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组蛋白去甲基化酶KDM5A调控H3K4me3参与神经管畸形发生的分子机制
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作者 李建婷 解琪 +5 位作者 谷小龙 曹志华 彭志伟 赵虹 刘志贞 解军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期629-637,共9页
神经管畸形(NTDs)的病因与防治是出生缺陷领域研究的重点,叶酸可以预防神经管畸形但其机制不明。本文借助低叶酸细胞模型和低叶酸NTDs小鼠模型通过染色质免疫共沉淀、Cut&Tag等技术,探讨了组蛋白去甲基化酶lysine demethylase 5A(KD... 神经管畸形(NTDs)的病因与防治是出生缺陷领域研究的重点,叶酸可以预防神经管畸形但其机制不明。本文借助低叶酸细胞模型和低叶酸NTDs小鼠模型通过染色质免疫共沉淀、Cut&Tag等技术,探讨了组蛋白去甲基化酶lysine demethylase 5A(KDM5A)及其调控的下游组蛋白H3K4me3修饰在叶酸缺乏导致的NTDs发生中的潜在分子机制。结果显示,低叶酸的细胞模型中,qRT-PCR、Western印迹结果显示,KDM5A分子表达明显下降(P<0.05)。作为组蛋白H3K4me3调控的上游关键酶,进一步通过染色质免疫共沉淀ChIP、ChIP-qPCR实验证实,叶酸缺乏下组蛋白H3K4me3在神经发育基因Axin 2和Atoh 1基因启动子区富集增加(P<0.05)。通过构建KDM5A基因敲除细胞模型,借助Cut&Tag试验证实,KDM5A基因敲除后H3K4me3主要富集在神经发育基因上。最后在低叶酸导致的NTDs小鼠模型的脑组织中,RT-qPCR、Western印迹以及ChIP-qPCR实验显示,E9.5 d的NTDs胎鼠脑组织中KDM5A表达下降(P<0.05),Axin2、Atoh1表达升高(P<0.05),Axin2、Atoh 1基因启动子区的H3K4me3富集增多(P<0.05)。综上所述,KDM5A蛋白在叶酸缺乏导致的NTDs中发挥重要作用,其可通过调控下游H3K4me3进而调控神经发育靶基因Axin2、Atoh 1异常表达,介导NTDs的发生。本研究从叶酸缺乏介导KDM5A调控组蛋白修饰来探讨NTDs的发病机制,为降低出生缺陷,促进生殖健康提供依据。 展开更多
关键词 神经管畸形 叶酸 组蛋白去甲基化酶5A 组蛋白H3K4me3
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基于生物信息学方法和动物实验方法获取多房棘球蚴病组蛋白H3K4ME1的生物学功能和信号通路信息
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作者 朱鑫琳 陈佳昕 任利 《中国高原医学与生物学杂志》 CAS 2024年第2期124-130,共7页
目的基于生物信息学方法和动物实验方法获取多房棘球蚴病组蛋白H3K4ME1的生物学功能和信号通路信息。方法1.提取冻存组织细胞核。2.构建cut&tag文库。3.分析生物信息:1)评估多房棘球蚴病组蛋白H3K4ME1的测序数据;2)确定reads在基因... 目的基于生物信息学方法和动物实验方法获取多房棘球蚴病组蛋白H3K4ME1的生物学功能和信号通路信息。方法1.提取冻存组织细胞核。2.构建cut&tag文库。3.分析生物信息:1)评估多房棘球蚴病组蛋白H3K4ME1的测序数据;2)确定reads在基因组上的分布;3)分析单个样本富集区间信息;4)分析peak转录因子;5)分析与Peak关联基因的GO功能富集、KEGG通路富集情况;6)分析差异关联基因基本情况;7)分析差异关联基因的GO功能富集情况;8)分析差异关联基因的KEGG通路富集情况。结果1.提取冻存组织细胞核:在显微镜下观察到细胞核计数>100000,表示细胞核提取成功。2.测序文库构建后,用qubit软件检查测序文库,结果显示合格。3.生物信息分析结果:1)实验组与参考基因库之间的数据相似程度>98%(测序数据良好),可进行下一步检测;2)多房棘球蚴病组和健康小鼠组的reads在TSS明显起峰;3)通过单个样本的富集,筛选出显著性Peak;4)与peak关联的转录因子主要集中在zf-C2H2、Homeobox和BHLH等;5)与Peak关联基因的GO功能主要富集在细胞蛋白大分子定位、细胞发育调节、解剖结构形态调控等生物学过程,与peak关联基因的KEGG通路主要富集在MAPK、cGMP-PKG、Hippo等信号通路;6)多房棘球蚴病组与健康小鼠组的组蛋白H3K4ME1存在5547个差异关联基因,其中上调基因2556个、下调基因2929个;7)组蛋白H3K4ME1差异关联基因GO功能富集分析的生物过程主要有细胞投射组织的正向调节、GTPase的活性调节等,细胞组分主要有细胞投影膜、突触等,分子功能主要有肌动蛋白结合、细胞黏附分子结合等;8)组蛋白H3K4ME1差异关联基因KEGG通路富集分析主要分布在MAPK、Wnt、Rap1等信号通路上。结论获得了多房棘球蚴病组蛋白H3K4ME1的生物学功能和信号通路信息。 展开更多
关键词 多房棘球蚴病 组蛋白H3K4ME1 生物学 信号通路
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EML3与H3K4M融合蛋白表达质粒的构建及蛋白的表达与纯化
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作者 王卓文 刘艳丽 《中国科技论文在线精品论文》 2024年第1期79-90,共12页
