K252a对表达TrkB的NB细胞耐药性的影响

目的:使用全反式维甲酸(ATRA)诱导SH-SY5YNB(SY5Y)细胞的TrkB表达,加入BDNF激活TrkB/BDNF信号传导通路使TrkB磷酸化,然后用特异性酪氨酸激酶抑制剂K252a阻断该通路,观察NB细胞对化疗药物—顺铂(CDDP)敏感性的变化。方法:用ATRA诱导SY5Y细胞的TrkB高表达后,用BDNF、CDDP和TrkB信号传导通路的特异性阻断剂—K252a处理,MTT法检测细胞的存活率变化;流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率;应用免疫组化法检测细胞磷酸化TrkB(p-TrkB)的表达水平。结果:ATRA能特异性诱导TrkB的表达,加入BDNF后可激活TrkB/BDNF信号传导通路并能引起TrkB的自动磷酸化;K252a能够阻断TrkB的磷酸化和TrkB/BDNF信号传导通路;经CDDP处理的SY5Y细胞的存活率下降、凋亡率上升。结论:阻断TrkB/BDNF信号传导通路可提高共表达TrkB/BDNF的NB细胞的化疗敏感性。因此,应用TrkB的抑制剂治疗NB有望提高该病的临床治愈率。

脑源性神经营养因子/酪氨酸激酶受体B信号通路抑制剂K252a逆转丙戊酸引起的神经元过度生长

目的：探讨脑源性神经营养因子（BDNF）/酪氨酸激酶受体B（TrkB）信号通路抑制剂K252a是否对丙戊酸引起的神经元过度生长有逆转作用。方法：用丙戊酸及K252a分别或共处理大鼠大脑皮层原代培养神经元，定量RT-PCR及免疫印迹检测BDNF/TrkB通路蛋白BDNF及TrkB的表达变化，同时以免疫荧光技术观测神经元形态变化。结果：丙戊酸处理后，显著增加神经元BDNF- mRNA的表达，TrkB mRNA的表达则未见明显变化；丙戊酸处理也导致BDNF蛋白表达上调。而用K252a处理后，神经元BDNF及TrkB表达与对照组相比，无明显变化。形态学结果显示，丙戊酸处理后，神经元过度生长，表现为神经元突起数目及总长度显著增加；而K252a处理后，丙戊酸引起的神经元突起过度生长受到明显抑制。结论：BDNF/TrkB通路抑制剂K252a可逆转丙戊酸导致的神经元过度生长。该结果为丙戊酸及K252a应用于临床治疗某些神经发育与退行性疾病如自闭症及阿尔茨海默病等提供了实验依据。

神经生长因子及抑制剂K252α和UO126对颗粒细胞增殖及PCNA蛋白表达的影响

目的:观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及抑制剂K252α、UO126对颗粒细胞增殖情况以及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达的影响,同时探索其作用机理。方法:用NGF及K252α、UO126作用培养的小鼠卵巢腔前颗粒细胞,采用2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐(cell counting Kit-8,CCK-8)法实验分析颗粒细胞在体外培养中的增殖情况,应用Western blot方法检测PCNA表达的改变。结果:NGF组(A值1.58)明显促进颗粒细胞增殖,与对照组(A值1.31)比较差异有统计学意义(PNGF=0.000),而应用K252α、UO126之后,颗粒细胞的增殖下降,K252α组(A值1.21),NGF+K252α组(A值1.19)、NGF+UO126组(A值1.14)比对照组明显减少,差异具有统计学意义(PK252α=0.001,PNGF+K252α=0.001,PNGF+UO126=0.000)。同时NGF组PCNA相对表达量为5.21,与对照组(表达量1.65)比较差异有统计学意义(PNGF=0.000);而K252α组、NGF+K252α组、NGF+UO126组PCNA相对表达量分别为1.48、0.84、0.41,与对照组比较有统计学意义(PK252α=0.02,PNGF+K252α=0.000,PNGF+UO126=0.000);同时与NGF组比较,差异均有统计学意义(PK252α=0.000,PNGF+K252α=0.000,PNGF+UO126=0.000)。结论:NGF促进颗粒细胞增殖的同时也刺激PCNA表达增高;抑制剂能够抑制细胞的增殖,其机制可能与抑制PCNA的表达有关。

