Compound 3k治疗骨关节炎:调控氧化应激通路改善软骨细胞糖酵解的作用机制

背景:骨关节炎现已被认为是一种代谢性疾病,既往研究表明糖酵解在骨关节炎的发生发展中起重要作用。Compound 3k作为一种新型糖酵解小分子抑制剂,具有抗炎及抗肿瘤等功效,因此可靶向糖酵解,有望为骨关节炎治疗提供新的思路。目的:基于缺氧诱导因子1α/活性氧的氧化应激通路探究Compound 3k在糖酵解过度活跃所导致的骨关节炎中的作用机制。方法:取对数生长期的ATDC5成软骨细胞,用10 ng/mL白细胞介素1β作用24 h诱导骨关节炎体外细胞模型,以CCK-8法检测不同浓度(0.25,0.5,1,2.5,5,10,15μmol/L)Compound 3k的细胞毒性,选出合适浓度进行后续实验。将软骨细胞随机分为对照组、模型组、治疗组,模型组以10 ng/mL的白细胞介素1β诱导,治疗组以Compound 3k预刺激2 h后与白细胞介素1β共培养,用CCK-8法检测各组细胞增殖情况;用ELISA试剂盒检测各组细胞炎症水平;用试剂盒检测各组细胞活性氧、细胞外乳酸脱氢酶及葡萄糖含量;qRT-PCR及Western blot检测相关炎症因子白细胞介素6、肿瘤坏死因子α及糖酵解相关基因葡萄糖转运蛋白1、甘油醛3-磷酸脱氢酶、单羧酸转运蛋白1和缺氧诱导因子1α的表达水平。结果与结论:①与对照组相比,模型组细胞增殖活性下降、糖酵解水平活跃,表现为细胞外乳酸脱氢酶含量增加(P<0.001),葡萄糖含量减少(P<0.001),相关炎症因子白细胞介素6(P<0.0001)及肿瘤坏死因子α(P<0.001),糖酵解相关基因葡萄糖转运蛋白1(P<0.001)、甘油醛3-磷酸脱氢酶(P<0.001)、单羧酸转运蛋白1(P<0.001)及缺氧诱导因子1α(P<0.001)的表达水平均上调,并伴随氧化应激,活性氧过量产生。②与模型组相比,Compound 3k的治疗有效提高细胞增殖活性,抑制过度活跃的糖酵解水平的同时,抑制了骨关节炎软骨细胞炎症(P<0.001)及糖酵解相关基因的表达(P<0.001),且抑制氧化应激,缺氧诱导因子1α的表达水平下调(P<0.0001),活性氧水平下降。③上述结果证实,Compound 3k抑制了白细胞介素1β诱导的软骨细胞炎症,其机制可能与糖酵解及缺氧诱导因子1α/活性氧介导的氧化应激有关。

临床常用口服降糖药物的潜在代谢性药物相互作用研究进展

糖尿病近年来在我国发病率呈逐年上升趋势。其主要包括1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病和特殊类型的糖尿病等。其中,我国以2型糖尿病为主,约占90%;1型糖尿病和其他类型糖尿病相对较少[1]。2型糖尿病不但需要长期服用降糖药物,而且糖尿病还常伴随心血管疾病、肾病或其他多种疾病等,糖尿病患者服用降糖药物的同时还需要使用其他的多种药物。这就导致发生药物相互作用概率增加。由于携带和使用方便,口服类剂型是临床降糖药物常用剂型。