目的:研究获得N端/C端融合组蛋白H3K4M小肽的EML3融合蛋白的方法。方法:将组蛋白H3(aa1~15)小肽编码区融合进表达EML3 Agenet结构域重组质粒中,得到N端/C端融合表达H3K4M的质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中。经扩大培养,加入IPTG后在15... 目的:研究获得N端/C端融合组蛋白H3K4M小肽的EML3融合蛋白的方法。方法:将组蛋白H3(aa1~15)小肽编码区融合进表达EML3 Agenet结构域重组质粒中,得到N端/C端融合表达H3K4M的质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中。经扩大培养,加入IPTG后在15℃条件下诱导6×His标签EML3融合蛋白的表达。经镍柱亲和层析及凝胶过滤层析进行纯化后,通过SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色检测蛋白的纯度。结果:通过质粒单点突变、质粒酶切、PCR克隆以及同源重组连接,成功构建EML3 N/C端融合组蛋白H3K4M的重组质粒,测序证实序列正确,而且重组质粒可在大肠杆菌中成功诱导融合蛋白的表达。其中EML3C端融合组蛋白H3K4M可通过凝血酶酶切从而得到游离的H3K4M小肽以及EML3 Agenet结构域蛋白。结论:成功构建EML3融合组蛋白H3K4M重组质粒,并诱导表达及纯化得到高纯度的EML3融合蛋白。 展开更多
关键词 微生物药物学 组蛋白H3K4M小肽 EML3 Agenet结构域 融合蛋白 质粒构建 蛋白表达纯化
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鸡卵泡颗粒层组蛋白H3K4me3和H3K27me3的表达研究
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作者 李春苗 贾雪波 +3 位作者 王钱保 黄正洋 黄华云 赵振华 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第4期621-626,共6页
卵母细胞成熟过程受组蛋白H3K4me3(trimethylation of lysine 4 on histone 3)和H3K27me3(trimethylation of lysine 27 on histone 3)及其相关的甲基化和去甲基化酶的调控,因此考虑对鸡的卵泡发育也存在一定的影响。选取“苏禽3号”配... 卵母细胞成熟过程受组蛋白H3K4me3(trimethylation of lysine 4 on histone 3)和H3K27me3(trimethylation of lysine 27 on histone 3)及其相关的甲基化和去甲基化酶的调控,因此考虑对鸡的卵泡发育也存在一定的影响。选取“苏禽3号”配套系第一母本为研究对象,采用Western blot法探究组蛋白H3K4me3和H3K27me3在鸡卵泡不同发育阶段颗粒层中蛋白的表达模式。结果表明:在苏禽3号卵泡颗粒层中,组蛋白H3K4me3在卵泡发育不同阶段表达模式呈降低→升高→降低→升高的波浪形趋势,波浪变化较为平缓,在F5、F2和F13个表达高点的表达量与SWF(small white follicle)、LWF(large white follicle)、SYF(small yellow follicle)和F34个表达低点的表达差异显著(P<0.05)。组蛋白H3K27me3在不同发育阶段表达模式亦呈波浪形表达趋势,波浪变化起伏较明显,在SWF、SYF和F33个表达高点的表达量与F5、F4、F1和F24个表达低点的表达差异显著(P<0.05)。相关性分析显示,组蛋白H3K4me3与H3K27me3在不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达呈较强的负线性相关(R=-0.808,P=0.000)。结果提示:组蛋白H3K4me3和H3K27me3在不同发育阶段卵泡颗粒层中的表达具有组织差异性,呈负相关的动态修饰性,可能共同协调卵泡生长过程中各基因的表达与功能,研究结果为鸡繁殖性状调控机理提供了理论依据。 展开更多
关键词 卵泡 颗粒细胞 组蛋白 H3K4me3 H3K27me3
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基于高通量测序的梅花鹿卵巢衰老的转录组分析 被引量:1
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作者 林乐丰 刁云飞 +4 位作者 范冰峰 刘理想 邵静 赵向远 许保增 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3157-3170,共14页
【目的】获取青年梅花鹿和老年梅花鹿卵巢组织的转录组信息,为深入研究梅花鹿卵巢衰老的潜在机制提供依据。【方法】以4岁龄青年梅花鹿和10岁龄老年梅花鹿卵巢作为试验样本,对样本进行石蜡切片、苏木精-伊红染色和卵泡计数;用Trizol法... 【目的】获取青年梅花鹿和老年梅花鹿卵巢组织的转录组信息,为深入研究梅花鹿卵巢衰老的潜在机制提供依据。【方法】以4岁龄青年梅花鹿和10岁龄老年梅花鹿卵巢作为试验样本,对样本进行石蜡切片、苏木精-伊红染色和卵泡计数;用Trizol法提取卵巢样本RNA构建转录组文库,应用Illumina HiSeq TM 2000测序平台测序,对测序结果进行差异表达基因、GO功能、KEGG通路和蛋白互作网络分析,并挑选部分差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证。通过RIPA裂解液提取卵巢样本蛋白并对组蛋白H3赖氨酸4三甲基化(H3K4me3)蛋白在青年和老年梅花鹿中的表达情况进行Western blotting检测。【结果】组织学分析结果表明,老年梅花鹿的卵巢卵泡数显著低于青年梅花鹿(P<0.05),而闭锁卵泡数极显著高于青年梅花鹿(P<0.01)。转录组学分析结果表明,老年和青年梅花鹿卵巢间共有1477个差异表达基因,其中表达上调基因503个,表达下调基因974个。GO功能和KEGG通路富集结果表明,免疫系统过程、转录、DNA损伤修复、炎症反应、凋亡等生物事件与卵巢衰老有关。实时荧光定量PCR结果显示,共有17个基因在老年和青年梅花鹿卵巢中表达量差异达显著或极显著水平(P<0.05;P<0.01),表明RNA-Seq结果可靠。Western blotting结果表明,H3K4me3蛋白在老年和青年梅花鹿卵巢中表达量存在显著差异(P<0.05)。【结论】青年和老年梅花鹿卵巢在卵泡数方面存在显著差异,通过RNA-Seq筛选出PI3K-Akt信号通路影响DNA损伤修复效率,参与梅花鹿卵巢衰老。H3K4me3在老年梅花鹿卵巢中高表达与转录激活有关。 展开更多
