补骨脂素逆转K562/ADM多药耐药细胞系耐药性研究

目的:研究补骨脂素对白血病细胞阿霉素耐药株(K562/ADM)多药耐药(multidrugresistance,MDR)性的逆转作用及其机制。方法:采用MTT法检测药物细胞毒性作用,计算其逆转倍数。结果:补骨脂素在1～20μmol·L-1范围内,对K562和K562/ADM无明显细胞毒作用,但与ADM联合用药可使ADM对K562/ADM的IC50明显下降,补骨脂素(1～20μmol·L-1)能不同程度地降低ADM对K562/ADM细胞的IC50值。结论:补骨脂素能逆转K562/ADM细胞的多药耐药。

柴胡皂苷在体外对人白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用

目的:研究柴胡皂苷(SS)对白血病细胞株K562/ADM多药耐药性(MDR)的逆转作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法:分别以不同浓度(1～100 mg/L)的SS作用于体外培养的K562和K562/ADM细胞48h,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,确定SS的非毒性剂量;采用非毒性剂量SS 1.25、2.5和5.0 mg/L,分别与不同浓度(0.05～100 mg/L)阿霉素(ADM)联合作用,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度(IC50),计算逆转指数和两药相互作用系数(CDI),观察SS协同ADM作用后的细胞形态;利用流式细胞术检测SS联合ADM作用后K562/ADM细胞内ADM的蓄积程度、细胞凋亡和细胞周期变化。结果:随着SS浓度的增加,细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量-效应关系;SS的非细胞毒性剂量为5.0 mg/L,逆转倍数为21.5倍;SS协同ADM作用后形态学方法显示肿瘤细胞数量减少,并出现了大量凋亡细胞,呈剂量-效应关系;SS可明显提高ADM在K562/ADM细胞内的蓄积,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05);SS可增强ADM对K562/ADM细胞的凋亡诱导作用,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05);K562/ADM细胞被阻滞在G0/G1期,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05)。结论:SS对白血病耐药细胞株K562/ADM有增殖抑制和逆转多药耐药性的作用,其部分逆转机制可能是通过增加细胞内化疗药物蓄积,诱导细胞凋亡和使细胞阻滞在G0/G1期而实现的。

K562/ADM耐药细胞株的建立及其生物学特性的初步观察

我们建立的K562/ADM耐药细胞株,在ADM浓度为2.4μg/m1(4.46μM)中已稳定培养3.5个月,传了30—35代,K562/ADM亦具有多药耐受件(Multidrug Resistance,MDR)的特点,对ADM、VCR、AT—1258和DDP的耐受性分别为K562的114.7、94.0、13.3和7.4倍,但对5—FU不产生交叉耐药。K562和K562/ADM的倍增时间分别为19.2h和52.8h,集落生成率分别为37.5％和11.1％,K562染色体数为34—68,中位数为56;K562/MDM染色体数为32—90,中位数为50,K562/ADM可做为耐药机理和克服耐药措施研究的极好模型。

雄黄诱导K562/ADM细胞凋亡的研究

探讨雄黄诱导多药耐药细胞Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡的能力，并初步探讨其分子机制。方法：采用荧光标记形态学观察，流式细胞仪进行ＤＮＡ分析及测定细胞表面ｐ－ｇｐ的表达。结果显示：雄黄能明显诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡，且在４８ｈ后ｐ－ｇｐ的表达下调。

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性机制研究

目的 研究汉防己甲素 (TTD)对慢性粒细胞白血病急性变白血病细胞株K 5 62 /ADM多药耐药 (MDR )逆转的机理。方法 采用流式细胞仪检测细胞内化疗药物的浓度及细胞表面P糖蛋白 (P -gp)的表达 ;荧光定量PCR法检测MDR1mRNA ;通过流式细胞仪检测Anexin -V判断凋亡细胞的数量。结果 10 μmol/L的TTD处理K 5 62 /ADM细胞后 ,细胞内阿霉素 (ADM )的浓度明显提高 ;K 5 62 /ADM细胞MDR 1mRNA /P -gp的表达下降 ;TTD能增强ADM致细胞凋亡的作用。 结论 汉防己甲素的耐药逆转机制除了下调MDR 1mRNA /P -gp的表达引起细胞内抗癌药物的积聚外 。

