HLA-DR、CD-25的百分率。结果与空白对照相比,STI571在0.2～1.2μmol/L浓度下明显促进Jurkat细胞表达HLA-DR、CD-25分子,且诱导效应与时间相关;STI571处理48h比处理24h有更强的诱导效果。结论STI571可显著提高Jurkat细胞HLA-DR、CD-25分子表达率。

人鼻咽癌单克隆细胞株在传代移植的裸鼠体内转移与HLA表达定量的关系

为了研究人鼻咽癌单克隆细胞裸鼠体内传代转移特性及 HL A的表达变化 ,我们以人鼻咽癌单克隆细胞株 (CNE-2 Z- H5 )为对象 ,将各单克隆细胞株移植于裸鼠 ,待肿瘤发生转移后 ,取其淋巴结和肺转移灶癌细胞再次移植裸鼠 ,如此移植 2 - 4代 ,观察每代裸鼠的转移特性及鼻咽癌细胞 HL A表达的免疫组织化学定量变化。结果显示随着鼻咽癌单克隆细胞的传代移植 ,每代裸鼠肿瘤的转移率增高 (P<0 .0 1) ,转移途径更为单一。淋巴道转移的克隆细胞其 HL A 类抗原的表达随体内传代次数的增加而呈明显降低的趋势 ,与原代比较有显著性差异 (P<0 .0 1) ,但第 4代又急刷升高 (P<0 .0 1) ;HL A 类抗原的表达则呈波浪样改变 ;各代间表达平均强度变化不规则。肺转移灶癌细胞的 HL A 、 HL A 类抗原表达明显降低 ,两者与原代癌细胞比较都有显著性差异 (P<0 .0 1)。表明鼻咽癌细胞演进中转移能力和细胞本身特性、体内的环境选择关系密切 ,且可能和癌细胞 HL

Jurkat细胞株TCRγ基因重排及多重引物扩增分析

目的分析Jurkat细胞株TCRγ基因重排特点,观察多重引物PCR扩增Jurkat细胞株TCRγ基因重排的效果。方法 TCRγ基因重排正向、反向引物配对组合,分别扩增Jurkat细胞株DNA,阳性PCR产物测序并比对分析;多重引物组合、降落式PCR扩增Jurkat细胞株TCRγ基因重排,比较多重引物与单对引物扩增效果。结果两组单对引物扩增产物电泳出现强阳性条带,测序并比对证实为TCRγ基因重排;与胚系基因比对发现,重排后TCRγ基因存在删除和增加的碱基序列;多重引物扩增产物中出现阳性条带的组合,其引物与单对引物组合一致。结论 Jurkat细胞中存在两种不同的TCRγ基因重排,重排序列体现了基因重排多样性。多重引物结合降落式PCR扩增TCRγ基因重排,扩增效果与单对引物一致。

PP242对急性T细胞白血病Jurkat细胞株mTOR信号通路的影响

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of ra-pamycin，mTOR）信号通路异常与多种肿瘤的形成、细胞的恶性转化相关。乳腺癌、胃肠道间质的肿瘤、肝癌、肺癌等均发现mTOR通路的异常激活，从而降低了肿瘤对化疗、放疗的敏感性…。急性淋巴细胞白血病也存在Akt／mTOR信号通路的过度激活。

γ-射线诱导人白血病T细胞株Jurkat细胞凋亡及其机制

目的 观察γ 射线诱导p5 3基因突变的白血病细胞株Jurkat细胞凋亡的时间和剂量效应 ,以探求辐射诱发肿瘤细胞凋亡通路的分子机制。方法 分别以 5、10、2 0Gyγ 射线照射Jurkat细胞 ,于照射后继续培养 6、12、2 4、3 6、48h ,分别收获细胞。流式细胞术 (FCM )定量观察细胞凋亡的变化。采用WesternBlot法检测Jurkat细胞株p5 3基因蛋白的表达。结果 细胞受照射后 ,在一定的时间范围内 ,凋亡细胞的比例随作用时间和照射剂量的增加而增加 ,显示出较好的量效和时效关系。本实验所用的Jurkat细胞株是p5 3基因突变的细胞株 ,p5 3基因蛋白不表达。 结论 确立了γ 射线诱导Jurkat细胞凋亡时间和剂量效应关系 ,而导致凋亡的机制独立于肿瘤抑制基因 p5 3 ,这为探讨新的凋亡通路机制奠定了基础。

