补骨脂素逆转K562/ADM多药耐药细胞系耐药性研究

目的:研究补骨脂素对白血病细胞阿霉素耐药株(K562/ADM)多药耐药(multidrugresistance,MDR)性的逆转作用及其机制。方法:采用MTT法检测药物细胞毒性作用,计算其逆转倍数。结果:补骨脂素在1～20μmol·L-1范围内,对K562和K562/ADM无明显细胞毒作用,但与ADM联合用药可使ADM对K562/ADM的IC50明显下降,补骨脂素(1～20μmol·L-1)能不同程度地降低ADM对K562/ADM细胞的IC50值。结论:补骨脂素能逆转K562/ADM细胞的多药耐药。

硫化砷对K_(562)/ADM细胞HSP70蛋白表达的影响

目的 :探讨硫化砷 (As2 S2 )对K5 6 2 及其耐药细胞株K5 6 2 ADM细胞膜HSP70蛋白表达的影响。方法 :采用流式细胞仪 (FCM)测定K5 6 2 和耐药细胞K5 6 2 ADM细胞膜HSP70蛋白表达及细胞凋亡 ,利用RT PCR方法检测HSP70的mRNA水平。结果 :硫化砷能增加细胞膜HSP70蛋白表达 ,且与时间及浓度成正相关 ,而在mRNA水平上仍有较高的表达。K5 6 2 ADM细胞膜HSP70蛋白表达和细胞凋亡率均高于K5 6 2 细胞。结论 :硫化砷能增加细胞膜HSP70蛋白表达 。

K562/ADM耐药细胞株的建立及其生物学特性的初步观察

我们建立的K562/ADM耐药细胞株,在ADM浓度为2.4μg/m1(4.46μM)中已稳定培养3.5个月,传了30—35代,K562/ADM亦具有多药耐受件(Multidrug Resistance,MDR)的特点,对ADM、VCR、AT—1258和DDP的耐受性分别为K562的114.7、94.0、13.3和7.4倍,但对5—FU不产生交叉耐药。K562和K562/ADM的倍增时间分别为19.2h和52.8h,集落生成率分别为37.5％和11.1％,K562染色体数为34—68,中位数为56;K562/MDM染色体数为32—90,中位数为50,K562/ADM可做为耐药机理和克服耐药措施研究的极好模型。

柴胡皂苷在体外对人白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用

目的:研究柴胡皂苷(SS)对白血病细胞株K562/ADM多药耐药性(MDR)的逆转作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法:分别以不同浓度(1～100 mg/L)的SS作用于体外培养的K562和K562/ADM细胞48h,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,确定SS的非毒性剂量;采用非毒性剂量SS 1.25、2.5和5.0 mg/L,分别与不同浓度(0.05～100 mg/L)阿霉素(ADM)联合作用,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度(IC50),计算逆转指数和两药相互作用系数(CDI),观察SS协同ADM作用后的细胞形态;利用流式细胞术检测SS联合ADM作用后K562/ADM细胞内ADM的蓄积程度、细胞凋亡和细胞周期变化。结果:随着SS浓度的增加,细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量-效应关系;SS的非细胞毒性剂量为5.0 mg/L,逆转倍数为21.5倍;SS协同ADM作用后形态学方法显示肿瘤细胞数量减少,并出现了大量凋亡细胞,呈剂量-效应关系;SS可明显提高ADM在K562/ADM细胞内的蓄积,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05);SS可增强ADM对K562/ADM细胞的凋亡诱导作用,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05);K562/ADM细胞被阻滞在G0/G1期,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05)。结论:SS对白血病耐药细胞株K562/ADM有增殖抑制和逆转多药耐药性的作用,其部分逆转机制可能是通过增加细胞内化疗药物蓄积,诱导细胞凋亡和使细胞阻滞在G0/G1期而实现的。

雄黄诱导K562/ADM细胞凋亡的研究

探讨雄黄诱导多药耐药细胞Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡的能力，并初步探讨其分子机制。方法：采用荧光标记形态学观察，流式细胞仪进行ＤＮＡ分析及测定细胞表面ｐ－ｇｐ的表达。结果显示：雄黄能明显诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡，且在４８ｈ后ｐ－ｇｐ的表达下调。

