K-B纸片琼脂扩散法检测细菌药物敏感试验的影响因素分析

细菌药物敏感试验的结果是临床合理用药的重要依据,确保其结果的准确性,必须了解试验中培养基种类及质量、试验用药的纯度和菌液的浓度、药物的含量及孵育时间等诸多因素的影响。本文主要探讨K-B纸片琼脂扩散法中的影响因素。

CLSI推荐的琼脂稀释法与纸片扩散法对不动杆菌药敏检测的比较

目的比较美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的不动杆菌抗生素敏感性试验琼脂稀释法和纸片扩散法检测结果。方法收集2005年1月至2006年10月临床分离的非重复不动杆菌234株,采用琼脂稀释法和纸片扩散法对临床常用的12种抗生素进行敏感性试验,比较2种检测结果的符合性。结果环丙沙星[极严重错误率(VME)0.43%]、庆大霉素[VME 1.28%,一般错误率(MIE)2.14%]、阿米卡星[VME 0.43%,严重错误率(ME)1.71%,MIE 4.27%]、四环素(VME 0.43%,MIE 8.97%)、复方磺胺甲唑(VME 0.85%,ME0.43%,MIE 1.28%)、亚胺培南(VME 0.85%,ME 0.85%,MIE 2.99%),2种方法差异在可接受范围,符合性较好。青霉素和头孢菌素类药物,除哌拉西林(VME 0.43%,MIE 5.98%)外,头孢他啶(VME 0.43%,MIE10.68%)、头孢曲松(MIE 18.38%)、头孢吡肟(VME 0.85%,ME 2.56%,MIE 25.64%)、氨苄西林-舒巴坦(VME 0.85%,MIE 38.03%)、头孢哌酮-舒巴坦(VME 6.84%,MIE 45.73%)符合性较差。结论CLSI推荐的不动杆菌抗生素敏感性试验琼脂稀释法和纸片扩散法检测青霉素类和头孢菌素类药物结果存在差异,应引起临床实验室关注。

纸片琼脂扩散法检测AmpC酶的探讨

目的建立一种简便、快速适用于普通临床微生物室的AmpC酶表型检测方法。方法分别采用纸片琼脂扩散法和三维实验检测244株试验菌中产AmpC酶的情况。结果三维实验检测244株试验菌中,产AmpC酶的有67株,产酶率为27.45%(67/244),其中阴沟肠杆菌46.67%(21/45),铜绿假单胞菌35.09%(20/57),嗜麦芽寡养假单胞菌33.33%(2/6),鲁民不动杆菌20.0%(1/5),鲍曼不动杆菌26.83%(11/41),产气肠杆菌28.6%(4/14),大肠埃希菌10.0%(5/50),肺炎克雷伯菌11.54%(3/26)。纸片琼脂扩散法检测产酶率24.59%(60/244),经统计学处理得出两者检测无显著性差异。结论纸片琼脂扩散法是一种简便快速的AmpC酶表型检测方法,易在普通实验室推广。

改良琼脂纸片扩散法检测AmpC酶的可行性探讨

目的探讨改良琼脂纸片扩散(K-B)法检测AmpC酶的可行性,并分析其与三维确认试验的相关度。方法K-B法按美国国家临床实验室标准委员会(CLSI)规定检测,用头孢西丁敏感试验初筛AmpC酶,头孢西丁耐药再做三维确认试验,改良K-B法检测方法见正文。结果改良K-B法检测AmpC酶与三维确认试验结果基本一致。结论基层医院细菌室检测AmpC酶用改良K-B法可取代三维确认试验及其他确认试验。

纸片扩散法检测淋病奈瑟菌的药物敏感性

目的探讨纸片扩散法检测淋病奈瑟菌对7种监测药物敏感性的准确性。方法以琼脂稀释法作为参考方法,采用纸片扩散法(K-B法)配对检测60株临床淋病奈瑟菌对头孢曲松、头孢克肟、大观霉素、阿奇霉素、环丙沙星、四环素和青霉素的敏感性,比较两种方法药敏结果的分类一致性、小误差、重大误差和极重大误差。结果与琼脂稀释法比较,K-B法检测头孢曲松、头孢克肟、大观霉素、阿奇霉素、环丙沙星、四环素和青霉素的分类一致性分别为95.0%、76.7%、100%、80.0%、93.3%、63.3%和90.0%;所检测药物中头孢曲松、头孢克肟、环丙沙星、四环素和青霉素有小误差,分别为5.0%、23.3%、6.7%、30.0%和10.0%;对阿奇霉素和四环素的极重大误差率分别为20.0%和6.7%。结论淋病奈瑟菌监测药物除头孢克肟、阿奇霉素和四环素外,K-B法药敏试验结果的准确性较高。

