国内首次发现带有表面K抗原的沙门氏菌Ⅲ_b（48：a：Z_（55））

本文报道从蛇体内检出一株沙门氏菌，该菌经系统的培养性状，生化学反应及血清学试验，证实是一株带有表面Ｋ抗原的新血清型的沙门氏菌Ⅲｂ（４８：ａ：Ｚ_５５）。本菌为国内首次检出。带有Ｋ抗原的沙门氏菌Ⅲｂ的发现与检出，对提高沙门氏菌检验技术具有重要的理论意义和现实意义。

20354名青岛地区人群K抗原血清学筛选结果

目的对青岛地区人群进行K抗原血清学筛查,并分析结果。方法选取2023年3—6月在本院就诊并申请血型鉴定的患者标本16201份,及同期输血科发往临床的献血者标本4153份为研究对象,使用Rh/K抗原微柱凝集卡做Rh及Kell血型K抗原检测。结果16201份患者标本中共筛出K抗原阳性18份,4153份献血者标本中共筛出K抗原阳性8份,青岛地区K抗原阳性率为0.1277%。结论青岛地区人群中有K抗原存在,且K抗原阳性频率与以往的报道有所不同,提示应构建本地区稀有血型库,对该人群制定正确的献血及输血策略,对于避免Kell血型系统不规则抗体的产生,预防新生儿溶血病及保证临床用血安全具有重要意义。

献血者K抗原血清学筛选结果分析

目的对献血者进行K抗原血清学筛查,并分析结果。方法采用96孔板法对3 784例献血者进行K抗原检测,抗-K阳性者采用试管法进行确认。结果 3 784名献血者中共筛选出K抗原阳性3例,均为汉族,96孔板法凝集均阳性,试管法结果均为2＋。结论北京地区献血者人群中有K抗原存在,不排除给患者输注后产生抗-K的可能。

K抗原阳性及家系调查1例

本院自1980年代开始,开展造血干细胞移植。在患者行异基因造血干细胞移植前对供者与受者进行ABO血型及Rh血型鉴定,自2003年2月开始我院使用Rh分型卡进行C、c、E、e抗原鉴定。由于卡上带有K抗原鉴定孔,因此在记录Rh血型的同时,观察并记录了K抗原在人群中的分布情况。至今共检测912例,发现1例K抗原阳性者,为造血干细胞移植正常供者,进一步对其进行家系调查,现报道如下。

副溶血性弧菌K抗原检测实验条件优化

目的优化副溶血性弧菌K抗原检测的实验条件。方法通过调整菌悬液的浓度、选择基础实验材料和控制反应的温度3个方面的因素,对已知血清型的副溶血性弧菌进行血清学实验。结果当反应温度为37℃时,以90 mm无菌培养皿为基础耗材、20 mg/300μL浓度的菌悬液更容易快捷地观察到凝集现象,并且凝集颗粒较多,较大。结论基于本研究优化后的实验条件,使得凝集结果判读更加容易,实验操作更为简便、安全,且提高了血清学实验的效率。

大肠埃希菌O157:H7国内流行株新K抗原的发现

大肠埃希菌抗原主要有O抗原和H抗原,相当部分菌株还存在K抗原.K抗原与大肠埃希菌的致病力存在一定关系.我们研究发现,国内一些O157:H7临床标本分离株存在"O"不凝集现象,有K抗原存在的可能性.经实验证实,在分离自腹泻患者粪便标本的3株O157:H7菌株中发现一种新的K抗原(L型).

K_(88)抗原纯化中硫酸铵沉淀法的改进

硫酸铵沉淀法是一种用于蛋白质提纯的盐析方法 ,具有成本低、操作简单、对被分离物可保存其生物活性等优点而被广泛使用。我们在大肠杆菌菌毛蛋白K88纯化中采用硫酸铵沉淀法进行蛋白质粗提。

大肠杆菌菌毛抗原K88与热稳定肠毒素ST融合基因植物表达载体的构建及其在烟草中的初步表达

利用DNA重组技术，将编码大肠杆菌黏附素K88与稳定肠毒素ST的融合基因的序列片段可龙到植物表达载体pCAMBLM302中，成功的构建了植物重组表达质粒pCAMBIA-K88-ST。并将其转化农杆菌EHA105，利用农杆菌介导法转化烟草，并初步获得转化体。为K88-ST基因的进一步研究奠定了基础。