人PD-L1基因转染细胞株的构建及其对活化的Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的:构建稳定表达人PD-L1分子的基因转染细胞株,观察其对活化的Jurkat细胞增殖和凋亡的影响。方法:将编码人PD-L1分子的全长c DNA重组入反转录病毒表达载体p EGZ-Term-R,将重组载体p EGZ-Term-R/PD-L1和辅助病毒载体用脂质体法共转染293T细胞,包装具有感染能力的完整病毒;收集含有完整重组反转录病毒的293T细胞培养上清,感染L929细胞,筛选并获得G418抗性的基因转染细胞。采用流式细胞术检测表达PDL1的基因转染细胞,命名为L929/PD-L1。采用PHA活化T细胞系来源的细胞株Jurkat,并将其与丝裂霉素预处理的L929/PD-L1细胞共培养,用细胞计数法观察L929/PD-L1细胞株对活化的Jurkat细胞增殖能力的影响,并检测其凋亡情况。结果:成功获得了稳定表达人PD-L1基因的转染细胞株L929/PD-L1。PHA可诱导Jurkat细胞活化并表达PD-1分子;L929/PD-L1与PHA刺激后的Jurkat细胞共培养,可抑制Jurkat细胞增殖,促进其凋亡。结论:成功构建了稳定表达人PD-L1的细胞株,PD-L1分子抑制活化的Jurkat细胞增殖,促进其凋亡。

哇巴因对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的作用及机制的初步探讨

目的哇巴因是强心甾体类药物的一种,可诱导众多肿瘤细胞凋亡。观察哇巴因对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡、hTERT、c-myc mRNA及蛋白表达的影响,探讨哇巴因抗肿瘤的作用机制。方法采用不同浓度和时间的哇巴因处理Jurkat细胞株,以加入等体积的1×PBS组作为对照组,分组为:对照组、哇巴因50nmol/L 24h组、100nmol/L 24h组及50 nmol/L 48 h组、100 nmol/L 48 h组,以流式细胞术检测凋亡率;RT-PCR法检测hTERT、c-myc mRNA水平;Western blot检测hTERT、c-myc蛋白的表达。结果药物作用于Jurkat细胞株24、48 h后,对照组、50 nmol/L 24 h组、100 nmol/L 24 h组及50nmol/L 48 h组、100 nmol/L 48 h组的细胞凋亡率分别为(4.23±1.01)%、(5.67±3.71)%、(9.63±4.83)%、(19.67±4.55)%、(37.60±11.89)%,哇巴因50 nmol/L 48 h组、100 nmol/L 48 h组的凋亡率与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Jurkat细胞的hTERT、c-myc的mRNA水平较对照组显著下降了200%,其hTERT蛋白表达也较对照组下降了224%,c-myc蛋白表达较对照组下降400%(P﹤0.05),且hTERT与c-myc mRNA及蛋白表达的降低呈正相关(P﹤0.05)。结论哇巴因可诱导T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡。哇巴因也可引起hTERT、c-myc mRNA及蛋白表达的下调,这可能是哇巴因可诱导Jurkat细胞株凋亡的机理之一。

六种肿瘤细胞株BLM基因转录水平的研究

BLM基因的不同突变是导致Bloom综合征(Bloom'ssyndrome)的病因。BLM基因突变使姐妹染色单体互换率(sisterchromaticexchange,SCE)增高,细胞DNA修复功能降低,这样受损的DNA很容易随细胞分裂而传入子细胞,细胞稳定性下降。临床表现为免疫缺陷,恶性肿瘤易患体质等等。本研究对BLM基因在肿瘤细胞株和正常人中表达的差异进行研究,以期发现肿瘤新的发生机制,为寻找新的特异分子治疗靶点提供线索。应用PTPCR方法检测正常人造血细胞和六种肿瘤细胞株中BLM基因的mRNA水平,并作序列检测。结果表明,六种肿瘤细胞株均高表达BLMmRNA,但未见BLM基因结构异常,而正常人表达量很低(P<0.01)。结论:在本研究中的6种肿瘤细胞株高表达BLMmRNA,肿瘤细胞株和正常人BLMmRNA表达水平有显著差异性。BLM异常可能参与肿瘤的发生或是导致耐药的原因之一。