K-B琼脂扩散法与微量稀释法两种药敏试验方法的比较

用Ｋ—Ｂ琼脂扩散法和微量稀释法两种方法同时测定标准菌株对６种抗生素的敏感性，以此来评价微量稀释法的可靠性。结果表明，微量稀释法和Ｋ—Ｂ琼脂扩散法具有相同的准确性。但Ｋ—Ｂ琼脂扩散法测定细菌对抗生素的敏感性仅限于定性；而微量稀释法既可定性也可以定量。

药敏试验-纸片扩散法影响因素的探讨

原卫生部于2004年颁布了《抗菌药物临床应用指导原则》，指出医院应尽早明确病原菌和药敏试验结果，根据药敏结果制定治疗方案。及时、准确的药物敏感试验结果是临床进行抗菌药物合理应用的重要参考指标之一，对防止滥用抗生素引起的耐药菌株出现具有指导意义。纸片琼脂扩散法因其操作简便、成本不高、灵活性强，是目前临床上最为常用的药敏试验方法。但是药敏试验-纸片扩散法由于手工比重较大，技术人员的经验、抗菌药物的稳定性、细菌接种量等诸多因素直接影响着药敏试验准确性和可重复性。根据多年实践经验，笔者认为要获得精确的药敏试验结果必须重视以下环节。

仪器与纸片扩散检测耐甲氧西林葡萄球菌的方法比较评价

目的:比较分析耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)仪器检测与纸片扩散检测的检出率。方法:采用KB纸片扩散法,全自动微生物分析仪法,并以琼脂稀释法为标准对临床分离的63株葡萄球菌进行检测,比较3种方法的检出率。结果:对63株葡萄球菌(凝固酶阳性50株,凝固酶阴性13株)3种方法检出率分别为60.3%、57.1%、50.8%。含4%氯化钠(NaCl)M-H平板药敏纸片扩散法和VITEK-32型自动微生物鉴定系统法差异无显著性(P>0.05),与琼脂稀释法差异无显著性(P>0.05),而仪器法与琼脂稀释法差异无显著性(P>0.05)。结论:KB纸片扩散法,仪器法和作为MRS检测推荐方法的含盐琼脂平板稀释法对MRS的检出率,三者差异均无显著性,仪器法与KB纸片扩散法均可用于临床常规实验室MRS的检测。

纸片扩散法对泪液中溶菌酶的测定

泪液溶菌酶在眼局部非特异性免疫防御过程中起重要作用.泪液溶菌酶测定的方法有免疫学方法和微生物学方法,我所参阅杨鸿藻等人报道的琼脂扩散法[1],建立了纸片扩散测定方法以测定正常人泪液中溶菌酶浓度,报道如下.

应用K—B纸片扩散法测定淋球菌对药物敏感性

淋球菌对药物敏感性的测定多采用琼脂稀释法,此法为世界卫生组织(WHO)推荐,国内近年也曾有报道,但基层实验室开展此项目有一定难度,我们采用美国疾病控制中心推荐的淋球菌抗生素敏感性测定(纸片法)

头孢西丁和苯唑西林纸片法检测MRSA的评价

目的评价头孢西丁纸片扩散法与苯唑西林纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)在临床的应用价值。方法收集152株金黄色葡萄球菌,分别采用苯唑西林琼脂平板筛选法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法检测MRSA,以苯唑西林琼脂平板筛选法结果为对照,分别比较头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法对MRSA检测的敏感性。结果152株金黄色葡萄球菌中,经苯唑西林琼脂平板筛选判定为MRSA的有61株,发生率为40.13%;以苯唑西林琼脂平板筛选法比较,头孢西丁纸片扩散法的敏感性、特异性均为100%;而苯唑西林纸片扩散法的敏感性为93.44%、特异性为97.80%。结论头孢西丁纸片扩散法检测MRSA具有很高的敏感性和特异性,临床微生物实验室应推广使用。