大肠杆菌K_(88)纤毛抗原的提纯和抗血清的制备

以5%绵羊血改良M inca琼脂筛选和克隆表达良好的K88+菌株,改良M inca琼脂培养获得K88菌液。用加热法及高速匀浆法使K88纤毛从菌体上脱下。饱和硫酸铵沉淀粗提,用Sepha-rose CL-4B凝胶过滤纯化K88抗原。提纯的抗原经SDS-PAGE电泳测定其分子量约为25 000,且仅此一条蛋白带;与K88抗血清进行琼脂扩散试验只出现一条沉淀线。用提纯的抗原经多次免疫家兔制备了K88抗血清。抗血清在玻板凝集试验中只凝集K88菌株,不凝集K99,987P或F41菌株;在琼扩试验中,只与K88粗提抗原出现一条沉淀线,且效价为1∶64,而不与K99,987P抗原出现沉淀线;在免疫电泳试验中,与无细胞K88纤毛液只出现一条沉淀线。鉴定结果表明,所制备的K88血清特异性强、效价高,可作为单因子血清用于凝集试验、琼扩试验等血清学试验,对K88菌株进行鉴定,对K88纤毛抗原进行定性和定量检测。

检验用大肠杆菌K88纤毛抗原的纯化及其单因子血清制备与质量控制方法研究

为研究兽用生物制品检验用大肠杆菌K88纤毛抗原的纯化及其单因子血清制备与质量控制方法。通过生物反应器发酵含K88抗原的大肠杆菌,机械脱纤处理获得K88纤毛抗原,经柠檬酸等电点沉淀和饱和硫酸铵梯度盐析以及透析处理纯化抗原,免疫家兔3次制备单因子血清并进行质量控制。结果显示,所纯化的K88纤毛抗原纯度能达到85%,每升发酵菌液可得到提纯抗原33.3 mg,免疫家兔血清琼扩效价可达到1∶128。表明该纤毛抗原制备和纯化及其单因子血清制备方法简易,纯度和产率较高,质量可控且易于批量制备。

产毒性大肠杆菌菌毛K_(99)抗原单克隆抗体的研制及初步鉴定

本文应用Sephadex A-SO层析柱纯化的产毒性大肠杆菌(ETEC·O101·K99^+·H^-株)免疫BALB／c小鼠，取其脾脏细胞与Sp2／0—Ag14骨髓瘤细胞系融合，获得17株抗K99抗原杂交瘤细胞。对其中5C5细胞株经三次克隆化，100％阳性，传代三个月及液氨保存复苏，生长良好，并能持续分泌抗K99抗原的单克隆抗体．IF法测定杂交瘤细胞培养上清，阳性滴度为10^-2，诱生腹水阳性滴度为10^-4。免疫球蛋白类型鉴定为lgM。杂交瘤细胞经染色体鉴定为95条，证实为sp2／0与小鼠的杂交细胞。

副溶血弧菌K抗原基因决定簇的破译及液相芯片检测方法的建立

副溶血性弧菌是一种革兰氏阴性嗜盐致病菌,被认为是多血清型引起的主要食源性致病菌.通过全基因组测序技术,实现对K3、K29、K61菌株的测序.并且使用相关软件对测序数据进行基因预测和功能注释从而实现抗原决定簇的破译.鉴定的3个血清型的K抗原基因簇,表现出高程度的遗传多样性.根据K抗原基因决定簇的特异基因,建立了用于检测和鉴定这3种K血清型的液相芯片检测体系.本研究中破译的副溶血弧菌K抗原基因决定簇以及基于分子技术建立的检测分型体系,为高效的细菌检测提供了可能.

仔猪大肠杆菌K_(88)抗原筛选鉴定方法

应用玻片凝集、琼扩试验、抗Ｄ－甘露糖微量血凝试验（ＭＲＭＨ）证实所购３株大肠杆菌只表达Ｋ８８菌毛；该菌毛的特性与资料报道的完全一致。通过比较上述３种方法的敏感性，本文还提出了筛选、鉴定Ｋ８８＋菌株的可行方法。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析该菌毛的粗提物表明其中含有一种分子量为２４０００Ｄａ的蛋白质，它可能就是Ｋ８８菌毛蛋白。

大肠杆菌菌毛抗原K99与耐热肠毒素STⅠ融合基因的克隆与核苷酸序列测定

采用PCR技术,从大肠杆菌K99中扩增出0.54kb的K99菌毛抗原基因,然后将其克隆到pUCm-T载体上,用BglⅡ鉴定K99插入的方向并测序。选择目的基因片段插入方向正确的重组质粒经BamHⅠ和SalⅠ双酶切后,通过T4连接酶与同样经BamHⅠ和SalⅠ双酶切合成的耐热肠毒素STⅠ核苷酸序列连接,通过PCR方法鉴定分析和核苷酸序列测序分析,证明插入的K99-STⅠ融合基因片段具有正确的核苷酸序列。

