高梁根质膜K^+转运蛋白在人工脂质体上的活性重组

将高粱根质膜中K^+ -ATPase活性重组入人工脂质体中 ,并研究了脂蛋白体的性质。结果表明 ,脂蛋白体中脂和蛋白质浓度与离子转运活性呈正相关 ,当其含粗提大豆磷脂且脂 /蛋白比率为 3 5时 ,其K+ 转运活性最大。

重组K^+运输蛋白转运特征研究

研究了重组脂蛋白体中 K+运输蛋白对 K+的转运特征。当外界 p H值为 7.5时 ,ATPase和 K+转运的相对活力最高。加入 10 μmol/L钒酸钠 ,抑制 5 0 % ATPase活力和 K+转运 ,表明对钒酸钠敏感 ;同时 ,由该运输蛋白参与的 K+跨膜运输受外界 ATP和 K+浓度影响 ,其 Km值分别为 6 0 μmol/L和 14 μmol/L,表明专一性亲和 ATP和 K+ ,与膜两侧电势梯度无关。

小G蛋白Rab5对表达在HEK293细胞上的大电导钙激活钾通道的影响

目的探讨小G蛋白Rab5对HEK293细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)的影响。方法将对数生长期HEK293细胞,随机分为Control组、Rab5WT组、Rab5CA组和Rab5DN组。采用脂质体转染法进行转染,Control组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和对照质粒pc DNA3.1,Rab5WT组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和Rab5WT质粒,Rab5CA组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和Rab5CA质粒,Rab5DN组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和Rab5DN质粒,每组两种质粒总量为4μg,按质量比1∶1共转染至3.5 mm培养皿中。转染72 h、荧光显微镜下观察转染效率在70%以上时,采用膜片钳、Western blotting法和流式细胞术观察Rab5对HEK293细胞BKCa的作用。结果与Control组比较,Rab5WT组、Rab5CA组BKCa全细胞电流密度明显增加,而Rab5DN组明显降低;Rab5WT组、Rab5CA组BKCa膜蛋白的相对表达量明显升高,而Rab5DN组明显降低(P均<0.05);Rab5WT组、Rab5CA组Flag+/GFP+明显增加,而Rab5DN组明显降低(P均<0.05)。结论 Rab5能够明显增加表达在HEK293细胞上的BKCa电流及细胞膜上的表达,并可促进BKCa向质膜的转运过程。