反应性氧代谢物清除剂逆转ROM对NK细胞抗K562细胞系体外抑制作用

为了探讨新型反应性氧代谢物(reactiveoxygenmetabolites,ROM)清除剂在NK细胞抑制K562细胞时作为免疫佐剂的作用,采用IL-2及PHA活化单核(MO)细胞,使MO细胞的ROM产量增加,观察NK细胞活性和K562细胞抑制率(KIR)的相应变化,然后在不同比例的MO+NK+K562细胞培养体系中加入不同浓度的ROM清除剂(硫普罗宁),定期检测ROM产量及KIR(每种检测均做3个复孔),同时应用不同浓度的二氢氯组胺(DHT)作为阳性对照。结果表明:在K562细胞、NK细胞混合培养体系中,当E/T=10/1时,加入IL-2/PHA后ROM的产量从33.17±25.02U/ml增至223.59±59.41U/ml(P<0.05),KIR从65.56%升至85.89%(P<0.05);当按E/MO=10/2、10/5、10/10三种比例加入MO细胞后,ROM产量随着MO细胞数量的增加而增加(ROM产量分别为389.79±43.83U/ml,456.74±42.77U/ml,601.42±21.92U/ml),而KIR则相反(KIR分别为82.36%,81.36%,48.09%);而在K562+NK+MO+IL-2/PHA混合培养体系中加入硫普罗宁、DHT后,当E/MO=10/2时,ROM产量从389.79±43.83U/ml分别降至-1.20±60.70U/ml和50.21±22.4U/ml(P<0.05),KIR则从82.53%分别升至96.09%和94.64%(P<0.05)。随着硫普罗宁、DHT浓度的增加,ROM产量逐渐减少。ROM产量与KIR呈负相关(r=-0.518)。当E/MO为10/5或10/10时,各浓度硫普罗宁及高浓度的DHT可使ROM产量减少(P<0.05),但KIR提高不明显(P>0.05)。硫普罗宁在提高KIR的效应方面与DHT相似(P>0.05),而在清除ROM方面,硫普罗宁较DHT为优(P<0.05)。结论:①MO细胞是ROM产生的最主要来源,其产生的ROM可使NK细胞的抗瘤(抗K562)活性下降;②新型ROM清除剂(硫普罗宁)可有效清除ROM,在一定程度上逆转ROM对NK细胞抗K562细胞的抑制作用,且在逆转ROM方面优于DHT,在提高NK细胞对K562细胞的抑制率方面效应强度与DHT相似,但毒副作用较低,有望替代DHT作为免疫佐剂用于白血病的过继性免疫治疗中。

绞股蓝总皂甙对小鼠S_(180)肉瘤及K_(562)细胞的抑制作用

目的 绞股蓝总皂甙 (GP)对小鼠S180 肉瘤及K562 细胞的抑制作用。方法 通过动物实验观察绞股蓝总皂甙对小鼠S180 肉瘤生长状况、肿瘤坏死面积 (TNA)与肿瘤总面积 (TTA)的比率、瘤周瘤内免疫活性细胞浸润状况及荷瘤小鼠脾脏的影响 ;通过细胞培养观察绞股蓝总皂甙对K562 细胞生长的抑制作用。结果 经重复实验证实 ,GP能显著抑制小鼠S180 肉瘤的生长 ,TNA与TTA的比率显著增加 ,瘤周尤其是瘤内淋巴细胞、巨噬细胞浸润数量明显增加 ,荷瘤小鼠脾重增加、脾白髓数目增多、体积增大。同时证实 ,GP对K562 细胞株具有明显的生长抑制作用。结论 GP的抑瘤作用主要是直接杀伤瘤细胞 。

苦参碱对K562细胞骨架的作用观察

目的：从细胞骨架方面进一步探索苦参碱对人白血病K562细胞株的作用机制。方法：采用微管吮吸技术和基因芯片技术分析苦参碱处理前后K562细胞粘弹系数和细胞骨架蛋白基因表达的改变。结果：0.1mg/ml苦参碱作用K562细胞24h后粘弹系数下降，细胞骨架类基因prefoldin 与ezrin 的mRNA表达增强。结论：苦参碱能够导致K562细胞的细胞骨架发生变化。