关键词 梅花鹿 卵巢衰老 RNA-SEQ H3K4me3
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缺氧环境下HIF-1α与H3K4的相互作用 被引量:2
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作者 江雪 王琳琳 +1 位作者 魏佑震 倪庆宾 《山东第一医科大学(山东省医学科学院)学报》 CAS 2023年第12期940-944,共5页
地球上的大多数生物依赖氧气来维持机体代谢内稳态,这个过程往往需要缺氧诱导因子‐1α(hypoxia inducible factor‐1α,HIF‐1α)对氧气变化的感知和应答。随着研究的不断深入,缺氧状态下的组蛋白修饰和基因调控分子机制逐渐清晰,其中... 地球上的大多数生物依赖氧气来维持机体代谢内稳态,这个过程往往需要缺氧诱导因子‐1α(hypoxia inducible factor‐1α,HIF‐1α)对氧气变化的感知和应答。随着研究的不断深入,缺氧状态下的组蛋白修饰和基因调控分子机制逐渐清晰,其中,组蛋白H3赖氨酸K4(histone 3 lysine 4,H3K4)作为基因转录激活的重要组蛋白修饰位点受到越来越多的关注。缺氧环境下,HIF‐1α与H3K4变化趋势一致,H3K4去乙酰化修饰能控制HIF‐1α的稳定性,而部分H3K4去甲基化酶可能是HIF‐1α的直接作用靶点,且HIF‐1α可募集H3K4甲基转移酶共同激活相应靶基因。本综述探讨HIF‐1α与H3K4之间的相互作用关系,以更详细地了解HIF-1α应对缺氧环境时复杂的生物学过程。 展开更多
关键词 缺氧 HIF-1Α H3K4 相互作用
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骨髓间充质干细胞机械刺激成骨的记忆效应 被引量:1
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作者 陈春晓 姜乐涛 +6 位作者 沈悦 闫家凯 李克 石宇 林文正 李翰文 陈昊 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第10期1501-1506,共6页
背景:骨髓间充质干细胞作为组织工程的理想种子细胞,已证实力学刺激有引导其分化的作用。研究表明,干细胞存在着机械记忆,即力学刺激所引起的改变可能会长期影响干细胞的命运。目的:观察骨髓间充质干细胞对力学刺激的记忆效应,解析其发... 背景:骨髓间充质干细胞作为组织工程的理想种子细胞,已证实力学刺激有引导其分化的作用。研究表明,干细胞存在着机械记忆,即力学刺激所引起的改变可能会长期影响干细胞的命运。目的:观察骨髓间充质干细胞对力学刺激的记忆效应,解析其发生的表观遗传学机制。方法:(1)分离原代小鼠骨髓间充质干细胞,检测其三系分化能力,传至第3代待用;(2)利用拉伸仪,体外给予小鼠骨髓间充质干细胞机械刺激,检测细胞拉伸前后的成骨分化情况;(3)流式细胞仪检测拉伸后细胞干性;(4)将拉伸处理与未处理的细胞消化后铺种在常规12孔板,继续培养14 d后检测细胞的成骨分化情况;(5)免疫荧光染色检测并筛选造成干细胞机械记忆的关键组蛋白修饰变化,初步明确表观遗传调控的可能机制。结果与结论:(1)5%形变,0.5 Hz,6 h/d,为期7 d的机械刺激可以引导小鼠骨髓间充质干细胞向成骨方向分化;(2)重新铺种培养皿后,拉伸处理后的细胞仍能保持干性且继续向成骨方向分化;(3)结果显示,骨髓间充质干细胞对机械刺激存在记忆效应,这种效应可能与力学刺激导致的组蛋白H3K4me3修饰有关。 展开更多
关键词 细胞机械记忆 表观遗传修饰 骨髓间充质干细胞 成骨分化 H3K4me3
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组蛋白去甲基化酶LSD1去除亲代组蛋白H3K4me2促进复制偶联的核小体装配
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作者 杨笑菡 《延安大学学报(医学科学版)》 2023年第3期16-22,共7页
目的探索真核细胞内影响与调控复制偶联的核小体组装及解聚的表观遗传学机制。方法人骨肉瘤细胞系(U2OS)转染对照和组蛋白H3K4去甲基化酶(lysine-specific demethylase 1,LSD1)siRNA,双胸苷阻滞或胸苷-诺考达唑联合阻滞同步化细胞,释放... 目的探索真核细胞内影响与调控复制偶联的核小体组装及解聚的表观遗传学机制。方法人骨肉瘤细胞系(U2OS)转染对照和组蛋白H3K4去甲基化酶(lysine-specific demethylase 1,LSD1)siRNA,双胸苷阻滞或胸苷-诺考达唑联合阻滞同步化细胞,释放后在不同时间点进行流式细胞术分析,检测LSD1敲低对细胞周期的影响;免疫印迹试验检测LSD1 siRNA敲低效率;U2OS细胞同步化后进行免疫荧光共聚焦显微镜观察,检测LSD1、组蛋白H3K4二甲基化、一甲基化(H3K4me2/1)在细胞周期中的表达水平;U2OS细胞转染对照、LSD1 siRNA后进行微球菌核酸酶(micrococcal nuclease,MNase)消化后检测核小体装配效率;免疫共沉淀实验检测与LSD1存在相互作用的体内蛋白。结果组蛋白H3K4去甲基化酶LSD1能促进复制偶联的核小体装配。结论复制前期LSD1催化亲代组蛋白H3K4me2去甲基化,导致H3K4me2被清除至一定水平,有助于复制偶联的核小体装配。本研究不仅揭示了LSD1之前未被阐明的生物学功能,同时拓宽了对表观遗传生物学功能的认知。 展开更多
关键词 复制 核小体装配 组蛋白H3K4去甲基化酶 组蛋白甲基化
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Long-read genome assemblies reveal a cis-regulatory landscape associated with phenotypic divergence in two sister Siniperca fish species