淋病奈瑟菌药敏试验方法及药敏纸片质量的初步评价

目的评价淋病奈瑟菌(淋球菌)药物敏感性试验方法及了解药敏纸片的质量,为性病实验室选用药敏方法及药敏纸片提供参考依据。方法以琼脂稀释法作金标准,用纸片扩散法对5种常用国产及进口药敏纸片进行药敏试验,并将结果与金标准比对,同时比较药敏纸片的质量。结果纸片扩散法与琼脂稀释法的符合率:环丙沙星、大观霉素及质粒介导高度耐四环素淋球菌(TRNG)符合率均为100%,而头孢曲松符合率为96.67%。国产药敏纸片及进口药敏纸片中环丙沙星、大观霉素、头孢曲松及四环素的符合率均为100%;而青霉素符合率为73.33%。结论 CLSI推荐的淋球菌抗生素敏感试验琼脂稀释法和纸片扩散法检测头孢曲松药物结果存在差异,应引起重视。国产药敏纸片环丙沙星、大观霉素、头孢曲松、四环素可代替进口抗生素,而青霉素药敏纸片质量有待进一步探讨。

亚胺培南-EDTA纸片增效法检测非发酵菌的金属β-内酰胺酶

目的为了解临床分离的非发酵菌(NFB)产金属β-内酰胺酶(MBL)阳性率。方法采用MH琼脂扩散法,以加与不加EDTA亚胺培南纸片的抑菌环直径差异确定MBL的产生。结果484株待测NFB菌株中,MBL阳性率分别是:嗜麦芽窄食单胞菌为100.0%、铜绿假单胞菌为49.0%、洋葱伯克霍尔德菌为63.9%、鲍曼不动杆菌为7.5%、脑膜败血黄杆菌为94.1%、产吲哚黄杆菌为80.9%、少动鞘胺醇单胞菌为13.3%。结论临床分离的NFB存在较高的MBL阳性率,应采取有效措施防止产MBL菌的进一步扩散。

纸片法在检测念珠菌药物敏感性中的应用

目的探讨纸片法在临床念珠菌药敏检测中的应用价值。方法采用法国科玛嘉念珠菌显色培养基和生物梅里埃公司Vitec 32进行念珠菌菌种鉴定,用纸片法进行药物敏感性测定。结果临床感染念珠菌菌种分别为白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌和急落假丝酵母菌,对两性霉素B、酮康唑、氟康唑、伊曲康唑和氟胞嘧啶5种抗霉菌药,上述念珠菌的耐药率分别为:白色念珠菌:0、0、0、0、1.8%,光滑念珠菌和热带念珠菌均无耐药菌株,克柔假丝酵母菌:33.3%、33.3%、66.7%、33.3%和66.7%,近平滑假丝酵母菌无耐药菌株,皱落假丝酵母菌:100%、0、0、0、0。结论显色培养基鉴定念珠菌具有快速、准确的优点,纸片法具有操作简单、成本较低、结果可靠的优点,在临床念珠菌的鉴定和药敏试验中具有良好的应用前景。

细菌药物敏感性实验方法研究进展

致病菌的耐药性已成为世界范围内的公共卫生和安全问题,如何对致病菌的耐药性进行准确快速的检测是许多微生物科研人员和医疗工作者共同面临的难题。根据近年国内外有关研究资料与报道,对于细菌耐药性的检测和分析主要通过对细菌进行药物敏感性实验来执行。目前用于细菌药敏性实验的方法主要包括:肉汤稀释法、琼脂稀释法、K-B纸片法和E-test实验等。文中就以上几种细菌药敏性实验方法的原理、步骤及优缺点进行了概述,并对各种实验方法的应用进行了举例分析。