建立结核分枝杆菌抗原K6IFN-γ ELISPOT用于结核病辅助诊断

目的:建立结核分枝杆菌抗原K6作为刺激源的IFN-γELISPOT检测方法,并初步评价该方法用于结核病辅助诊断价值。方法:结核病患者和非结核性肺部相关疾病患者外周血单核细胞(PBMC)分别加入预包被ELISPOT板对应孔,分别加入抗原K6、T-SPOT.TB试剂盒抗原A和B,每个PBMC样品设阴性对照孔和阳性质控孔。37℃、5%CO2培养20～24小时,弃细胞,依次加入酶标检测抗体、底物显色获得斑点。ELISPOT读板仪进行斑点计数和分析。结果:K6和T-SPOT.TB试剂盒检测敏感度分别为80.0%和85.9%、特异度分别为83.9%和73.2%,两者比较差异均无统计学意义。K6作为刺激原的IFN-γELISPOT诊断结核病阳性预示值为88.3%,阴性预示值为73.4%。结核病组,抗原B刺激PBMC分泌IFN-γ的细胞斑点数(SFC)平均值分别高于抗原A和K6(P=0.011和P=0.004),抗原A和K6刺激PBMC分泌IFN-γ的SFC平均值比较差异无统计学意义(P>0.05)。非结核性肺部相关疾病组,抗原A、抗原B和K6刺激PBMC分泌IFN-γ的SFC平均值两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:K6可作为结核病IFN-#ELISPOT诊断候选抗原之一。

非洲猪瘟病毒无标签重组K205R抗原制备与应用

为建立敏感、特异的非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体检测方法,将ASFV K205R基因与类弹性蛋白多肽(ELP)进行融合表达,用相变循环纯化ELP-K205R融合蛋白,用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,用相变循环回收K205R蛋白,用抗体阳性血清对重组K205R蛋白进行ELISA鉴定。结果表明:重组大肠埃希菌能正确表达ELP-K205R融合蛋白,相变循环纯化的融合蛋白纯度大于80%;TEV蛋白酶活性包涵体能有效切割ELP标签,回收的重组K205R蛋白纯度大于95%,能被特异抗体阳性血清识别;重组K205R抗原与抗体阴性猪血清反应阴性,与抗体阳性猪血清反应阳性,D450nm值与血清稀释倍数具有线性相关性。用重组K205R抗原对已知猪血清进行ELISA检测,结果显示24份ASFV抗体阳性血清为检测阳性,24份ASFV抗体阴性血清为检测阴性,检测符合率为100%。这一研究提示制备的无标签重组K205R抗原可用于ASFV抗体检测。

结核分枝杆菌抗体双抗原夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

目的:建立2种结核分枝杆菌(Mtb)抗体的双抗原夹心ELISA检测方法,并初步评价其在Mtb血清学临床辅助诊断中的应用价值。方法:采用Mtb融合抗原38k D+ESAT6+CFP10作为包被抗原,分别以辣根过氧化物酶(HRP)和生物素(Bio)标记的38k D+ESAT6+CFP10作为标记抗原,建立2种Mtb双抗原夹心ELISA法,即HRP-ELISA法和Bio-ELISA法;采用所建立的2种方法对结核患者和健康对照血清进行检测。结果:经过一系列的反应条件优化,确定HRP-ELISA法和Bio-ELISA法的最佳抗原包被浓度分别为2、0.25μg/m L,最适加样量均为100μL血清原液,最佳标记抗原稀释率分别为1∶500、1∶2000,检测的灵敏度分别为43.66%、52.11%,特异性均为100%。结论:建立了2种Mtb双抗原夹心ELISA法,它们均适用于Mtb血清学的临床辅助诊断。

鸡大肠杆菌病防治

鸡大肠杆菌病是由致病性大肠埃希氏杆菌感染引起的。大肠杆菌是鸡肠道和环境常在菌,其中致病性大肠杆菌约占15%,抗原类型主要有O、K、H、F四种,目前确定的O抗原血清型有173种,K抗原血清型有103种,H抗原血清型有60种,这一特征也导致了大肠杆菌病难以清除且不同年龄阶段的鸡均有发病的可能。

一对斑马“猝死综合症”的诊断

2003年3月31日,兰州市动物园1对斑马突然暴亡,经尸体剖检和实验室检验,从采取的脏器及组织分离出大量高致病力的大肠杆菌,经中国兽医药品监察所对2株大肠杆菌血型O、K抗原鉴定,结果一株为O2和O74混合型,另一株为O6;但K抗原血清鉴定未获结果。初步确诊该对斑马死亡是高致病力的大肠杆菌所致。