K值校准法在5'-NT测定中的应用

5’-核苷酸酶(5’-NT),在岛津CL-7200全自动生化分析中,采用测定次黄嘌呤释放速率5’-NT比色分析法,选择[装置定数]和[K值接受]校准模式,以底物次黄嘌呤为标准,进行510 nm/600 nm双波长终点比色,测装置K值,由5’-NT连续监测法反应程序接受K值后,用于一般样品分析,结果在设定的次黄嘌呤标准浓度选择性试验中,次黄嘌呤在200～1000μmol/L时,可求得理想K值;准确性:质控结果均值与靶值误差<2％,符合WHO允许误差范围;重现性:高低值5’-NT批内CV<2％,日间<7.5％;线性试验中,5’-NT线性范围是0～300 U/I。,相关系数r=0.998 8,回归方程Y=1.052 8X-2.413,呈高度直线相关且离散度小,回收率为98.2％～99.4％,30例病人结果同手工法相关统计为r=O.897 O,Y=1.209 4X+O.857 8;40例正常组试验为0.3～10.0 U/L,可作为正常参考值。

K值校准法在5’-NT测定中的应用

5’-核苷酸酶（5’-NT）是5’-核苷酸磷酸水解酶,特异性地催化5’-核苷酸磷酸盐水解释放核苷酸和磷酸盐的反应。利用其原理,采用测定次黄嘌吟释放速率5’-NT比色测定法,以 5’-腺苷-磷酸（5’-IMP）作底物,经5’-NT催化释放出的次黄苷,在过量的对核苷特异的核苷磷酸化酶（NP）和黄瞟呤氧化酶（XO）存在下,被转化成次黄瞟呤和尿酸,产生过氧化氢（H2O2）,再经Trinder’s反应,由过氧化物酶（POX）和受体系统2、4、6-三碘-3-羟基苯甲酸（THIBA）,氧化4-氨基安替比林（4-AA）显色,在510nm比色测定H2O2生成速率。根据这个反应机理,运用法国梅里埃5’-NT试剂盒。