苦参碱逆转人白血病K562/ADM细胞对阿霉素耐药性的研究

[目的 ]探讨苦参碱对人白血病K5 6 2 /ADM细胞对阿霉素耐药性的逆转作用。 [方法 ]MTT法测定苦参碱的细胞毒性及其对K5 6 2 /ADM细胞药敏性的影响 ,荧光分光光度法检测细胞内药物浓度的改变 ,流式细胞术检测耐药细胞凋亡百分率的变化。 [结果 ]苦参碱的非细胞毒性剂量为 5 0μg/mL ,低细胞毒性剂量为 12 5 μg/mL。 5 0 μg/mL苦参碱可增加K5 6 2 /ADM细胞内阿霉素(ADM )浓度和K5 6 2 /ADM细胞凋亡百分率 ,使K5 6 2 /ADM细胞的IC50 由原来的 35 .2 μg/mL降低至 15 .8μg/mL ,其逆转倍数为 2 .2倍。[结论 ]苦参碱可部分逆转人白血病K5 6 2 /ADM细胞对阿霉素的耐药性 ,其逆转机制与增加细胞内药物积累有关。

蝙蝠葛碱逆转K562/ADM细胞多耐药性的研究

目的 :研究具有钙拮抗作用的中药蝙蝠葛碱对多耐药性的逆转作用。方法 :选用异搏定作阳性对照 ,观察其对多药耐药细胞株K5 6 2 /ADM多药耐药性的逆转作用。结果 :蝙蝠葛碱在非细胞毒性剂量下能使K5 6 2 /ADM对阿霉素的浓度升高 ,但对细胞表面的糖蛋白P - 170却没有影响。结论 :蝙蝠葛碱具有逆转白血病细胞株K5 6 2

MnSOD模拟化合物通过线粒体途径诱导K562/ADM细胞凋亡

目的:观察锰超氧化物岐化酶模拟化合物(Mn-SODm)对人白血病K562/ADM耐药细胞凋亡诱导作用,并探讨其分子机制.方法:采用AnnexinV/PI双标记和细胞形态学法检测K562/ADM细胞凋亡;流式细胞术(FCM)检测细胞Bcl-2,Bax蛋白表达水平、线粒体跨膜电位(Δψm),细胞色素C(Cytc)含量和释放Caspase-3活性变化.结果:10,50mg/LMnSODm处理K562/ADM细胞后,AnnexinV/PI染色显示凋亡细胞明显增多,凋亡率分别为85.1%,96.8%;光学显微镜和透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;FCM检测发现Bcl-2蛋白表达下调32%～73%,Bax蛋白表达增高4～10倍;线粒体Δψm释放降低35%～52%;Cytc含量增高28%～75%;Caspase-3活性增强5.1～6.4倍.结论:MnSODmke可抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax蛋白表达,并通过线粒体途径诱发K562/ADM耐药细胞凋亡.

中药活性成分逆转K562/ADM耐药性聚类模糊研究

目的在具有耐药逆转作用的数种中药成分中进行聚类分组和优选排序。方法选用补骨脂素、苦参碱、人参皂苷Rb1、槲皮素、姜黄素、贝母碱、川芎嗪、大黄酸8种中药成分,MTT比色法测定药物对K562/ADM细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪测定细胞内化疗药物ADM荧光强度,测定细胞P糖蛋白表达;就测定的相关数据,通过多元统计中的聚类分析方法进行药物分组,以及采用模糊理论中的集值统计方法进行优选排序。结果8种药物逆转倍数在4.4~15.4之间,K562/ADM细胞中ADM浓度在(8.53±3.51)^(26.17±9.21),K562/ADM细胞P-gp表达率在(26.91±12.19)^(66.91±12.29);8种药物之间的相似性聚类分析成4组:补骨脂素、人参皂苷Rb1、槲皮素3种药物为第1组,苦参碱、贝母碱、姜黄素3种药物为第2组,大黄酸为第3组,川芎嗪为第4组。集值统计优选药效次序为:第4组、第3组、第1组、第2组。结论根据药物间相关性可用聚类分析分组,集值统计方法可以结合药效结果的区间表示进行定量计算,进而得出组间排序。

四物合剂对人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用研究

目的 :观察四物合剂对人红白血病细胞株K5 6 2 /ADM多药耐药性的逆转作用。方法 :以维拉帕米为阳性对照 ,MTT法观察耐药细胞株K5 6 2 /ADM的耐药倍数及四物合剂的逆转倍数 ;采用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)检测细胞内的ADM浓度 ;免疫荧光法测定细胞膜P 糖蛋白 (Pgp)表达。结果 :四物合剂和ADM合用时 ,对K5 6 2 /ADM耐药性的逆转倍数及细胞内的ADM含量比ADM单独使用时明显增高 (P <0 .0 1) ;但对K5 6 2 /ADM细胞膜Pgp表达的影响差异不显著 (P >0 .0 5 )。结论 :四物合剂在无毒性剂量时能逆转细胞株K5 6 2 /ADM对ADM的耐药性 ,但对细胞膜Pgp表达影响不大 ,其逆转作用可能与降低Pgp药物外排作用。