环磷酰胺诱导白血病细胞株凋亡及FasL、FADD基因蛋白表达

目的研究环磷酰胺(CP)诱导白血病细胞株(Jurkat)凋亡的机制,进一步探讨FasL和FADD在CP诱导白血病细胞凋亡中的作用。方法CP刺激人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat,分别培养12、24、48h,在相应的时间点收获细胞,碘化丙啶(PI)染色细胞DNA,流式细胞术(FCM)检测DNA片段的亚二倍体峰(subG1)阳性的凋亡细胞;并用WesternBlot技术测定FasL和FADD的表达。结果CP3mg/L刺激Jurkat白血病细胞12h几乎未见细胞凋亡(P>0.05),在24h也只有26.40%的细胞出现凋亡;但随着时间的延长,CP诱导细胞凋亡明显增加,到48h则有74.95%的细胞发生凋亡(P<0.01)。CP也上调FasL和FADD的表达,并随CP刺激细胞时间的延长其表达量也逐渐增加。结论CP诱导白血病细胞株Jurkat凋亡的起效时间较晚,诱导细胞DNA片段形成,上调FasL和FADD的表达,表明CP诱导白血病细胞凋亡依赖于Fas/FasL通路。

油茶皂苷通过内质网应激途径诱导Jurkat细胞凋亡的研究

目的探讨油茶皂苷在体外诱导人白血病细胞Jurkat凋亡的作用及作用机制。方法将1～4μg/mL的油茶皂苷作用于人白血病Jurkat细胞,应用细胞计数考察油茶皂苷对细胞增殖的影响;用Western blot方法分析油茶皂苷对caspase-3、PARP、Bipc、hop、Perk、ATF6和IRE1蛋白表达的影响。结果油茶皂苷(1～4μg/mL)对Jurkat细胞的增殖产生明显的剂量依赖性抑制作用。免疫印迹结果显示,油茶皂苷可以使caspase-3激活,增加Cleaved PARP的表达量,而诱导Jurkat细胞发生凋亡;其作用机制是通过下调Bip和chop的表达,触发Perk、ATF6和IRE1 3个内质网应激跨膜蛋白而产生细胞凋亡的。结论 1～4μg/mL油茶皂苷具有抑制人白血病细胞增殖和诱导其凋亡的作用,其作用机制参与了细胞凋亡的内质网应激途径。

人类染色体17p13.3位点新克隆基因HC56、HC71和HC90对Jurkat细胞活力的作用

目的 探讨人类染色体 17p13.3位点新克隆基因HC5 6、HC71和HC90对T淋巴瘤细胞株Ju rkat细胞活力的作用。方法 应用脂质体介导的基因转染方法 ,将外源基因HC5 6、HC71和HC90分别导入Jurkat细胞 ,用苔盼兰拒染试验 ,观察基因的瞬时表达对细胞活力的作用。结果 Jurkat细胞瞬时转染HC5 6和HC71基因后 ,与转染PBK/CMV空载体的实验对照组比较 ,第 2 4、4 8、72和 96h ,细胞的活力明显受抑制 (P <0 .0 1) ;Jurkat细胞瞬时转染HC90基因后 ,仅在第 96h细胞的活力受抑制 (P <0 .0 5 ) ,而第 2 4、4 8和 72h ,未发现细胞的活力受抑制 (P >0 .0 5 )。结论 外源HC5

β-连环素在白血病细胞株的异常定位研究

β-连环素是Wnt信号通路关键的信号传递子,其在细胞的异常定位引起下游靶基因的转录是多种实体肿瘤发生的原因之一。由于造血细胞缺少典型的黏着连接(adherens junction,AJ),因此对β-连环素在血液肿瘤的表达及定位并无较多的研究。本研究探讨4种常见的白血病细胞株(Daudi, Jurkat, K562和Thp-1)中β-连环素蛋白的定位及β-连环素基因mRNA的表达水平,了解血液肿瘤中是否有β-连环素蛋白的定位异常,以期发现白血病新的发生机制,为寻找新的特异治疗靶点提供线索。用免疫细胞化学法检测β-连环素在白血病细胞系中的定位,用实时定量RT-PCR法测定β-连环素mRNA表达水平。结果表明4种白血病细胞株有两种(Jurkat、Thp-1)存在β-连环素的异常定位,且β-连环素mRNA表达增高,但在Jurkat和Thp-1细胞中的β-连环素mRNA低于Daudi和K562细胞。这4种白血病细胞株中β-连环素基因的mRNA表达水平与其异常定位无相关性。结论β-连环素定位异常可能参与部分血液肿瘤的发生,引起β-连环素定位异常的机制并不是发生在转录水平。