蝙蝠葛碱逆转K562/ADM细胞多耐药性的研究

目的 :研究具有钙拮抗作用的中药蝙蝠葛碱对多耐药性的逆转作用。方法 :选用异搏定作阳性对照 ,观察其对多药耐药细胞株K5 6 2 /ADM多药耐药性的逆转作用。结果 :蝙蝠葛碱在非细胞毒性剂量下能使K5 6 2 /ADM对阿霉素的浓度升高 ,但对细胞表面的糖蛋白P - 170却没有影响。结论 :蝙蝠葛碱具有逆转白血病细胞株K5 6 2

苦参碱逆转人白血病K562/ADM细胞对阿霉素耐药性的研究

[目的 ]探讨苦参碱对人白血病K5 6 2 /ADM细胞对阿霉素耐药性的逆转作用。 [方法 ]MTT法测定苦参碱的细胞毒性及其对K5 6 2 /ADM细胞药敏性的影响 ,荧光分光光度法检测细胞内药物浓度的改变 ,流式细胞术检测耐药细胞凋亡百分率的变化。 [结果 ]苦参碱的非细胞毒性剂量为 5 0μg/mL ,低细胞毒性剂量为 12 5 μg/mL。 5 0 μg/mL苦参碱可增加K5 6 2 /ADM细胞内阿霉素(ADM )浓度和K5 6 2 /ADM细胞凋亡百分率 ,使K5 6 2 /ADM细胞的IC50 由原来的 35 .2 μg/mL降低至 15 .8μg/mL ,其逆转倍数为 2 .2倍。[结论 ]苦参碱可部分逆转人白血病K5 6 2 /ADM细胞对阿霉素的耐药性 ,其逆转机制与增加细胞内药物积累有关。

槲皮素逆转白血病细胞系K562/A多药耐药性及相关基因表达的研究

本课题研究槲皮素(quercetin,Q ue)对白血病细胞系K562/A多药耐药的影响及机制。体外培养的K562和K562/A细胞经不同浓度的Q ue处理,采用MTT法检测Q ue对细胞的生长抑制率及对阿霉素(adriam ycin,ADR)的增敏倍数;流式细胞术检测Q ue作用后细胞内ADR浓度的变化,Annex in V/PI双染色法观察细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR基因芯片检测药物转运蛋白基因及凋亡相关基因表达的变化。结果表明,Q ue在5-160μm o l/L的浓度范围内对K562和K562/A细胞均有剂量依赖性的生长抑制作用,低毒剂量的Q ue使K562/A对ADR的敏感性显著增强;在ADR为5μm o l/L时,Q ue与细胞共培养2小时细胞内ADR浓度则明显增加;Q ue可剂量依赖性地诱导K562和K562/A细胞的凋亡;Q ue可下调ABC、SLC家族药物转运蛋白相关基因的表达,并可调节BCL2-、TNF等凋亡相关基因的表达。结论:Q ue可通过多种机制逆转白血病细胞系K562/A的多药耐药性,逆转效果与剂量呈正相关。

冬凌草甲素逆转多药耐药细胞系K562/A02耐药性的研究

目的 探讨冬凌草甲素对多药耐药细胞系K5 6 2 /A0 2耐药性的逆转作用。方法 以柔红霉素(DNR)和高三尖杉酯碱 (HHT)联合不同浓度的冬凌草甲素处理K5 6 2 /A0 2及敏感细胞系K5 6 2 /S ,以四唑盐比色法 (MTT)检测两种化疗药物的半数抑制浓度 (IC50 ) ,以流式细胞仪检测P170蛋白的表达与细胞内DNR的浓度。结果 冬凌草甲素可明显减小K5 6 2 /A0 2细胞对DNR、HHT的IC50 ,降低耐药倍数 ,下调P170蛋白的表达 ,增高细胞内DNR的浓度 ,而对K5 6 2 /S细胞无显著影响。结论 冬凌草甲素可逆转耐药细胞系K5 6 2 /A0 2的耐药性 ,是一种很有希望的抗白血病中药。

川芎嗪与β-榄香烯联合应用对K_(562)/ADM细胞的生长抑制作用

目的 :探讨川芎嗪与β-榄香烯联合应用对 K562 /ADM的生长抑制作用。方法 :以耐阿霉素细胞株 K562 /ADM为实验模型。结果 :1.两者对 K562 /ADM及 K562 细胞的 IC50 接近 ,即耐药细胞 K562 /ADM对两种中药制剂不具有耐药性。 2 .非细胞毒性剂量的川芎嗪 (TMP 3 5 0μg/ml)及β-榄香烯 (β-elemene 4.0μg/ml)可显著降低 ADM对 K562 /ADM细胞的 IC50 (P<0 .0 1) ,提高细胞对 ADM的敏感性 ,抗药性逆转分别为 2 .0 3倍及 2 .18倍。 3 .进一步将上述两种药物联合应用 ,发现其对 ADM的抗药性逆转为 4.65倍 ,明显高于二者单独应用 ,而且也高于两者单独应用之和 ,并且其对升高该细胞内 ADM的浓度也具有协同作用。结论 :川芎嗪与β-榄香烯联合应用能够抑制 K562 /ADM的生长 。

