CD11c^+DCs促K14-VEGF转基因小鼠银屑病样发病

目的研究CD11c^+DCs对银屑病的促进作用及机制。方法取K14-VEGF转基因小鼠皮损皮肤进行表型鉴定。将CD11c^+DCs注射入未发病的转基因小鼠颈部皮下,对小鼠进行PASI评分;组织学检测小鼠耳朵和颈背部皮肤;检测骨髓、血液、脾脏和颌下淋巴结处T淋巴细胞和DCs;免疫荧光法检测皮损中CD4、CD8、IL-17a、IFN-γ和CD31含量;HE染色方法观察小鼠心、肝、脾、肺和肾的变化。结果 K14-VEGF小鼠皮损中90%FLT3阳性细胞表达CD11c。实验组表皮层厚度均显著高于对照组(P<0.01)。血液中CD3^+CD4^+T淋巴细胞数降低(P<0.01);骨髓、血液、脾脏和颌下淋巴结中的Th1和Th17细胞减少;同时,骨髓和颌下淋巴结中的CD11c^+DCs减少(P<0.01);皮损皮肤中表达CD4^+T、CD8^+T、IL-17a^+和IFN-γ^+的细胞均增多(P<0.01),血管增多(P<0.01)。结论 CD11c^+DCs可通过促使K14-VEGF小鼠皮肤中T淋巴细胞及血管增多使该小鼠银屑病样病变提前发生,提示CD11c^+DCs可能在银屑病的发生发展中起重要作用。

毛囊上皮细胞对Hedgehog信号的响应与短期毛发再生无关

背景:Hedgehog信号通路对于多种组织的发育、动态平衡以及修复起了重要的作用,前人的研究强调了Hedgehog信号对于毛发模式形成是至关重要的。目的:探究Hedgehog信号在成年后的毛囊上皮动态平衡中发挥的作用。方法:Lgr5-EGFP-Ires-Cre ERT2小鼠、Smofl/fl小鼠与K14-CreER小鼠均来自TheJacksonLaboratory,实验经上海交通大学实验动物伦理与使用委员会批准,批准号为1602028。①首先利用Lgr5-EGFP-Ires-Cre ERT2小鼠特异地标记Lgr5+细胞亚群,确认了在Lgr5+毛囊上皮干细胞/前体细胞中多个Hedgehog信号通路成员高度富集表达。而后用Lgr5-EGFP-Ires-CreERT2小鼠与Smofl/fl小鼠交配得到了Lgr5-EGFP-Ires-CreERT2;Smofl/fl小鼠;在刚进入第二轮长静息期的P49天进行背部剃毛,接着用他莫昔芬诱导Hedgehog信号通路的介导蛋白Smo敲除,观察在Lgr5+细胞中敲除Smo对毛发再生速度的影响;之后实验在P50-54天他莫昔芬诱导Smo敲除后1周进行脱毛,进一步评估bulge上皮干细胞在突变小鼠的功能是否有变化;②用K14-Cre ER小鼠与Smofl/fl小鼠交配以得到K14-CreER;Smofl/fl小鼠,同上实验方法,在毛囊整个上皮细胞这一更大范围内用他莫昔芬诱导敲除Smo,观察是否有毛发再生障碍及毛囊Bulge干细胞功能障碍。结果与结论:Lgr5-EGFP-Ires-Cre ERT2;Smofl/fl小鼠模型及K14-CreER;Smofl/fl小鼠模型中均没有观测到明显的毛发再生障碍,毛囊Bulge干细胞也没有受到影响。说明Lgr5+细胞群和整个毛囊上皮对于Hedgehog信号通路的响应与毛囊静息期向生长期转换以及短期的毛发再生无关,且与bulge上皮干细胞的维持也无关。这一发现强调了组织发育和动态平衡之间的不同分子机制,为人们更加准确地理解毛囊再生和组织生长的机制提供了重要依据。