海马内微量注射K252a对大鼠行为学及抑郁样经典指标的影响

目的海马内微量注射K252a,研究其对大鼠行为学及抑郁样经典指标的影响,拟建立一种新型抑郁症动物模型。方法 SD大鼠随机分为5组,即空白对照组、假手术组、慢性应激抑郁模型组、海马内微量注射K252a组、海马内微量注射K252a联合慢性应激组。采用Open field实验、糖水消耗实验、Morris水迷宫测定大鼠行为学的影响,ELISA法检测大鼠血清单胺递质含量的变化,放射免疫法观察大鼠血浆CRH、ACTH、CORT含量的变化,Western blotting观察大鼠海马BDNF、CREB、ERK1/2、BCL-2蛋白表达的变化。结果与空白对照组比较,CUMS组大鼠的活动量、糖水消耗量、学习记忆能力显著降低(P<0.05或P<0.01),HPA轴功能亢进(P<0.01),血清单胺递质水平降低(P<0.01),BDNF、CREB、ERK1/2、BCL-2的表达下调(P<0.01或P<0.05),而DMSO组上述指标差异无统计学意义;与DMSO比较,K252a组、K252a+CUMS组活动量、糖水消耗量、学习记忆能力显著下降(P<0.01或P<0.05),血清单胺递质水平下降(P<0.01或P<0.05),HPA轴功能显著上升(P<0.01或P<0.05),海马BDNF、CREB、ERK1/2、BCL-2的表达显著下降(P<0.01或P<0.05);与CUMS组比较,K252a组、K252a+CUMS组大鼠上述指标差异无显著性;与K252a组比较,K252a+CUMS组大鼠上述指标差异无显著性。结论从行为学、血液学、分子生物学的不同角度分析表明,此模型与经典的慢性应激抑郁模型在表面效度、结构效度、功能效度上具有极大的相似性,可为病因研究和抗抑郁药物筛选提供一个可供选择的研究技术平台。

K252a对内毒素诱导急性肺损伤大鼠的保护作用

目的观察K252a(MLK3阻断剂)对内毒素性急性肺损伤大鼠肺病理组织学改变及生存率的影响。方法采用尾静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)复制内毒素性急性肺损伤模型。90只大鼠随机分为6组(n=15):对照组(control组)、LPS组、K252a 50μg/kg组(K50组)、K252a 75μg/kg组(K75组)、K252a100μg/kg组(K100组)和溶剂对照组(DMSO组)。模型制备成功后6 h取肺脏进行光镜检查,观察48 h内大鼠死亡情况并比较累计生存率。结果48 h内LPS组、K50组、K75组和K100组以及DMSO组大鼠生存率分别为6.3%、27%、72%、57%及6.7%。光镜下可见LPS组大鼠肺组织结构明显被破坏,主要表现为肺泡内出血、肺间质水肿、肺泡萎陷以及肺组织内大量炎性细胞浸润。与LPS组相比,预先应用K252a组肺组织的损伤程度较轻微、肺间隔轻度增宽、无明显出血、少量炎性细胞浸润,尤其K75组,减轻程度最明显。结论K252a延迟LPS大鼠死亡时间,并呈现剂量依赖性,75μg/kg K252a剂量可以明显提高其生存率。并可改善内毒素性急性肺损伤大鼠肺脏的病理组织学结果。