小檗胺对多药耐药K562/Adr细胞作用的研究

目的研究小檗胺诱导人白血病K5 6 2 /Adr细胞凋亡及逆转多药耐药的作用及机理。方法采用MTT法测IC50 值 ,流式细胞仪AnnexinVFITC PI法检测细胞凋亡发生率 ,PI染色法检测凋亡峰及细胞周期 ,同时以FCM检测Caspase 3、P GP蛋白表达及细胞内药物积聚能力 ,RT PCR法检测mdr 1基因表达。结果小檗胺能抑制人白血病K5 6 2 /Adr细胞生长且呈剂量依赖关系 ,并能诱导细胞凋亡 ,使Caspase 3蛋白表达及细胞药物外排能力增加 ,同时降低mdr 1基因mRNA和蛋白表达水平。结论小檗胺能激活Cas pase 3以诱导人白血病K5 6 2 /Adr细胞凋亡 ,同时能通过降低mdr

MAPK在慢性髓细胞白血病K562细胞株信号转导中的作用

背景与目的:近年研究表明,ras-MAPK信号传导通路在慢性髓细胞白血病(CML)的发生和发展中起着重要作用。本研究拟探讨丝裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)在CML信号传导中的作用及其作用机理。方法:用脂质体转染法将MAPK的反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASO)导入CML细胞株K562细胞中,通过细胞增殖、DNA合成、MAPK含量和MAPK活性变化检测MAPKASO对K562细胞的作用。结果:MAPKASO可明显抑制细胞增殖、DNA合成、MAPK含量和MAPK活性,其抑制率分别为51.8%、57.1%、45.3%和61.6%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MAPK在CML信号转导中起重要,极有可能成为治疗CML的新靶点。

紫草素对DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的抑制作用和诱导人白血病K562细胞的凋亡(英文)

目的 :研究紫草素对DNA拓扑异构酶I催化活性和K5 6 2白血病细胞凋亡的影响。方法 :从K5 6 2白血病细胞提取拓扑异构酶I,通过DNA解螺旋试验评价该药对拓扑异构酶I催化活性的抑制作用。用MTT法测定了该药对K5 6 2白血病细胞增殖的抑制作用。应用流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳观察了该药对细胞凋亡的诱导作用。结果 :紫草素可显著抑制拓扑异构酶I的解螺旋活性 (IC50 =75 0 μmol/L)。该药能显著抑制K5 6 2的细胞增殖 ,并随剂量增大而抑制作用增强。紫草素 0 3～ 3μmol/L对K5 6 2细胞作用 2 4h后 ,其凋亡率为 2 0 %～ 70 %。琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA“lad der”。结论 :紫草素显著抑制拓扑异构酶I的催化活性 ,并能诱导K5 6

索拉非尼联合柔红霉素对K562细胞株协同作用的研究

本研究探讨索拉非尼(sorafenib,SOR)联合柔红霉素(daunorubicin,DNR)对K562细胞株的增殖活性及凋亡的影响。采用MTT法检测K562细胞株在索拉非尼单药及联合柔红霉素作用下增殖的抑制效应,根据两药相互作用指数(coefficient of drug interaction,CDI)评价两药相互作用性质,并用Hoechst33258荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果表明:索拉非尼单药及联合柔红霉素对K562细胞株有显著的抑制效应,而且两药联合应用具有协同作用,联合组凋亡细胞增加。结论:柔红霉素和索拉非尼联合作用于白血病细胞株K562呈现明显的协同抑制作用。

三氧化二砷对K_(562)细胞凋亡的诱导及生长抑制作用的研究

目的 :研究三氧化二砷 ( As2 O3)对人红白血病细胞株 K56 2 的生长抑制和凋亡诱导作用。方法 :以As2 O3作为耐药逆转剂 ,用台盼兰排染法 ,噻唑兰 ( MTT)还原法 ,Hoechst33342和 PI荧光染色法 ,流式细胞仪技术和荧光分光光度法 ,观察了不同浓度的 As2 O3( 0 .2～ 5 .0 μm ol/L)对人红白血病细胞株 K56 2 的生长抑制和凋亡诱导作用。结果 :As2 O3对 K56 2 细胞具有明显生长抑制和凋亡诱导作用 ,其作用强度在一定范围内均具药物浓度和时间依赖性。结论 :As2 O3主要以诱导肿瘤细胞凋亡而表现其毒性作用。

柴胡皂甙d(SSd)对K562细胞增殖的抑制作用

目的研究从柴胡中提取的单体成分柴胡皂甙d对K562细胞生长的影响.方法分别用不同质量浓度的SSd作用于K562细胞株,于不同时间段分别计数其平均细胞数,并绘制相应生长曲线,计算平均抑制率.药物作用后24,36,48 h,计算分裂指数.结果用药后K562细胞的细胞数、分裂指数均下降,下降幅度与剂量呈正相关.结论 SSd能抑制K562细胞增殖,这种抑制作用呈时间和剂量依赖关系(P<0.05).