裸小鼠高致瘤性K562-n细胞系的生物学特性研究

目的 探索高致瘤性K5 6 2 -n细胞系在胸腺缺陷裸小鼠体内致瘤的细胞生物学机理。方法 通过极限稀释法建立K5 6 2 -n细胞系致瘤率不同的克隆株 ,并以K5 6 2细胞为对照 ,对各克隆株进行裸小鼠体内外生物学特性的比较研究。结果 高致瘤性的K5 6 2 -B、K5 6 2 -C、K5 6 2 -E克隆株 (致瘤率≥ 5 / 6 ) ,其软琼脂培养集落形成率 ,特别是大集落形成率 ,较对照K5 6 2细胞显著增高 ,(P <0 .0 1) ,而无致瘤性或低致瘤性的K5 6 2 -A、K5 6 2 -D克隆株 (致瘤率≤ 2 / 6 ) ,其集落形成率与对照无显著差别 (P >0 .0 5 ) ;超微结构观察提示高致瘤性克隆株 ,常染色质成分增多 ,异染色质少见 ,胞浆内微丝增多且排列紊乱 ;流式细胞仪细胞周期分布分析显示高致瘤性的克隆株S期细胞比例增加。实验结果还表明裸小鼠NK细胞对高致瘤性克隆株的杀伤活性显著低于对照的K5 6 2细胞 (P <0 .0 1) ,而低致瘤性克隆株与对照无显著差别 (P >0 .0 5 ) ;组织病理观察显示低致瘤性的克隆株及对照K5 6 2细胞 ,所成裸小鼠肿瘤组织内有大量的炎性细胞浸润 ,大量肿瘤细胞被杀伤 ,血供丰富区尤甚 ,而高致瘤性克隆株所致肿瘤组织内炎性细胞浸润少见 ,肿瘤组织增殖旺盛。结论 K5 6 2 -n细胞系的裸小鼠高致瘤机理在于 :1.软琼脂集落形成率增高?

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性机制研究

目的 研究汉防己甲素 (TTD)对慢性粒细胞白血病急性变白血病细胞株K 5 62 /ADM多药耐药 (MDR )逆转的机理。方法 采用流式细胞仪检测细胞内化疗药物的浓度及细胞表面P糖蛋白 (P -gp)的表达 ;荧光定量PCR法检测MDR1mRNA ;通过流式细胞仪检测Anexin -V判断凋亡细胞的数量。结果 10 μmol/L的TTD处理K 5 62 /ADM细胞后 ,细胞内阿霉素 (ADM )的浓度明显提高 ;K 5 62 /ADM细胞MDR 1mRNA /P -gp的表达下降 ;TTD能增强ADM致细胞凋亡的作用。 结论 汉防己甲素的耐药逆转机制除了下调MDR 1mRNA /P -gp的表达引起细胞内抗癌药物的积聚外 。

三氧化二砷诱导慢性粒细胞系K562细胞凋亡及细胞周期变化研究

目的 研究三氧化二砷 (AS2 O3 )体外对K5 6 2细胞凋亡的诱导作用 ,探讨AS2 O3 促进慢性粒细胞系K5 6 2细胞凋亡机制。方法 采用不同浓度AS2 O3 处理慢性粒细胞系K5 6 2细胞 ,观察细胞形态改变 ,细胞生长抑制检测 (MTT)分析方法检测AS2 O3 对K5 6 2细胞增殖抑制作用 ;流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 (1～8)× 10 -6mol/LAS2 O3 能明显诱导K5 6 2细胞凋亡。流式细胞检测表明 ,随AS2 O3 浓度增加和处理时间延长 ,S期细胞比例渐下降 ,细胞凋亡率上升 ,其作用呈浓度 时间依赖性 (P <0 .0 1)。结论 AS2 O3 可诱导K5 6 2细胞凋亡 ,其作用机制可能是使细胞受阻于S期前的某个时期 ,从而诱导细胞凋亡 ,其作用呈剂量