K252a对局灶性脑缺血大鼠神经保护作用的在体研究

目的研究K252a对大脑中动脉栓塞导致的大鼠局灶性脑缺血模型的作用。方法成年雄性SD大鼠，随机分为K252a组、溶剂对照组、手术组和假手术组，采用大脑中动脉栓塞法建立局灶性脑缺血模型，于造模前30min分别侧脑室注射K252a、溶剂或不予处理，造模前和复灌后24h分别进行行为学评分，动物处死后进行TTC染色，计算梗死体积百分比。结果K252a能够改善大鼠的行为，减少梗死体积。结论K252a对局灶性脑缺血导致的损伤具有保护作用。

K252a在大鼠海马全脑缺血/再灌介导的神经元损伤中对JNK下游信号通路的影响

目的检测K252a在大鼠海马全脑缺血/再灌介导的神经元损伤中对JNK下游信号通路的影响。方法采用SD大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,于缺血前20 min脑室注射K252a,用免疫沉淀、免疫印迹和免疫组化的方法研究K252a在大鼠海马全脑缺血/再灌注介导的神经元损伤中对JNK下游信号通路的影响。结果在海马的CA1区,K252a可以明显抑制脑缺血介导的JNK核底物c-jun的磷酸化和Fasl蛋白的表达,以及Fasl和Fas结合的增高。结论缺血前20 min脑室注射K252a可以明显抑制JNK介导的死亡受体信号通路。

K252型丝织机的电气控制

K252型丝织机除了在机械结构上采用了停车换梭,弹簧加压送经装置以外,比较多地应用电气装置,包括光电探纬、电子护经、电气缺纬停车、按钮操纵等,初步实现了电气自动控制。改善了操纵性能,大大简化了机械结构。这里就电气控制的有关方面,向大家介绍如下: 一、发讯装置: 机械设备采用继电器控制实现按钮化,本来是很普通的事情了。

原肌球蛋白受体激酶a受体阻断剂K252a抑制角膜新生血管的形成的作用机制研究

目的探讨原肌球蛋白受体激酶a(atropomyosin receptor kinase a,TrkA)受体阻断剂K252a对角膜碱烧伤后的大鼠新生血管生成的抑制作用及相关机制。方法选取60只SD大鼠制备角膜碱烧伤动物模型,随机均分为A、B、C及D组,分别给予50、100及200 nmol/L的K252a滴眼液和生理盐水滴眼,一日2次,连续14 d。于碱烧伤后D3、7和14,观察角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)生长情况;酶联免疫吸附试验法检测角膜组织中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α蛋白;免疫印迹法检测神经生长因子(nerve growth factor,NGF)/胞外信号调节激酶(extracellular signalregulated kinase,ERK)/血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达水平;碱烧伤后D14观察各组角膜组织形态学变化。结果碱烧伤后D3、7及14,D组的CNV长度和面积均大于其他3组(P<0.05),D组的TNF-α蛋白表达水平高于其他3组(P<0.05);D组的NGF、p-ERK及VEGF蛋白表达水平均高于其他3组(P<0.05),A~C组呈剂量依赖性逐渐下降趋势。D组大鼠角膜上皮层变薄,新生血管管腔较密集,大量炎性细胞浸润,基质层可见大量新生血管形成并充满红细胞;A~C组角膜组织病理较D组改善,C组优于A和B组。结论TrkA受体阻断剂K252a可减少碱烧伤引起的CNV形成,降低炎症因子水平,可能与其抑制NGF表达及ERK-VEGF通路激活有关。