当归药物血清逆转K562/A02细胞对阿霉素耐药性的初步观察

目的以白血病多药耐药细胞系K562/A02为对象,观察当归能否逆转其对阿霉素的耐药性。方法采用MTT法观察当归药和血清对阿霉素细胞抑制率的影响(IC50)。结果经MTT法发现当归药物血清能增加K562/A02对阿霉素的敏感性,使阿霉素半数抑制浓度(IC50)由14.9mg/L,降至9.17mg/L,部分逆转了K562/02对阿霉素耐药性,逆转倍数为1.63倍。而当归对K562/S敏感细胞系无上述作用。结论当归能部分逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药性。

铁剥夺抗K562细胞的增殖作用及机制

目的观察铁剥夺对白血病细胞增殖的影响。方法以K562细胞作为人类白血病细胞株,台盼蓝染色,光镜下计数活细胞率;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测A值(570nm),绘制生长曲线;流式细胞术分析细胞周期变化。结果小剂量去铁胺(DFO)(12.5μmol/L)处理K562细胞时,生长曲线轻微变化,随时间延长和DFO剂量增加(25、50、100μmol/L),细胞存活率明显下降,生长曲线高峰显著低于对照组。DFO的抗增殖活性为时间-剂量依赖型。用DFO(50、100μmol/L)处理K562细胞48和72h后,G0/G1期细胞数量增加,S期细胞数量减少,与对照组比较均有显著性差异(Pa<0.001)。上述作用可被等浓度的三氯化铁抵消。结论铁剥夺具有抗白血病细胞增殖作用,剥夺细胞内铁,阻止细胞由G0/G1期进入S期可能是其机制之一。

川芎嗪脂质体对人白血病细胞株K_(562)多药耐药逆转作用的研究

目的研究川芎嗪脂质体在体外对肿瘤细胞的细胞毒作用和对多药耐药的逆转作用,并研究脂质体剂型对上述作用的影响。方法MTT法检测川芎嗪脂质体以及川芎嗪原料对照组、空白脂质体对照组对耐阿霉素的人白血病细胞株(K562/ADM)的细胞毒性和多药耐药逆转作用。结果川芎嗪脂质体对K562/ADM有明显的细胞毒作用。非细胞毒性剂量(生长率≥95%)为2.0μg·ml-1,该浓度下可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P<0.01),抗药性逆转为11.2倍。低毒剂量(生长率85～90%)为2.6μg·ml-1,抗药性逆转为178倍。2.0μg·ml-1的川芎嗪原料对照组可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P<0.01),抗药性逆转为7.9倍;同比稀释的空白脂质体对照组可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P<0.01),抗药性逆转为4.9倍。结论川芎嗪脂质体体外对人白血病细胞K562/ADM有明显的细胞毒作用和MDR逆转作用;在一定浓度范围内川芎嗪脂质体的细胞毒性与逆转作用有剂量依赖性;脂质体本身对逆转有增效作用。

四物合剂对人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用研究

目的 :观察四物合剂对人红白血病细胞株K5 6 2 /ADM多药耐药性的逆转作用。方法 :以维拉帕米为阳性对照 ,MTT法观察耐药细胞株K5 6 2 /ADM的耐药倍数及四物合剂的逆转倍数 ;采用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)检测细胞内的ADM浓度 ;免疫荧光法测定细胞膜P 糖蛋白 (Pgp)表达。结果 :四物合剂和ADM合用时 ,对K5 6 2 /ADM耐药性的逆转倍数及细胞内的ADM含量比ADM单独使用时明显增高 (P <0 .0 1) ;但对K5 6 2 /ADM细胞膜Pgp表达的影响差异不显著 (P >0 .0 5 )。结论 :四物合剂在无毒性剂量时能逆转细胞株K5 6 2 /ADM对ADM的耐药性 ,但对细胞膜Pgp表达影响不大 ,其逆转作用可能与降低Pgp药物外排作用。

