K.fragilis β-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的组成分析

采用SephadexG-15与DTF-02树脂对K.fragilisβ-半乳糖苷酶催化生产低聚半乳糖的反应液中的糖类物质进行了分离纯化。分别应用高效液相色谱测定了分离的低聚半乳糖的纯度，气相色谱分析了该糖的化学组成。酶反应液经过SephadexG-15色谱柱分成低聚半乳糖、乳糖和单糖(葡萄糖、半乳糖)3个组分。由SephadexG-15色谱柱收集的低聚半乳糖组分上DTF树脂柱出现2个洗脱峰，分别为低聚半乳糖和乳糖。经过上述2步纯化的低聚半乳糖组分在高效液相色谱(HPLC)上为一个单峰，其保留时间为10.481min。该低聚半乳糖是由1分子葡萄糖和2分子半乳糖组成的三糖。

碳源对K.fragilis LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶合成的影响

探讨了碳源对脆壁克鲁维酵母 (Kluyveromycesfragilis)LFS 86 11生长、β D 半乳糖苷酶合成的影响及碳源对该酶合成的诱导作用。脆壁克鲁维酵母 (K .fragilis)LFS 86 11生长与 β D 半乳糖苷酶合成同步。该菌株生长和产酶的最适碳源为半乳糖 ,乳糖次之。菌体生物量和酶活力随着培养基中乳糖浓度的增加而增加 ,乳糖浓度为 12mg/mL ,菌体生物量和酶活力达到峰值 ,分别为 5 .84 g/L、19.12U/mL。半乳糖和乳糖对 β D 半乳糖苷酶合成具有诱导作用。诱导物浓度对β D 半乳糖苷酶的诱导合成有较大影响。半乳糖诱导以山梨醇为碳源预培养的K .fragilisLFS 86 11细胞合成β D 半乳糖苷酶的最适浓度为 10mg/mL。

产乳糖酶酵母Kfragilis株增殖培养发酵条件的优化

目的：提高发酵液单位体积的酵母细胞总量，以提高酶得率。方法：采用单因素试验方法，对影响酵母生长的主要限制因子──培养液中可利用的糖含量进行了试验。用细胞浊度法来表示酵母细胞的增殖情况，Nelson－Somogyi法测定培养液中可利用的糖含量，凯氏定氮法测培养液中的氮含量，PH计测定PH值。结果：确定了Kfragilis酵母株增殖培养的较佳配方，当选择原色砂糖浓度为10％、pH为6时，细胞量比原配方提高了3．65倍。单位酶产量达122．4IU／ml。结论：优化后的该菌株增殖培养条件下，该菌株生长产酶情况良好，可用于生产。

脆壁克鲁维酵母KfADE5,7基因的克隆及其5’非编码区结构与功能研究

通过补偿乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)KlADE5,7基因突变,从脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)基因组文库中克隆了KfADE5,7基因。该基因全长4975bp,编码793个氨基酸,氨基酸序列与已知的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)ScADE5,7基因编码区有68.3％的同源度。利用KfADE5,7-lacZ融合基因,对5’非编码区进行缺失分析,发现了具有完整启动子功能的区域,在启动子上游还发现了两个增强转录和两个减弱转录的区域。

离子交换树脂DOEX~ 50WX8固定化K.fragilis β-D-半乳糖苷酶

K.fragilisβ-D-半乳糖苷酶通过离子吸附固定在离子交换树脂DOEX50WX8上,用于催化牛乳中的乳糖水解。研究了pH、酶的初始浓度、时间等因素对酶固定化效率的影响,探讨了固定化酶的操作稳定性及其水解乳糖的效率。结果表明:在pH7.0、初始酶浓度10.0 mg/mL、吸附时间2.0 h的条件下,吸附在DOEX50WX8 UPW上的K.fragilisβ-D-半乳糖苷酶的酶量与酶活回收率均达到最大值,分别为45.7 mg/g和83.2%。该固定化酶连续使用5次,其活力保留82.6%,固定化酶对乳糖的水解率为87.2%。

渗透化K.fragilis细胞水解牛乳中乳糖的研究

应用渗透化K.fragilis细胞中的β-D-半乳糖苷酶水解牛乳中的乳糖,研究了影响乳糖水解率的因素、乳糖的水解动力学,以及酶的稳定性。结果表明:以牛乳中的乳糖为底物,4℃条件下水解75 min,乳糖的水解率为62.66%。该酶的Km值为3.18 mmol/L,Vmax为3.32μmol/min。乳糖的水解产物(葡萄糖)对K.fragilisβ-D-半乳糖苷酶具有反馈抑制作用,反应体系中存在5%葡萄糖时,对该酶活性的抑制率为36.88%。水解牛乳中乳糖连续使用4个批次后,酶活力仍保持初始酶活力的65%以上。渗透化K.fragilis细胞在低温(4℃)下具有良好的贮存稳定性,贮存14 d,β-D-半乳糖苷酶活力保存为95.64%。

囊状嵩草(莎草科)及相关类群的分类

根据外部形态学和小坚果表皮的微形态学资料 ,研究了囊状嵩草及其相关类群的分类。在这一群植物中 ,有 1 3个相关的学名。根据以前学者用于区别这些植物的形态性状 ,无法清楚地将它们划分开。因此作者深入地研究了有关植物的 89号 2 0 0多份标本 ,重新评价了形态性状的分类学意义。为了更深入地理解这类植物的分类 ,应用扫描电子显微镜对其小坚果表皮的微形态进行了研究。根据研究的结果 ,确认了囊状嵩草Kobresiafragilis和弧形嵩草K .curvata ,其他名称做为囊状嵩草的异名 ,K .clarkeana、K .clarkeanavar.megalantha和K .curticepsvar.gyirongensis被处理为囊状嵩草的新异名。弧形嵩草从形态学和微形态学两个方面都明显不同于囊状嵩草。研究中还发现囊状嵩草的一号标本采自甘肃的碌曲 。