“通督解郁”针刺在CUMS抑郁模型大鼠前额叶皮质BDNF/TrkB/CREB通路的作用效应

目的:探究K252a的作用下,“通督解郁”针刺在慢性温和不可预知应激(CUMS)模型大鼠前额叶皮质BDNF/TrkB/CREB通路的作用机理。方法:64只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组、针刺组、模型+DMSO组、模型+K252a组、氟西汀+K252a组和针刺+K252a组,每组8只。造模在CUMS结合孤养法外,针刺组、针刺+K252a组和氟西汀组、氟西汀+K252a组在造模前30 min分别施行手针百会、神庭,电针内关、太冲治疗(频率2 Hz,连续波,电流1 mA,留针30 min)和灌胃治疗;模型+DMSO组和模型+K252a组、氟西汀+K252a组及针刺+K252a组分别在造模前1 h侧脑室注射DMSO溶液和K252a,共21 d。行为学采用体质量、糖水偏好实验以及强迫游泳实验进行评价;免疫组化检测大鼠前额叶组织BDNF、TrkB和CREB阳性细胞平均光密度值IOD;Western blot及PCR法检测大鼠前额叶皮质中相关蛋白及mRNA表达。统计学分析采用LSD检验和非参数检验。结果:与空白组比较,模型组大鼠的体质量差、糖水偏好指数SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达均明显下调,差异具有统计学意义(P<0.01),强迫游泳的不动时间IT明显上调,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,针刺组、氟西汀组大鼠的体质量差、SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达均明显上调,差异具有统计学意义(P<0.01),IT下调,差异具有统计学意义(P<0.01),模型+K252a组大鼠的体质量差、SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达减少,差异具有统计学意义(P<0.05),IT增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。与针刺组比较,针刺+K252a组大鼠的体质量差、SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达均减少,差异具有统计学意义(P<0.05),IT增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:“通督解郁”针刺对CUMS模型大鼠的抑郁行为有明显改善作用,其机制可能上调了前额叶皮质上的BDNF/TrkB/CREB通路,从而起到治疗抑郁症的作用。

DAPT与K252a联用体外抑制人脑胶质瘤U251MG细胞的生长

目的探讨Notch信号抑制剂(2S)-N-N-(3,5-氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)与神经营养素受体高亲和力的酪氨酸激酶受体家族(Trks)阻断剂K252a联用对人脑胶质瘤U251MG细胞的抑制作用。方法应用DAPT和K252a单独或联用处理U251MG细胞,噻唑蓝比色实验检测细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测p-TrkA、JNK、p-JNK、Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2和Bcl-xL等蛋白的表达。结果 DAPT和K252a均能呈时间与剂量依赖性抑制体外胶质瘤细胞的活性。K252a200、100和50nmol/L与DAPT 2.5μmol/L联合用药24、48和72h的细胞活力均低于单独使用K252a或DAPT(P<0.05)。两药联用可以增加sub-G1期细胞,即促进细胞凋亡。与K252a100nmol/L或DAPT 2.5μmol/L单用比较,K252a100nmol/L与DAPT 2.5μmol/L联用降低了p-TrkA的量,对于JNK的表达基本没影响,但可增加p-JNK的表达。可活化Caspase-3和Caspase-9,同时减少Bcl-xL的表达,但对Bax和Bcl-2的表达基本没影响。结论 DAPT能抑制U251MG的细胞活性。联合DAPT用药能增强K252a对人脑胶质瘤细胞U251MG的毒性。

k252a抑制BDNF—TrkB信号传导通路对电刺激点燃大鼠Arc表达及癫痫发生的影响

目的探讨BDNF—TrkB信号传导通路与杏仁核电刺激点燃大鼠Arc表达及癫痫发生的关系。方法雄性sD大鼠随机分为空白组、假手术组、杏仁核点燃组（单纯点燃组、k252a注射组、DMSO对照组）。应用Mpha—Lab4通道信号采集及处理系统记录大鼠脑电活动。运用免疫组化检测其Arc蛋白的表达水平，采用RT—PCR、原位杂交检测ArcmRNA在海马中表达水平。结果k252a注射组大鼠V级发作持续时间（33．00±1．41）s显著低于单纯点燃组（60．50±2．07）s、DMSO对照组（60．00±1．79）s大鼠V级发作持续时间（P〈0．01）。k252a注射组3h、6hArc阳性细胞百分率显著低于单纯点燃组、DMSO对照组3h、6hArc阳性细胞百分率（P〈0．01），12h时5组间Arc阳性细胞百分率相比表达差异无统计学意义（F=0．684，P〉0．05）。RT—PCR、原位杂交结果显示：k252a注射组1h、3hArcmRNA表达量显著低于单纯点燃组、DMSO对照组1h、3hArcmRNA表达量（P〈0．01）。6h时5组间ArcmRNA相比表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论k252a能够抑制BDNF—TrkB信号传导通路对Arc表达的诱导作用从而使癫痫发作的持续时间缩短。