自噬水平与白血病K562/ADM细胞耐药的关系研究

目的采用阿霉素(adriamycin,ADM)“逐步提高药物浓度+间歇性诱导”的方式体外诱导建立稳定耐受15μmol·L^(-1) ADM的白血病K562/ADM细胞,观察该细胞对其它化疗药物的敏感性以及细胞自噬水平与耐药的关系。方法MTT法检测细胞对几种化疗药物的敏感性;用透射电镜、荧光显微镜观察细胞自噬形态学改变;Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测自噬和耐药相关蛋白的表达水平。结果K562/ADM细胞除了对ADM产生明显耐药外,还对多种化疗药物如:吡柔比星、柔红霉素、5-FU和长春新碱等有交叉耐药,但对三氧化二砷较敏感。K562/ADM细胞内自噬体数量、MDC荧光强度以及LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平均高于亲本细胞。用3-MA抑制自噬可明显增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,同时也能有效抑制K562/ADM细胞内耐药相关蛋白的表达。结论K562/ADM细胞出现多药耐药现象,且耐药性与细胞自噬水平有密切关系。

四物合剂对人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用研究

目的 :观察四物合剂对人红白血病细胞株K5 6 2 /ADM多药耐药性的逆转作用。方法 :以维拉帕米为阳性对照 ,MTT法观察耐药细胞株K5 6 2 /ADM的耐药倍数及四物合剂的逆转倍数 ;采用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)检测细胞内的ADM浓度 ;免疫荧光法测定细胞膜P 糖蛋白 (Pgp)表达。结果 :四物合剂和ADM合用时 ,对K5 6 2 /ADM耐药性的逆转倍数及细胞内的ADM含量比ADM单独使用时明显增高 (P <0 .0 1) ;但对K5 6 2 /ADM细胞膜Pgp表达的影响差异不显著 (P >0 .0 5 )。结论 :四物合剂在无毒性剂量时能逆转细胞株K5 6 2 /ADM对ADM的耐药性 ,但对细胞膜Pgp表达影响不大 ,其逆转作用可能与降低Pgp药物外排作用。

环腺苷酸对人白血病多药耐药K562/ADM细胞的诱导分化作用

目的:研究环腺苷酸(cyclicadenosinemonophosphate,cAMP)对人白血病多药耐药K562/ADM细胞的诱导分化作用。方法:K562/ADM细胞经0.25～2.0mmol/LcAMP处理后,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术(flowcytometryFCM)检测细胞周期和P-糖蛋白(PglycoproteinPgp)的表达,免疫细胞化学法检测细胞周期蛋白cyclinD1和转录因子E2F的表达;同时观察细胞形态学变化和血红蛋白合成功能。结果:cAMP呈浓度和时间依赖性地抑制K562/ADM细胞的增殖(P<0.01),细胞形态学上出现红系细胞的形态特征;被诱导的细胞能够合成血红蛋白、cyclinD1和E2F的表达减低。cAMP(0.25mmol/L和1.0mmol/L)诱导24h,多数细胞被阻滞在G1期,S期和G2+M期细胞显著降低;诱导72h后K562/ADM细胞Pgp表达的阳性率无明显变化(99.8%～99.9%),但Pgp的表达量显著增加,平均荧光强度分别增高1.24倍和1.28倍。结论:K562/ADM细胞仍保留了分化成熟的潜能,可被cAMP诱导向正常血细胞分化,但在分化诱导过程中,化学诱导剂可导致耐药细胞发生Pgp的应激性表达增强而可能阻抑后续的化学治疗,或对诱导剂产生耐受性。

孤啡肽联合阿霉素逆转K562/ADM细胞多药耐药及其分子机制研究

本实验室已研究证实,在细胞水平孤啡肽(OFQ)单独用药可逆转K562/ADM细胞多药耐药。本研究目的是探索OFQ联合阿霉素(ADM)逆转K562/ADM细胞多药耐药的分子机制及其与MDR1 mRNA/P-gp表达的相关性。MTT法检测OFQ和ADM单药及两者联合后对K562/ADM细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测MDR1 mRNA表达水平,Western blot检测P-gp的相对表达量。结果显示,OFQ(0.1μmol/L)联合ADM(15 mg/L)后细胞增殖抑制率增加,与ADM组比较,48 h数据具有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡率显著提高(P<0.01);OFQ联合ADM作用于细胞后MDR1 mRNA/P-gp表达水平明显低于ADM单独用药组(P<0.01),且MDR1 mRNA(r=0.91)及P-gp(r=0.98)表达水平在48 h内呈时间依赖性。结论:OFQ联合ADM可时间依赖性的逆转K562/ADM细胞多药耐药性,48 h为最佳逆转时间,逆转机制与下调MDR1 mRNA和P-gp的表达量相关。