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作者 Guang-Xian Tu Xin-Shuang Zhang +8 位作者 Rui-Run Jiang Long Zhang Cheng-Jun Lai Zhu-Yue Yan Yan-Rong Lv Shao-Ping Weng Li Zhang Jian-Guo He Muhua Wang 《Zoological Research》 SCIE CAS CSCD 2023年第2期287-302,共16页
Due to the difficulty in accurately identifying structural variants(SVs) across genomes,their impact on cisregulato ry diverge n ce of closely related species,especially fish,remains to be explored.Recently identified... Due to the difficulty in accurately identifying structural variants(SVs) across genomes,their impact on cisregulato ry diverge n ce of closely related species,especially fish,remains to be explored.Recently identified broad H3K4me3 domains are essential for the regulation of genes involved in several biological processes.However,the role of broad H3K4me3 domains in phenotypic divergence remains poorly understood.Siniperca chuatsi and S.scherzeri are closely related but divergent in several phenotypic traits,making them an ideal model to study cis-regulatory evolution in sister species.Here,we generated chromosome-level genomes of S.chuatsi and S.scherzeri,with assembled genome sizes of 716.35 and740.54 Mb,respectively.The evolutionary histories of S.chuatsi and S.scherzeri were studied by inferring dynamic changes in ancestral population sizes.To explore the genetic basis of adaptation in S.chuatsi and S.scherzeri,we performed gene family expansion and contraction analysis and identified positively selected genes(PSGs).To investigate the role of SVs in cis-regulatory divergence of closely related fish species,we identified high-quality SVs as well as divergent H3K27ac and H3K4me3 domains in the genomes of S.chuatsi and S.scherzeri.Integrated analysis revealed that cis-regulatory divergence caused by SVs played an essential role in phenotypic divergence between S.chuatsi and S.scherzeri.Additionally,divergent broad H3K4me3 domains were mostly associated with cancer-related genes in S.chuatsi and S.scherzeri and contributed to their phenotypic divergence. 展开更多
关键词 cis-regulatory divergence Structural variants H3K27ac Broad H3K4me3 Siniperca chuatsi Siniperca scherzeri
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白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p的原核细胞表达及鉴定 被引量:6
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作者 孔倩倩 廖红 +3 位作者 李芳秋 马春芳 史利宁 胡毓安 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期919-921,930,共4页