阻断TrkB-BDNF信号传导通路对神经母细胞瘤细胞生长及凋亡的影响

目的脑源性神经生长因子(BDNF)和其酪氨酸激酶受体B(TrkB)与神经母细胞瘤(NB)细胞的化疗耐药及恶性预后密切相关。该研究探讨阻断TrkB-BDNF信号传导通路后,NB细胞对化疗药物敏感性的变化。方法常规培养SH-SY5Y NB细胞,用nM浓度全反式维甲酸(ATRA)诱导TrkB高表达,加入BDNF、化疗药顺铂(CDDP)和特异性酪氨酸酶抑制剂K252a处理。MTT实验方法检测应用K252a前后细胞的存活率的变化;同时应用Western-blot方法检测应用K252a前后TrkB的磷酸化水平的变化;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;透射电镜(TEM)观察凋亡细胞的形态与结构。结果ATRA+BDNF+CDDP组细胞的存活率及凋亡率与对照组相比,差异无显著性(P>0.05)。而经K252a处理后,细胞对顺铂的敏感性增加,细胞的存活率明显降低,凋亡率明显升高,差异有显著意义。Western-blot分析显示K252a能够阻断TrkB的磷酸化。结论阻断TrkB-BDNF信号传导通路可提高NB的化疗敏感性,逆转耐药。

神经生长因子对人视网膜血管内皮细胞的影响

【目的】观察神经生长因子(NGF)及TrKa阻断剂K252a对体外培养的人视网膜血管内皮细胞(HRCEC)增殖的影响。【方法】MTT法检测不同因子(NGF各浓度组、NGF+K252a各浓度组、bFGF组、bFGF+K252a组和正常培养液组)对正常和缺氧条件下培养的HRCEC的影响。【结果】随NGF浓度增加(20、50、100ng/ml),HRCEC细胞数目明显增多(正常氧浓度NGF组分别为0.254±0.033、0.696±0.029、1.136±0.051;缺氧条件相应各组为0.422±0.036、0.798±0.044、1.376±0.052,P均<0.05)。随K252a浓度增加(50、100、200nmol/L),NGF+K252a组正常氧浓度时分别为0.864±0.067、0.496±0.025、0.202±0.078,缺氧条件时相应为1.042±0.047、0.700±0.065、0.401±0.078,较同浓度NGF(100ng/ml)组HRCEC细胞数目减少(P<0.05),随K252a浓度增加HRCEC细胞数目减少趋势愈加显著(P均<0.05)。【结论】NGF可促进HRCEC的增殖,该作用可被特异性TrkA阻断剂K252a所阻断。

BDNF/TrkB通路活化星形胶质细胞对大鼠神经病理性痛的影响

目的观察外源性脑源性神经营养因子(BDNF)对大鼠机械痛阈和星形胶质细胞的影响,探讨BDNF参与疼痛调控的可能机制。方法将30只鞘内置管成功的大鼠随机分为空白对照组、安慰剂组、BDNF组、BDNF+星形胶质细胞抑制剂组(BDNF+氟代柠檬酸组)及BDNF+酪氨酸激酶受体B(TrkB)抑制剂组(BDNF+K252a组),每组6只。予鞘内注入药物,1次/d×7 d。每次注药前1 h测定50%机械缩爪阈值(50%PWT);末次给药后1 h取脊髓腰膨大,Western blotting法测定胶质细胞纤丝酸性蛋白(GFAP)及磷酸化TrkB的蛋白表达。结果 BDNF组大鼠后肢50%PWT较空白对照组显著下降(P<0.05);给药后第7天,BDNF组大鼠脊髓腰膨大GFAP和磷酸化TrkB的蛋白表达较空白对照组显著升高(P<0.01)。BDNF+氟代柠檬酸组和BDNF+K252a组50%PWT和GFAP蛋白表达水平与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。BDNF+K252a组磷酸化TrkB的蛋白表达与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BDNF可能通过磷酸化TrkB受体使脊髓星形胶质细胞活化,进而参与神经病理性痛的发生和发展过程。