小分子药物Tideglusib促进大鼠创面愈合的机制研究

目的研究小分子药物Tideglusib对大鼠创面愈合的影响及其机制。 方法选择40只健康雄性2月龄SD大鼠,采用随机数字表法随机分为对照组和Tideglusib组,每组20只,在其背部制作直径8 mm的圆形全层皮肤缺损创面,伤后即刻起,对照组创面滴加50μL磷酸盐缓冲溶液(PBS),Tideglusib组创面滴加50μL 40μmol/L的Tideglusib,1次/d。(1)每组按照随机数字表法选定8只大鼠,分别于伤后3、7、10 d观察创面愈合情况,并计算、比较创面愈合率。(2)每组从未进行创面观察的12只大鼠中选定6只,分别于伤后3、7、10 d取创缘组织,通过苏木精-伊红染色观察创面愈合过程中再上皮化情况、新生毛细血管情况、新生表皮厚度,Masson染色观察真皮胶原纤维排列情况,免疫组织化学染色检测驱动蛋白家族成员14(KIF14)表达水平和分布。(3)将每组剩余的6只大鼠在伤后3 d取创缘组织,经蛋白质印迹法检测蛋白激酶(PKB)、磷酸化蛋白激酶B(p-PKB)、KIF14表达水平变化。对数据行独立样本t检验。 结果(1)相较于对照组,Tideglusib组在各时相点创面明显缩小,创面渗出物更少,炎症反应更轻,肉芽组织质量更好,新生表皮延伸更多;伤后3 d,Tideglusib组创面愈合率为(12.42±3.48)%,对照组创面愈合率为(8.35±1.73)%,2组比较差异无统计学意义(t=1.48,P=0.56);伤后7、10 d,Tideglusib组创面愈合率分别为(33.69±2.18)%、(73.69±3.23)%,与对照组[(21.44±2.11)%、(56.12±3.65)%],比较,差异均有统计学意义(t=5.71、5.08,P=0.01、0.02)。(2)相较于对照组,Tideglusib组在各时相点创面新生表皮层次更多,同真皮连接更加完善,钉突数量更多,且厚度均厚于对照组;伤后3、7、10 d,Tideglusib组新生表皮厚度分别为(15.86±1.78)、(40.42±4.07)、(60.39±7.68)μm,厚于对照组[(6.07±1.12)、(22.25±3.24)、(36.36±6.46)μm],2组比较差异均有统计学意义(t=6.58、4.94、5.36,P=0.003、0.008、<0.05)。相较于对照组,Tideglusib组在各时相点真皮形态更接近于正常大鼠皮肤,胶原更加粗大,排列更加有序,胶原纤维含量更高;伤后3、7、10 d,Tideglusib组真皮胶原纤维含量分别为(16.33±2.35)%、(37.61±3.88)%、(49.72±1.98)%,高于对照组[(7.53±2.99)%、(16.97±3.55)%、(27.06±3.81)%],2组比较差异均有统计学意义(t=3.27、5.55、7.47,P=0.03、0.01、<0.05)。伤后3 d,对照组和Tideglusib组KIF14均主要表达在创缘的表皮和毛囊处;伤后7、10 d,Tideglusib组可在表皮层观察到大量棕黄色KIF14阳性表达,真皮层内也可见棕黄色颗粒分布,而对照组棕黄色颗粒分布稀疏且仅局限于表皮层;伤后3 d,Tideglusib组KIF14免疫组织化学染色平均吸光度值同对照组比较,差异无统计学意义(t=0.994,P=0.344);伤后7、10 d,Tideglusib组KIF14平均吸光度值高于对照组,差异均有统计学意义(t=3.440、2.826,P=0.006、0.018)。(3)伤后3 d,Tideglusib组PKB蛋白相对表达量相较于对照组,差异无统计学意义(P>0.05),p-PKB、KIF14蛋白相对表达量相较于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论小分子药物Tideglusib可加速SD大鼠创面愈合,其机制可能与上调PI3K/PKB/KIF14信号通路有关。