目的原核细胞表达白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p,鉴定重组蛋白质的抗原性。方法用比对软件对白念珠菌H3K4甲基转移酶与其他物种甲基转移酶进行比对。选择与人类无同源性的抗原特异性片段,以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板... 目的原核细胞表达白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p,鉴定重组蛋白质的抗原性。方法用比对软件对白念珠菌H3K4甲基转移酶与其他物种甲基转移酶进行比对。选择与人类无同源性的抗原特异性片段,以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,PCR扩增Set1-208p的编码基因,以pET28a(+)为载体,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白质表达。用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊侵袭性白念珠菌感染(IC)患者血清进行抗原性鉴定。结果成功克隆了白念珠菌抗原特异性H3K4甲基转移酶片段Set1-208p基因并诱导表达,获得了纯化的重组肽段,所得蛋白质分子量(Mr)约为29 000,带有His标签,经western blot鉴定,诱导的重组蛋白可与IC患者血清特异性反应。结论成功诱导表达了具有良好抗原反应性的Set1-208p重组蛋白质,为建立相应的抗原、抗体ELISA检测方法提供基础。 展开更多
关键词 白念珠菌 H3K4甲基转移酶 基因克隆 原核细胞表达
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GnRH-a辅助治疗子宫内膜异位症疗效及对患者组蛋白H3K4甲基化水平的影响 被引量:12
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作者 金凤羽 《河北医学》 CAS 2017年第6期918-923,共6页
目的:探讨促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)辅助治疗子宫内膜异位症(EMS)疗效及对患者组蛋白3赖氨酸4(H3K4)甲基化水平的影响。方法:选取2015年1月至2016年6月我院收治的EMS患者96例为研究对象,均择期行腹腔镜手术,随机分为观察组、对... 目的:探讨促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)辅助治疗子宫内膜异位症(EMS)疗效及对患者组蛋白3赖氨酸4(H3K4)甲基化水平的影响。方法:选取2015年1月至2016年6月我院收治的EMS患者96例为研究对象,均择期行腹腔镜手术,随机分为观察组、对照组各48例,对照组术后给予米非司酮,观察组在此基础上予以GnRH-1,比较两组治疗有效率、妊娠率、复发率及治疗前后卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2),分析两组抗子宫内膜抗体阳性率(EMAB)、血管生成素-2阳性率(Ang-2)、H3K4甲基化、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、糖蛋白125(CA125),同时观察不良反应。结果:观察组治疗有效率97.92%、妊娠率29.17%明显高于对照组85.42%、10.42%(P<0.05),半年内复发率2.08%低于对照组16.67%(P<0.05);观察组治疗后血清FSH、LH、E2较对照组明显降低(P<0.05);治疗后观察组EMAB阳性率31.25%、Ang-2阳性率33.33%低于对照组,H3K4甲基化(0.21±0.07)%高于对照组(0.16±0.04)%(P<0.05);治疗后观察组血清TIMP-1(35.29±1.35)ng/m L、VEGF(121.19±1.56)pg/m L、CA125(19.23±1.67)U/m L较对照组显著下降(P<0.05);两组不良反应发生率10.42%、6.25%比较无显著差异(P>0.05)。结论:GnRH-a辅助治疗EMS疗效较米非司酮好,可显著降低患者激素、EMAB、Ang-2、血清TIMP-1、VEGF、CA125水平及复发率,提高H3K4甲基化水平及妊娠率,且安全性高,值得在临床推广应用。 展开更多
关键词 GNRH-A 子宫内膜异位症 疗效 H3K4 甲基化
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小鼠生发泡期卵母细胞成熟过程中转录沉默机制的探讨 被引量:2
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作者 夏梦 刘明兮 +3 位作者 周涛 何辉 万茹 霍然 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期956-961,共6页
目的:探讨小鼠生发泡卵母细胞成熟过程中发生大规模转录沉默的机制。方法:选用4~6周龄ICR雌性小鼠,分离生发泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞,运用RNA聚合酶Ⅱ抗体(anti-RNA PolⅡCTD,clone 4H8)及其羧基末端结构域(CTD)基团第2位丝... 目的:探讨小鼠生发泡卵母细胞成熟过程中发生大规模转录沉默的机制。方法:选用4~6周龄ICR雌性小鼠,分离生发泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞,运用RNA聚合酶Ⅱ抗体(anti-RNA PolⅡCTD,clone 4H8)及其羧基末端结构域(CTD)基团第2位丝氨酸磷酸化的抗体(anti-RNA PolⅡCTD Ser2-P,clone H5)、组蛋白H3K4/H3K9三甲基化的抗体(anti-H3K4me3、anti-H3K9me3)进行免疫荧光染色。观察伴随GV期小鼠卵母细胞染色质构型由非包围核仁(non-surround nucleolus,NSN)型转变为包围核仁(surround nucleolus,SN)型的过程,这两对标记物的表达及分布变化。结果:在NSN型的GV期卵母细胞中,RNA PolⅡCTD Ser2-P于核浆中呈特征性斑块状分布,同时H3K4me3在核浆中也显示强阳性信号;但在SN型卵母细胞中,RNA PolⅡCTD Ser2-P失去特征性分布,转变为核浆中弥漫性分布,H3K4me3的核浆中阳性信号也消失。结论:RNA聚合酶Ⅱ的活性降低及组蛋白修饰状态的改变在小鼠GV期卵母细胞成熟过程的大规模转录沉默中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 生发泡卵母细胞 转录沉默 RNA聚合酶Ⅱ 组蛋白H3K4/K9三甲基化