神经生长因子对大鼠骨髓基质细胞成骨向分化的影响

目的:观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的影响。方法:5周龄雄性SD大鼠,贴壁法培养股骨、胫骨BMSCs。实验分为空白对照组、NGF组、K252a+NGF组和K252a组。在加入NGF前,按分组加入酪氨酸激酶A(TrkA)受体特异性抑制剂K252a孵育30min。通过MTT法检测24h、48h和72h细胞增殖情况,PNPP法检测成骨诱导3d、5d和7d细胞碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性,茜素红S钙染法观察成骨诱导14d矿化结节量。结果:同一观察时间点,4组之间BMSCs的增殖差异无统计学意义。成骨诱导3d、5d,NGF组ALP水平显著高于空白对照组(P<0.5);与NGF组相比,K252a+NGF组ALP水平显著降低(P<0.05);7d时,它们之间差异无统计学意义。成骨诱导14d,NGF组钙结节数量和面积显著高于空白对照组;阻断TrkA受体后,K252a+NGF组钙结节数量和面积明显降低。结论:NGF可能通过TrkA受体,在一定程度上促进大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化、增强其矿化能力,且此促进作用可以被TrkA受体抑制剂K252a阻断;阻断TrkA受体与否,NGF均不能促进大鼠骨髓基质细胞增殖。

梓醇保护L-谷氨酸和Aβ_(25-35)损伤PC12细胞作用比较

目的观察梓醇对L-Glu和Aβ25-35损伤PC12细胞的保护作用的异同。方法常规培养神经元样PC12细胞,预先加入梓醇及对照生理盐水24 h后分别加L-Glu 5 mmol/L和Aβ25-3520μmol/L损伤24 h,K252a干预组细胞在梓醇前1 h加入200 nmol/LK252a。MTT法测定细胞存活率,放射配基结合分析测定M2受体密度。结果梓醇100μmol/L明显提高细胞存活率(P<0.01),10μmol/L、100μmol/L升高M2受体密度(P<0.05,P<0.01),K252a部分阻断梓醇对Aβ25-35损伤细胞的保护作用,对梓醇保护L-Glu损伤的阻断作用更强。结论梓醇对L-Glu和Aβ25-35损伤PC12细胞保护作用有差异。

NGF对人视网膜血管内皮细胞体外成管作用的影响

目的探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对人视网膜血管内皮细胞(human retinal vascular endothelial cells,HRVEC)体外形成毛细血管管腔的影响。方法20g.L-1胰蛋白酶消化人眼球视网膜组织,内皮细胞培养液培养HRVEC,第Ⅷ因子相关抗原抗体DAB染色法及荧光染色法进行HRVEC的组织化学鉴定。取第3代HRVEC接种于铺有基质胶(Matrigel)的24孔板(每孔200×103个细胞),分为100μg.L-1NGF、100μg.L-1NGF+200nmol.L-1K252a、50μg.L-1碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)、50μg.L-1bFGF+200nmol.L-1K252a和对照组(人内皮细胞培养液)共5组,1h后各组依次添加各种培养液200μL培养12h后观察照相,分析比较5组新生毛细血管结构及面积。结果接种后8d左右梭形HRVEC细胞铺满培养瓶,第Ⅷ因子相关抗原鉴定阳性;测量5组新生毛细血管面积依次为:(2.76±0.31)mm2、(1.79±0.62)mm2、(2.99±0.58)mm2、(2.86±0.61)mm2、(1.41±0.69)mm2;100μg.L-1NGF、50μg.L-1bFGF组HRVEC均形成完整的管状结构,小管面积均明显大于对照组(均为P<0.05);100μg.L-1NGF+200nmol.L-1K252a组小管结构完整性被打破,小管面积小于100μg.L-1NGF组(P<0.05);50μg.L-1bFGF+200nmol.L-1K252a组小管面积、结构与50μg.L-1bFGF组比较无明显改变(P>0.05)。结论NGF可在体外促进HRVEC形成新生毛细血管管腔,K252a可抑制NGF促进HRVEC形成新生毛细血管管腔的作用,但k252a不能阻断bFGF的作用。