环腺苷酸对人白血病多药耐药K562/ADM细胞的诱导分化作用

目的:研究环腺苷酸(cyclicadenosinemonophosphate,cAMP)对人白血病多药耐药K562/ADM细胞的诱导分化作用。方法:K562/ADM细胞经0.25～2.0mmol/LcAMP处理后,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术(flowcytometryFCM)检测细胞周期和P-糖蛋白(PglycoproteinPgp)的表达,免疫细胞化学法检测细胞周期蛋白cyclinD1和转录因子E2F的表达;同时观察细胞形态学变化和血红蛋白合成功能。结果:cAMP呈浓度和时间依赖性地抑制K562/ADM细胞的增殖(P<0.01),细胞形态学上出现红系细胞的形态特征;被诱导的细胞能够合成血红蛋白、cyclinD1和E2F的表达减低。cAMP(0.25mmol/L和1.0mmol/L)诱导24h,多数细胞被阻滞在G1期,S期和G2+M期细胞显著降低;诱导72h后K562/ADM细胞Pgp表达的阳性率无明显变化(99.8%～99.9%),但Pgp的表达量显著增加,平均荧光强度分别增高1.24倍和1.28倍。结论:K562/ADM细胞仍保留了分化成熟的潜能,可被cAMP诱导向正常血细胞分化,但在分化诱导过程中,化学诱导剂可导致耐药细胞发生Pgp的应激性表达增强而可能阻抑后续的化学治疗,或对诱导剂产生耐受性。

自噬水平与白血病K562/ADM细胞耐药的关系研究

目的采用阿霉素(adriamycin,ADM)“逐步提高药物浓度+间歇性诱导”的方式体外诱导建立稳定耐受15μmol·L^(-1) ADM的白血病K562/ADM细胞,观察该细胞对其它化疗药物的敏感性以及细胞自噬水平与耐药的关系。方法MTT法检测细胞对几种化疗药物的敏感性;用透射电镜、荧光显微镜观察细胞自噬形态学改变;Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测自噬和耐药相关蛋白的表达水平。结果K562/ADM细胞除了对ADM产生明显耐药外,还对多种化疗药物如:吡柔比星、柔红霉素、5-FU和长春新碱等有交叉耐药,但对三氧化二砷较敏感。K562/ADM细胞内自噬体数量、MDC荧光强度以及LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平均高于亲本细胞。用3-MA抑制自噬可明显增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,同时也能有效抑制K562/ADM细胞内耐药相关蛋白的表达。结论K562/ADM细胞出现多药耐药现象,且耐药性与细胞自噬水平有密切关系。

孤啡肽联合阿霉素逆转K562/ADM细胞多药耐药及其分子机制研究

本实验室已研究证实,在细胞水平孤啡肽(OFQ)单独用药可逆转K562/ADM细胞多药耐药。本研究目的是探索OFQ联合阿霉素(ADM)逆转K562/ADM细胞多药耐药的分子机制及其与MDR1 mRNA/P-gp表达的相关性。MTT法检测OFQ和ADM单药及两者联合后对K562/ADM细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测MDR1 mRNA表达水平,Western blot检测P-gp的相对表达量。结果显示,OFQ(0.1μmol/L)联合ADM(15 mg/L)后细胞增殖抑制率增加,与ADM组比较,48 h数据具有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡率显著提高(P<0.01);OFQ联合ADM作用于细胞后MDR1 mRNA/P-gp表达水平明显低于ADM单独用药组(P<0.01),且MDR1 mRNA(r=0.91)及P-gp(r=0.98)表达水平在48 h内呈时间依赖性。结论:OFQ联合ADM可时间依赖性的逆转K562/ADM细胞多药耐药性,48 h为最佳逆转时间,逆转机制与下调MDR1 mRNA和P-gp的表达量相关。