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H3K4me3高表达与肝癌患者较差生存预后相关 被引量:2
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作者 伍刚 何传超 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第6期893-899,共7页
目的:探讨检测肝癌组织中组蛋白第三亚基四号赖氨酸的三甲基化(H3K4me3)蛋白的表达与肿瘤病理特点和肝癌患者生存预后的相关性。方法:免疫组化和Western-blot检测H3K4me3和组蛋白甲基转移酶(SET and MYND domain-containing protein 3,S... 目的:探讨检测肝癌组织中组蛋白第三亚基四号赖氨酸的三甲基化(H3K4me3)蛋白的表达与肿瘤病理特点和肝癌患者生存预后的相关性。方法:免疫组化和Western-blot检测H3K4me3和组蛋白甲基转移酶(SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3)在肝癌组织(n=168)和细胞株中的表达。此外,实验结果还在另外一个肝癌组织芯片(n=147)中进行验证。H3K4me3表达的最佳分界点(optimal cut-point)由X-tile程序确定,患者的预后由Kaplan-meier生存曲线描述。结果:H3K4me3高表达于肝癌细胞系和肝癌组织,其高表达与肝癌尤其是早期TNM1/2期患者的较差总体生存显著相关。单因素和多因素分析均提示H3K4me3表达水平是患者预后的独立危险因素。此外,H3K4me3和SMYD3在两组肝癌组织中均存在正相关表达。结论:H3K4me3表达水平能成为肝癌患者术后生存的预测因子,其高表达可能与SMYD3有关。 展开更多
关键词 肝细胞癌 H3K4me3 SMYD3 生存 预后
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醒脑净注射液改善新生儿缺氧缺血性脑损伤的机制研究 被引量:1
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作者 刘颂华 方锦霞 严鹏科 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1277-1279,共3页
目的:探讨醒脑静注射液治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的机制。方法:建立新生儿缺氧缺血性损伤新生大鼠模型,将动物随机分为3组:假手术组、模型组和醒脑静组,每组24只。在不同时间点,收集各组脑组织,采用干湿质量法测定大鼠脑组织含水量,... 目的:探讨醒脑静注射液治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的机制。方法:建立新生儿缺氧缺血性损伤新生大鼠模型,将动物随机分为3组:假手术组、模型组和醒脑静组,每组24只。在不同时间点,收集各组脑组织,采用干湿质量法测定大鼠脑组织含水量,通过染色质免疫共沉淀及实时荧光定量PCR检测和比较各组脑组织HIF-1α在VEGF基因启动子的结合水平,以及VEGF启动子组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化(H3K27me3)和组蛋白H3赖氨酸4三甲基化(H3K4me3)的富集水平。结果:在各时间点,醒脑静治疗组HIF-1α结合在VEGF启动子上的水平较模型组均显著提高(P<0.05);醒脑静组VEGF启动子上H3K27me3富集水平较模型组显著降低(P<0.05),而H3K4me3富集水平显著升高(P<0.05)。结论:醒脑静注射液治疗HIBD的机制可能与促进HIF-1α结合到VEGF启动子上,促进VEGF的表达,同时改变VEGF启动子上H3K27me3和H3K4me3富集水平有关。 展开更多
关键词 HIBD 醒脑静 HIF-1Α VEGF H3K27me3 H3K4me3
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K_(10)H_3[Gd(SiMo_4W_7O_(39)_2]配合物界面扩渗Ce和Lu及其介导性能 被引量:16
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作者 周百斌 韦永德 李中华 《无机化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第8期761-763,共3页
ZHOU Bai-Bin *,1,2 WEI Yong-De 1 LI Zhong-Hua 1 ( 1 Department of Applied Chemistry,Ha rbin Institute of Technology £?Harbin£±£ì£°£°£°£±£(c)( 2 Department of Chemistry,Harbin Norm... ZHOU Bai-Bin *,1,2 WEI Yong-De 1 LI Zhong-Hua 1 ( 1 Department of Applied Chemistry,Ha rbin Institute of Technology £?Harbin£±£ì£°£°£°£±£(c)( 2 Department of Chemistry,Harbin Normal University£?Harbin£±£ì£°£°£?