脑源性神经营养因子在着床前小鼠胚胎中的表达及其对胚胎发育的影响

目的检测脑源性神经营养因子（BDNF）及其受体TrkB在植入前胚胎中的表达情况,探讨BDNF对小鼠早期胚胎发育和着床过程中的作用。方法收集小鼠受精后1～4d的胚胎,利用免疫组化和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测BDNF及其受体TrkB在各阶段胚胎中的表达情况。将2细胞阶段的胚胎放入添加不同浓度的BDNF的培养基中,添加或不添加TrkB受体阻断剂k252a/k252b,观察胚胎发育情况,并对形成的囊胚进行细胞计数。在注射人绒毛膜促性腺激素（HCG）后72h、76h、84h和88h分别腹腔注射10μg K252a/k252b,收集胚胎,计算扩张期囊胚数和囊胚细胞数。结果 BDNF及TrkB均表达于小鼠植入前各阶段的胚胎中,在培养基中添加BDNF后能够促进小鼠胚胎的体外发育,能够提高囊胚形成率和囊胚孵化率,并能够提高滋养层细胞数,此作用能够通过TrkB受体阻断剂k252a而阻断。体内研究进一步证实,k252a处理后能够抑制囊胚细胞数而明显抑制早期胚胎发育。结论 BDNF/TrkB信号系统可能通过某种自分泌或旁分泌的作用方式促进植入前胚胎的发育,同时也可能参与胚胎的着床过程。

神经营养因子酪氨酸激酶受体B对人永生化成骨细胞hFOB1.19恶性转化细胞体外侵袭力的影响

目的研究神经营养因子酪氨酸激酶受体B(neurotrophic tyrosine kinase receptor B,TrKB)对恶性转化人永生化成骨细胞hFOB1.19体外侵袭力的影响,探讨TrKB在骨肉瘤侵袭和转移机制中发挥的作用。方法RT-PCR和免疫荧光细胞染色检测hFOB1.19恶性转化细胞和SaOS-2骨肉瘤细胞中TrKB的mRNA和蛋白表达水平;进一步研究hFOB1.19恶性转化细胞中TrKB的功能,处理组hFOB1.19恶性转化细胞加入特异性酪氨酸激酶抑制剂K252a处理24h,非处理组加入DMSO作对照,倒置相差显微镜下观察细胞形态;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;actin免疫荧光细胞染色检测细胞微丝骨架。结果TrKB在hFOB1.19恶性转化细胞中mRNA和蛋白表达水平均明显高于SaOS-2骨肉瘤细胞(P<0.05);K252a处理组hFOB1.19恶性转化细胞和未处理组相比,细胞变圆、聚集甚至发生融合,侵袭能力明显减弱(P<0.01),微丝回缩变短,排列紊乱。结论人永生化成骨细胞hFOB1.19恶性转化细胞中TrKB的高表达可促进该细胞的体外高侵袭力;该受体被阻断后,可能通过改变细胞微丝骨架结构从而降低细胞的体外侵袭力;TrKB可能在骨肉瘤侵袭和转移机制中起着促进作用。