绿原酸对人白血病阿霉素耐药株K562/ADM细胞多药耐药的影响及其机制

目的观察绿原酸对人白血病阿霉素耐药株K562/ADM细胞多药耐药的影响,进一步探讨其作用机制。方法取对数生长期的人白血病细胞株K562细胞和K562/ADM细胞,将不同浓度(2~64μmol/L))的绿原酸作用于K562/ADM细胞24 h后,采用MTT法检测绿原酸内在细胞毒性及对阿霉素(Adr)的增敏作用,并计算逆转倍数;流式细胞术检测经绿原酸处理后K562/ADM细胞内Adr和罗丹明123平均荧光强度;Western blotting法检测细胞多药耐药相关蛋白(MRP1)、P糖蛋白(P-gp)、t-Akt、p-Akt蛋白表达。结果筛选出细胞抑制率<10%时的绿原酸浓度为4μmol/L以内,即为无毒剂量。绿原酸2、4μmol/L及Adr作用K562/ADM细胞后的逆转倍数分别为1.65、2.21倍。K562/ADM细胞内Adr平均荧光强度为184±22,用2、4μmol/L绿原酸处理K562/ADM细胞,加入Adr后,其荧光强度分别为223±26、326±35,绿原酸干预前后荧光强度比较,P均<0.05。绿原酸干预K562/ADM后细胞内MDR1、p-Pg、t-Akt、p-AKT蛋白表达受抑(P均<0.05),2、4μmol/L绿原酸处理K562/ADM细胞24 h后,MRP1、P-gp、p-Akt蛋白相对表达量分别为(77.34±1.143)%、(59.63±0.658)%、(37.41±0.575)%和(66.12±1.102)%、(51.33±0.658)%、(32.41±0.575)%。结论绿原酸体外可有效逆转K562/ADM细胞多药耐药,其相关分子机制可能通过下调P13K/Akt信号通路抑制MRP1、P-gp蛋白表达实现。

川芎嗪联合三氧化二砷逆转K562/ADM细胞多药耐药的实验研究

目的探讨川芎嗪与三氧化二砷联合逆转耐药人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药的效果。方法采用WST-8法测定细胞的药敏性及抗药性逆转,应用流式细胞术检测细胞凋亡、细胞内ADM浓度、P-gp蛋白的表达,采用免疫细胞化学二步法检测细胞GST-π表达。结果非细胞毒性浓度的TMP(20μg/ml)及As2O3(0.5μmol/L)可降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P<0.05),2种药物联合应用对ADM的逆转倍数明显高于两者单独应用(P<0.05),而且也高于两者单独应用之和;两者以非细胞毒性浓度联合应用提高K562/ADM细胞内ADM浓度和细胞凋亡百分率,作用大于两药单独应用,并且明显下调细胞P-gp和GST-π表达(P<0.05,P<0.01)。结论非细胞毒性剂量的TMP和As2O3,均可部分逆转有多药耐药表型的细胞株K562/ADM对阿霉素的耐药性,两者联合应用效果优于单独应用,具有协同作用,其机制可能与下调P-gp和GST-π表达有关。

硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的影响及其与PI-3K/Akt信号途径的关系(英文)

目的研究硒化壳聚糖对耐阿霉素慢性粒细胞白血病细胞株K562/ADM增殖的影响,探讨这种影响与PI-3K/Akt信号途径的关系。方法硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞后,应用MTT法和克隆形成法检测硒化壳聚糖对细胞增殖和存活的影响,计算逆转倍数;应用免疫印迹法检测p-Akt蛋白表达的改变。结果随着硒化壳聚糖浓度的增加,细胞增殖抑制率相应增加,存活率相应减少,呈剂量时间效应关系。硒化壳聚糖能够下调p-Akt表达(P<0.01),明显增强ADM对K562/ADM细胞的增殖抑制作用(P<0.05,P<0.01),对细胞耐药产生一定的逆转作用。结论硒化壳聚糖可通过抑制PI-3K/Akt信号途径对耐药白血病细胞株K562/ADM产生增殖抑制和多药耐药逆转作用。

参芪扶正注射液对K562/ADM多药耐药的影响

目的研究参芪扶正注射液对K562耐药细胞株(K562/ADM)多药耐药的影响。方法采用MTT法检测参芪扶正注射液的细胞毒性;采用PI单染色流式细胞术检测ADM加以及不加参芪扶正注射液处理K562/ADM后的细胞凋亡率;采用直接免疫荧光法流式细胞术检测参芪扶正注射液处理K562/ADM细胞的Bcl-2基因表达水平。结果(1)参芪扶正注射液在10μL/mL时对K562/ADM增殖无抑制作用;(2)参芪扶正注射液明显增加ADM对K562/ADM的毒性作用(P<0.05),参芪扶正注射液在10μL/mL时耐药逆转倍数为1.71;(3)参芪扶正注射液可明显增强ADM对K562/ADM的促凋亡作用(P<0.05);(4)参芪扶正注射液可明显抑制K562/ADM的Bcl-2基因表达(P<0.05)。结论参芪扶正注射液可以逆转K562/ADM耐药性,其可能机制是促进细胞凋亡和下调Bcl-2表达。