黄芪成分F3新制剂对人CCL-229、K562癌细胞的抑制作用

目的 研究黄芪成分F3新制剂对人大肠癌CCL -2 2 9,人红白血病K5 62细胞株的抑制作用。方法 实验分为F3单药组、联合用药组、顺铂组 ,另设空白对照组。应用四氮甲唑蓝 (MTT )实验观察细胞的生存、增殖状态 ;应用细胞形态学、基因组DNA电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 一定浓度范围内的黄芪成分F3新制剂直接用药和联合用药均具有明显的生长抑制作用 ,透射电镜下可见凋亡细胞 ;基因组DNA电泳出现“阶梯状”条带 ;流式细胞仪分析出现低于G1期DNA含量的亚二倍体Apoptosis凋亡峰。 结论 黄芪成分F3新制剂对大肠癌CCL -2 2 9及人红白血病K 5

阿霉素纳米粒对白血病耐药细胞株K562/DOX耐药逆转作用的研究

目的 合成阿霉素聚氰基丙烯酸异丁酯纳米粒 ,观察其对阿霉素耐受性细胞株K5 6 2 (K5 6 2 /DOX)耐药性逆转效果并探讨可能机制。方法 采用乳液聚合法合成纳米粒 ,透射电镜观察计算粒径 ,分光光度法计算包封率 ;以梯度浓度的阿霉素纳米粒处理培养的K5 6 2 /DOX细胞 ,噻唑蓝比色法 (MTT)检测K5 6 2 /DOX细胞的半数生长抑制浓度 (IC50 )并计算逆转倍数 ;流式细胞术检测细胞内药物浓度 ;TUNEL法检测药物诱导后凋亡的发生及凋亡率。结果 阿霉素纳米粒平均粒径 (98 5± 3 7)nm ,包封率为 95 % ;MTT结果显示阿霉素纳米粒对K5 6 2 /DOX细胞的生长抑制率较单纯阿霉素显著增高 ,阿霉素纳米粒对K5 6 2 /DOX的耐药逆转倍数为 6 2 ;TUNEL检测经 10 μg/ml阿霉素纳米粒处理后的K5 6 2 /DOX平均凋亡率为 38 7%。结论 以聚氰基丙烯酸异丁酯纳米粒为载体的阿霉素可增强诱导K5 6 2 /DOX细胞凋亡的效率和有效逆转其耐药性。

反义寡核苷酸对K562细胞的抑制作用及诱导细胞凋亡的研究

目的 :研究bcr abl硫代磷酸反义寡脱氧核糖核酸 (Aspo)作用于K5 62细胞后 ,对细胞mRNA、蛋白水平的影响 ,以及诱导细胞凋亡情况。方法 :Aspo与K5 62细胞共培养后 ,用流式细胞仪检测P2 10蛋白表达及细胞凋亡率 ,RT PCR半定量检测bcr ablmRNA表达情况 ,电镜观察细胞凋亡的形态学改变。结果 :K5 62细胞经浓度大于 5 μmol Lbcr ablAspo处理 2 4h ,流式细胞仪检测细胞P2 10蛋白表达下调甚至完全受抑制 ,10 μmol Lbcr ablAspo作用 48h ,细胞bcr ablmRNA下降 45 %左右 ,当细胞初始浓度为 1× 10 4 ml时 ,Aspo作用 12 0h细胞凋亡率 2 0 %～ 30 % ,当细胞数增加至 1× 10 5 ml时 ,Aspo作用 48h即可使 30 %细胞发生凋亡 ,电镜下观察到典型凋亡细胞形态学改变。结论 :bcr abl反义核酸对K5 62细胞mRNA水平具有抑制作用 。