γ-干扰素诱导Jurkat细胞表达B7.1/CD80、B7.2/CD86分子

目的研究观察γ 干扰素 (γ IFN)诱导Jurkat细胞株表达B7.1、B7.2分子的作用。方法不同浓度的γ IFN体外孵育Jurkat细胞 48h后 ,流式细胞仪检测细胞表达B7.1、B7.2的百分率。结果与对照组相比 ,γ IFN在312 .5～ 10 0 0 0u/ml浓度下有轻微提高Jurkat淋巴白血病细胞表达B7.1、B7.2分子的作用。在 2 5 0 0u/ml浓度时达到高峰 ,B7.1的表达比对照组提高 3.47% ,B7.2表达提高 2 .39% ,B7.1与B7.2双表达提高 1.85 %。结论γ IFN可轻度诱导Jurkat细胞表达B7.1、B7.

PI3K/Akt/mTOR在表阿霉素抑制Jurkat细胞增殖和诱导凋亡中的作用

目的探讨PI3K/Akt/mTOR信号通路在表阿霉素抑制人T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat细胞增殖和诱导凋亡中的作用。方法用0、1.25、2.5、5、10μmol/L表阿霉素和0、0.25、0.5、1、2μmol/L PI3K/mTOR双重抑制剂(NVP-BEZ235)对Jurkat细胞作用48h后,CCK-8试剂盒检测Jurkat细胞株增殖抑制情况;采用AnnexinⅤ/PE双染法流式细胞术检测上述药物作用Jurkat细胞48h的凋亡率以及5μmol/L表阿霉素和2μmol/L NVP-BEZ235单独及联合作用Jurkat细胞0、12、24、36、48h的凋亡率;Western blotting法检测5、10μmol/L的表阿霉素作用Jurkat细胞0、6、12、24、48h,以及5μmol/L表阿霉素与2μmol/LNVP-BEZ235单独及联合作用Jurkat细胞24、48h的PI3K/Akt/mTOR信号通路中Akt、mTOR、p70s6k等表达变化。结果表阿霉素能够抑制Jurkat细胞增殖并诱导其凋亡,且凋亡作用呈浓度依赖性,5μmol/L表阿霉素作用Jurkat细胞48h的凋亡率为57.72%。在表阿霉素诱导Jurkat细胞凋亡过程中伴随Akt、mTOR、p70s6k的表达变化,NVP-BEZ235能够降低Jurkat细胞Akt、p70s6k的磷酸化水平,显著提高表阿霉素诱导Jurkat细胞凋亡的作用,5μmol/L表阿霉素和2μmol/L NVP-BEZ235联合作用Jurkat细胞48h的凋亡率达78.31%,明显高于5μmol/L表阿霉素的57.72%。结论表阿霉素抑制Jurkat细胞增殖和诱导凋亡与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关,当该通路抑制剂与表阿霉素联用时,Jurkat细胞对于表阿霉素敏感性有一定程度的提高。

去甲斑蟊素诱导T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用及其机制

目的研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)在体外对急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞凋亡的作用及其机制。方法取对数生长期的Jurkat细胞分别加入不同浓度的NCTD和(或)10 mg/L的长春新碱(VCR),倒置显微镜下观察不同时间Jurkat细胞形态、密度及结构的变化;采用MTT比色法测定NCTD及VCR两种药物作用于细胞72 h后对细胞增殖抑制作用的影响;实时荧光定量RT-PCR法对p53及survivin基因表达量进行检测。结果 NCTD及VCR作用组细胞形态出现不规则,胀大、变形现象明显,分布稀疏,大量细胞死亡,两者在相同时间点上对细胞的影响无明显差别。MTT法检测结果表明:NCTD增殖抑制作用呈现时间-浓度依赖关系,最佳浓度及时间在20 mg/L,作用72 h时。NCTD与VCR两者对Jurkat细胞均有抑制作用(P<0.05),两者的抑制率相比无显著性差异(P>0.05),且两者联合可增加细胞增殖抑制率(P<0.05)。应用实时荧光定量RT-PCR技术定量表达p53及survivin基因,结果显示NCTD组p53基因表达较对照组细胞株明显上升(P<0.001),相反survivin基因较对照组明显下降(P<0.01)。结论(1)NCTD抑制Jurkat细胞株的增殖抑制作用具有时间-浓度依赖关系;(2)NCTD与VCR对细胞增殖均有抑制作用,两者的影响无显著性差异,且两者联合可增强对细胞的增殖抑制作用;(3)NCTD促进Jurkat细胞株细胞凋亡、抑制增殖的机制可能与上调p53基因表达量及下调survivin基因表达量有关。