绿原酸对人白血病阿霉素耐药株K562/ADM细胞多药耐药的影响及其机制

目的观察绿原酸对人白血病阿霉素耐药株K562/ADM细胞多药耐药的影响,进一步探讨其作用机制。方法取对数生长期的人白血病细胞株K562细胞和K562/ADM细胞,将不同浓度(2~64μmol/L))的绿原酸作用于K562/ADM细胞24 h后,采用MTT法检测绿原酸内在细胞毒性及对阿霉素(Adr)的增敏作用,并计算逆转倍数;流式细胞术检测经绿原酸处理后K562/ADM细胞内Adr和罗丹明123平均荧光强度;Western blotting法检测细胞多药耐药相关蛋白(MRP1)、P糖蛋白(P-gp)、t-Akt、p-Akt蛋白表达。结果筛选出细胞抑制率<10%时的绿原酸浓度为4μmol/L以内,即为无毒剂量。绿原酸2、4μmol/L及Adr作用K562/ADM细胞后的逆转倍数分别为1.65、2.21倍。K562/ADM细胞内Adr平均荧光强度为184±22,用2、4μmol/L绿原酸处理K562/ADM细胞,加入Adr后,其荧光强度分别为223±26、326±35,绿原酸干预前后荧光强度比较,P均<0.05。绿原酸干预K562/ADM后细胞内MDR1、p-Pg、t-Akt、p-AKT蛋白表达受抑(P均<0.05),2、4μmol/L绿原酸处理K562/ADM细胞24 h后,MRP1、P-gp、p-Akt蛋白相对表达量分别为(77.34±1.143)%、(59.63±0.658)%、(37.41±0.575)%和(66.12±1.102)%、(51.33±0.658)%、(32.41±0.575)%。结论绿原酸体外可有效逆转K562/ADM细胞多药耐药,其相关分子机制可能通过下调P13K/Akt信号通路抑制MRP1、P-gp蛋白表达实现。

硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的影响及其与PI-3K/Akt信号途径的关系(英文)

目的研究硒化壳聚糖对耐阿霉素慢性粒细胞白血病细胞株K562/ADM增殖的影响,探讨这种影响与PI-3K/Akt信号途径的关系。方法硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞后,应用MTT法和克隆形成法检测硒化壳聚糖对细胞增殖和存活的影响,计算逆转倍数;应用免疫印迹法检测p-Akt蛋白表达的改变。结果随着硒化壳聚糖浓度的增加,细胞增殖抑制率相应增加,存活率相应减少,呈剂量时间效应关系。硒化壳聚糖能够下调p-Akt表达(P<0.01),明显增强ADM对K562/ADM细胞的增殖抑制作用(P<0.05,P<0.01),对细胞耐药产生一定的逆转作用。结论硒化壳聚糖可通过抑制PI-3K/Akt信号途径对耐药白血病细胞株K562/ADM产生增殖抑制和多药耐药逆转作用。

川芎嗪联合三氧化二砷逆转K562/ADM细胞多药耐药的实验研究

目的探讨川芎嗪与三氧化二砷联合逆转耐药人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药的效果。方法采用WST-8法测定细胞的药敏性及抗药性逆转,应用流式细胞术检测细胞凋亡、细胞内ADM浓度、P-gp蛋白的表达,采用免疫细胞化学二步法检测细胞GST-π表达。结果非细胞毒性浓度的TMP(20μg/ml)及As2O3(0.5μmol/L)可降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P<0.05),2种药物联合应用对ADM的逆转倍数明显高于两者单独应用(P<0.05),而且也高于两者单独应用之和;两者以非细胞毒性浓度联合应用提高K562/ADM细胞内ADM浓度和细胞凋亡百分率,作用大于两药单独应用,并且明显下调细胞P-gp和GST-π表达(P<0.05,P<0.01)。结论非细胞毒性剂量的TMP和As2O3,均可部分逆转有多药耐药表型的细胞株K562/ADM对阿霉素的耐药性,两者联合应用效果优于单独应用,具有协同作用,其机制可能与下调P-gp和GST-π表达有关。