£°£(c) The air-solid interface reaction of Ce,Lu with K10 H 3[Gd (SiMo 4 W£*O£3£1£(c) 2]through chemistry-heated permeation is reported for the fi rst time£(r)The permeated complex is characterized by ICP and the result shows tha t the mini mum Ce,Lu can permeate into the inner sph ere of K 10 H £3 £?Gd £¨SiMo £′ W £* O £3£1 £(c) 2]The IR ,XRD patterns give the eviden ce that after permeation the comple x still keeps the Keggin structure,howe ver,its crystal structure is different from the complex before permeation£(r)The cond uctivity of the permeated complex has been measured with the four-electr ode method and the data show that the co nductivity of the complex after permeation is 10 6 times higher than that of the sample before permeation and reaches £′£(r)84 6×10 -1 S·cm -1 £(r)These indicate that the permeated c omplex is a good solid electrolyte and further appli cations are also expected£(r) 展开更多
关键词 K10H3[Gd(SiMo4W7O39)2] 配合物 界面扩渗 CE LU 介导性能 稀土元素 多金属氧酸盐 化学热扩渗 导电性
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层状K_4Ag_2Sn_3S_9·2H_2O的溶剂热合成与表征 被引量:10
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作者 白音孟和 纪敏 +3 位作者 刘新 安永林 贾翠英 宁桂铃 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第8期1391-1394,M003,共5页
用溶剂热法合成了 K4 Ag2 Sn3S9· 2 H2 O,通过单晶 X射线衍射、 DSC、 TG、 IR和紫外漫反射光谱等手段对其进行了表征 .结果表明 ,K4 Ag2 Sn3S9· 2 H2 O属单斜晶系 ,P2 1 / m空间群 ,a=0 .780 71 ( 2 ) nm,b=2 .73 5 0 8( 1 )... 用溶剂热法合成了 K4 Ag2 Sn3S9· 2 H2 O,通过单晶 X射线衍射、 DSC、 TG、 IR和紫外漫反射光谱等手段对其进行了表征 .结果表明 ,K4 Ag2 Sn3S9· 2 H2 O属单斜晶系 ,P2 1 / m空间群 ,a=0 .780 71 ( 2 ) nm,b=2 .73 5 0 8( 1 ) nm,c=1 .0 5 0 0 8nm,α=90°,β=1 0 3 .87( 6)°,γ=90°,Z=4.其层状结构内具有一维孔道 。 展开更多
关键词 溶剂热合成 K4Ag2Sn3S9·2H2O 层状结构
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H3K9ac、H3K4me2在卵巢浆液性上皮性肿瘤中的表达及意义 被引量:1
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作者 王蛟 杨清 毕芳芳 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第8期1917-1921,共5页
目的:探讨组蛋白H3第9位赖氨酸残基乙酰化(H3K9ac)及组蛋白H3第4位赖氨酸残基二甲基化(H3K4me2)在卵巢浆液性囊腺瘤、卵巢交界性浆液性囊腺瘤和卵巢浆液性囊腺癌组织中蛋白表达与浆液性上皮性卵巢癌发生、发展的关系及两者之间有无相关... 目的:探讨组蛋白H3第9位赖氨酸残基乙酰化(H3K9ac)及组蛋白H3第4位赖氨酸残基二甲基化(H3K4me2)在卵巢浆液性囊腺瘤、卵巢交界性浆液性囊腺瘤和卵巢浆液性囊腺癌组织中蛋白表达与浆液性上皮性卵巢癌发生、发展的关系及两者之间有无相关性。方法:应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(SP法)检测H3K9ac、H3K4me2在30例卵巢浆液性囊腺瘤组织、30例卵巢交界性浆液性囊腺瘤组织及40例卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达,观察表达差异并进行统计学处理。结果:H3K9ac在卵巢浆液性囊腺瘤组织中阳性表达率为93.33%,在卵巢交界性浆液性囊腺瘤组织中阳性表达率为66.67%,在卵巢浆液性囊腺癌中阳性表达率为42.50%,良性、交界性、恶性组织间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。在不同手术病理分期、不同组织学分级的卵巢浆液性囊腺癌组织中H3K9ac的阳性表达率有统计学差异(P<0.05)。H3K4me2在卵巢浆液性囊腺瘤组织中阳性表达率为90%,在交界性浆液性囊腺瘤组织中阳性表达率为73.33%,在卵巢浆液性囊腺癌中阳性表达率为52.50%,良性与交界性、交界性与恶性组织间比较差异无统计学意义(P>0.05),良性与恶性组织间比较差异有统计学意义(P<0.05)。在不同手术病理分期、不同组织学分级的卵巢浆液性囊腺癌组织中H3K4me2的阳性表达率无统计学差异(P>0.05)。H3K9ac、H3K4me2在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.732,P<0.001)。结论:H3K9ac、H3K4me2的低表达与浆液性上皮性卵巢癌的发生、发展有关,有可能成为浆液性上皮性卵巢癌诊断和治疗的新靶点。 展开更多