新型多胺缀合物NMMB逆转K562/ADM细胞多药耐药及其机制

目的:研究新型多胺缀合物NMMB对白血病细胞株K562/ADM的多药耐药(MDR)逆转作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法:分别以不同浓度的NMMB(10～1000mg.L-1)作用于体外培养的K562和K562/ADM细胞24h,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,确定NMMB的非毒性剂量;采用非毒性剂量,NMMB0、2.5、5.0和10.0mg.L-1组,分别与不同浓度ADM(0.25～100.00mg.L-1)联合作用,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度,即IC50,计算逆转倍数;利用流式细胞术检测NMMB联合ADM作用后K562/ADM细胞内ADM蓄积程度和细胞周期变化。结果:随着NMMB浓度的增加,细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量-效应关系;NMMB的最大无毒剂量为12.5mg.L-1,逆转倍数为4倍;NMMB可明显提高ADM在K562/ADM细胞内的蓄积,与未加NMMB对照组比较差异有显著性(P<0.05);K562/ADM细胞被阻滞在G0/G1期,与未加NMMB对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:NMMB对白血病耐药细胞株K562/ADM有增殖抑制和多药耐药逆转作用,其部分逆转机制可能是通过增加细胞内化疗药物蓄积和将K562/ADM细胞阻滞在G0/G1期而实现的。

20(R)人参皂甙Rg3逆转K562/ADM细胞MDR及诱导其凋亡的研究

目的 观察抗癌新药 2 0 (R) 人参皂甙Rg3(2 0 (R) ginsenoside ,Rg3)对K5 6 2 /ADM多耐药细胞株逆转MDR机制。方法 应用MTT法确定ADM和Rg3的细胞毒 ;用荧光分光光度仪测定K5 6 2 /ADM细胞内阿霉素 (Adriamycin ,ADM )的浓度 ;流式细胞仪检测细胞凋亡率和表达P 170糖蛋白 (P glycoprotein ,Pgp)的K5 6 2 /ADM的细胞含量。 结果 (1)K5 6 2 /ADM细胞对阿霉素 (Adriamycin ,ADM )的抗性比K5 6 2细胞高 11倍 ,但两者对Rg3的IC50 分别为 11 76± 0 33μg/ml、10 4 9± 0 30 μg/ml,无显著性差异 (P >0 0 5 )。(2 )无毒剂量和低毒剂量的Rg3能显著提高K5 6 2 /ADM细胞内ADM的浓度 ,使该细胞对ADM的敏感性明显提高。 (3)Rg3对K5 6 2 /ADM细胞有较强的抑制生长和诱导凋亡作用 ,并有时间和浓度依赖性。(4)Rg3对表达P 170糖蛋白的K5 6 2 /ADM细胞的百分含量无显著性影响。结论 2 0 (R) 人参皂甙Rg3不仅是抑制肿瘤生长和转移的抗瘤剂 。

雄黄微生物提取液诱导K562/ADM细胞凋亡的作用机制研究

目的:观察雄黄微生物提取液对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用,探讨其作用机制、并初步探寻雄黄溶解后表现药理活性的化学物种。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、Annexin V-PI双染法染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(FCM)观察K562/ADM细胞凋亡,FCM测定K562/ADM细胞Fas、Bcl-2、Caspase3的活性变化,并以H3AsO3(As2O3在该溶液中的主要存在形式)作为阳性对照。结果:雄黄微生物提取液可抑制K562/ADM细胞增殖;K562/ADM呈典型凋亡形态改变;DNA电泳可见梯状条带出现;FCM分析显示:G1期细胞比例增高,G2-M和S期阻滞;Fas蛋白表达明显上调、Bcl-2蛋白表达显著下调、Caspase-3活性明显增强。结论:雄黄微生物提取液可通过Fas/Bcl-2途径,激活Caspase-3而诱导K562/ADM细胞凋亡。砷酸(V)、甲基砷酸盐(V)可能是雄黄溶解后表现药理活性的主要化学物种。