嗜麦芽窄食单胞菌体外药敏试验方法评价及耐药性分析

目的评价纸片扩散法和仪器法检测嗜麦芽窄食单胞菌药敏试验的可靠性,分析嗜麦芽窄食单胞菌对常用抗菌药物的敏感性。方法琼脂稀释法、VITEK-AMS和纸片扩散法检测嗜麦芽窄食单胞菌对11种抗菌药物的敏感性。结果纸片法与琼脂稀释法检测嗜麦芽窄食单胞菌对哌拉西林-他唑巴坦的药敏结果差异有显著性;VITEK-AMS和琼脂稀释法检测嗜麦芽窄食单胞菌对阿莫西林-克拉维酸、哌拉西林-他唑巴坦、头孢他啶、复方磺胺甲王月唑的药敏结果差异有显著性;嗜麦芽窄食单胞菌对氧氟沙星、复方磺胺甲王月唑的敏感性较高。结论纸片法和VITEK-AMS用于嗜麦芽窄食单胞菌的药物敏感性检测存在缺陷;治疗嗜麦芽窄食单胞菌引起的感染可选用左氧氟沙星、复方磺胺甲王月唑。

300株鲍曼不动杆菌琼脂稀释法与纸片扩散法药敏检测结果比较

目的:比较琼脂稀释法和纸片扩散法对鲍曼不动杆菌的药敏试验结果。方法:随机挑选的300株鲍曼不动杆菌,检测其标本及科室的分布情况,并采用琼脂稀释法和纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌对环丙沙星(CIP)、庆大霉素(CN)、阿米卡星(AK)、头孢他啶(CAZ)、头孢吡肟(FEP)、左氧氟沙星(LEV)、氨苄西林-舒巴坦(SAM)、妥布霉素(TOB)、美洛培南(MEN)、米诺环素(MH)、头孢哌酮-舒巴坦(SCF)11种抗菌药物的敏感性,比较两种检测结果的差异。结果:300株鲍曼不动杆菌主要分布在痰液标本中,共214株,占71.3%,主要来源于ICU 101株(33.7%)及脑外科59株(19.7%)。药敏检测结果显示,两种检测方法所得的SCF和MH的敏感性差异具有统计学意义(P<0.05),其他9种抗菌药物的药敏检测结果差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:琼脂稀释法和纸片扩散法对鲍曼不动杆菌药敏试验结果并不完全一致,临床用药时尤其要注意SCF和MH这两种药物药敏结果的可靠性。

嗜麦芽窄食单胞菌体外药敏试验方法研究

目的 :比较纸片扩散法和琼脂稀释法作嗜麦芽窄度食单胞菌的药敏试验。方法 :采用琼脂稀释法和纸片扩散法 ,测定嗜麦芽窄食单胞菌对 14种抗菌药物的敏感度。结果 :琼脂稀释法测得嗜麦芽窄食单胞菌对头孢哌酮和头孢哌酮 舒巴坦复方制剂敏感率最高 ,分别为 92 .2 %和 95 % ;其次为复方磺胺甲唑、替卡西林 克拉维酸、环丙沙星和哌拉西林 三唑巴坦 ,细菌敏感率分别为 84 .3%、87.3%、76 .5 %和 75 .5 %。对大多数抗菌药物的敏感率琼脂稀释法较纸片扩散法高 ,其差异有显著性。结论 :临床微生物实验室应以稀释法进行嗜麦芽窄食单胞菌的药物敏感性试验。

大蒜素琼脂纸片扩散法联合药敏试验的可行性研究

目的探讨大蒜素琼脂纸片扩散法联合药敏试验的可行性。方法选取临床分离的非重复多重耐药菌40株,以棋盘稀释法、琼脂稀释法和纸片扩散法,分别检测大蒜素单独使用的MIC值,及与环丙沙星和庆大霉素的联合使用后这二种药物的MIC值和抑菌环直径的变化,同时判定大蒜素M-H平板联合药敏试验与棋盘法的符合性。结果大蒜素与环丙沙星和庆大霉素的联合使用可使环丙沙星与庆大霉素对MRSA、HLGR、CR-PM、CR-SM和CR-PAMIC值下降2倍~8倍,抑菌环直径增加3 mm^15 mm;大蒜素琼脂纸片扩散法联合药敏结果与棋盘法的符合率为100%。结论大蒜素琼脂纸片扩散法联合药敏结果与棋盘法结果一致且方法简便,稳定性好,可以适用于临床多耐药菌的联合药敏试验。