关键词 卵巢浆液性囊腺癌 H3K9ac H3K4me2 免疫组化
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Aβ通过Ash1l上调H3K4二甲基化水平抑制BDNF表达并介导海马神经元损伤 被引量:1
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作者 刘琪 徐志伟 +1 位作者 王立群 朱宗红 《医学研究杂志》 2018年第8期29-33,共5页
目的在Aβ处理海马神经元后,观测H3K4甲基化水平的变化,以及BDNF表达和神经元死亡的改变。方法在Aβ处理后,用蛋白免疫印迹以及染色质免疫共沉淀方法检测神经元中总H3K4甲基化水平和BDNF启动子H3K4甲基化水平。在si RNA敲减Ash1l后,通... 目的在Aβ处理海马神经元后,观测H3K4甲基化水平的变化,以及BDNF表达和神经元死亡的改变。方法在Aβ处理后,用蛋白免疫印迹以及染色质免疫共沉淀方法检测神经元中总H3K4甲基化水平和BDNF启动子H3K4甲基化水平。在si RNA敲减Ash1l后,通过荧光定量PCR和酶联免疫吸附的方法检测BDNF表达。同时,使用MTT实验检测敲减Ash1l后Aβ诱导海马神经元损伤的改变。结果在Aβ处理海马神经元后,BDNF启动子和总H3K4甲基化水平均显著上升,而敲减Ash1l可以阻止这一现象。另外,在敲减Ash1l后,Aβ诱导的BDNF表达下调被抑制,同时海马神经元损伤也得到缓解。结论 Ash1l蛋白被发现可以在Aβ多肽下游调节BDNF启动子区的H3K4Me2水平,通过抑制BDNF的表达促进神经元的死亡。 展开更多
关键词 Aβ多肽H3K4二甲基化 脑源性神经营养因子 海马神经元 阿尔茨海默病
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组蛋白赖氨酸去甲基化酶在肿瘤中的作用 被引量:2
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作者 李浒 张中国 +1 位作者 周震 张红胜 《生物技术通讯》 CAS 2018年第1期109-113,118,共6页
在肿瘤发生过程中,组蛋白赖氨酸去甲基化酶(LSD1)的表达失调是一个重要标志。LSD1能够于组蛋白H3的N端与H3K4me2/1和H3K9me2/1相互作用,并使其去甲基化,从而调控多种不同的生理过程。同时,LSD1表达水平变化还与多种基因如p53、DNMT1和E... 在肿瘤发生过程中,组蛋白赖氨酸去甲基化酶(LSD1)的表达失调是一个重要标志。LSD1能够于组蛋白H3的N端与H3K4me2/1和H3K9me2/1相互作用,并使其去甲基化,从而调控多种不同的生理过程。同时,LSD1表达水平变化还与多种基因如p53、DNMT1和EZH2等的表达水平相关联,在胚胎发育、细胞分化和肿瘤增殖转移过程中起重要作用。 展开更多
关键词 组蛋白赖氨酸去甲基化酶 H3K4me1/2 H3K9me1/2
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白色念珠菌H3K4甲基转移酶N端肽段抗体的ELISA检测方法建立
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作者 孔倩倩 马春芳 +4 位作者 蔡迁 廖红 韩丹丹 史利宁 李芳秋 《现代检验医学杂志》 CAS 2013年第2期10-13,共4页
目的建立检测人血清中抗白色念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段(N—terminal region of histone 3 lysine 4 methyhransferase,Setl-208p)IgG类抗体的ELISA方法,评估其在侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)患者中的早期诊断... 目的建立检测人血清中抗白色念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段(N—terminal region of histone 3 lysine 4 methyhransferase,Setl-208p)IgG类抗体的ELISA方法,评估其在侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)患者中的早期诊断价值。方法收集IC患者(105例)、定植患者(37例)、细菌感染患者(25例)、其他真菌感染患者(10例)以及健康体检者(200例)血清,用Setl-208p作为包被抗原,血清1:500稀释,以羊抗人IgG-HRP为二抗,测定人血清中相应的抗Setl-208p抗体水平,确定cut-off值并考查方法的敏感度、特异度和准确度。结果以重组Setl-208p抗原建立的ELISA法精密度良好,批内变异系数(coefficient of variation,CV)为5.5%,批间CV为10.4%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为91.8%,根据ROC曲线,选择吸光度(absorbance,A)值0.40作为cut off值,对IC的诊断敏感度为79.2%,特异度为90%,且与细菌感染及其他真菌感染病人(如曲霉)无非特异交叉反应。此外,IC患者中抗Setl-208p抗体阳性率(76.1%,80/105)显著高于念珠菌定植者抗Setl-208p抗体阳性率(32.4%,12/37)(χ^2=22.9,P〈0.01)。结论建立了检测抗白念珠菌抗Setl-208p抗体的ELISA法,在IC早期诊断中具有潜在应用价值。 展开更多
关键词 念珠菌 H3K4甲基转移酶 抗体 ELISA 血清学诊断
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