二烯丙基二硫通过磷酸化Chk1负调控Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路阻滞白血病K562细胞G_(2)/M期

目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病K562细胞周期阻滞及其分子机制。方法:采用CCK-8、细胞计数及流式细胞术观察DADS对K562细胞增殖与周期阻滞效应。Western Blot检测DADS对K562细胞PCNA、Chk1/2以及下游分子Cdc25C、CyclinB1与CDK1表达的影响。结果:CCK-8检测显示,15μmol/L、30μmol/L、60μmol/L、120μmol/L、240μmol/L DADS处理后,呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖,抑制率分别为32.48%、59.34%、66.42%、77.06%、81.05%(P<0.05)。对照组与Tween80组无抑制作用(P>0.05)。细胞计数结果显示,30μmol/L、60μmol/L与120μmol/L DADS处理K562细胞后,群体倍增时间分别为22.71±0.29、36.69±0.93与73.02±0.87呈浓度依赖性增加(P<0.05),而Tween80组与对照组无明显差异(P>0.05)。流式细胞术检测显示,60μmol/L与120μmol/L DADS作用K562细胞24 h与48 h后,G_(2)/M期百分率分别增加到17.6%与28.5%和18.6%与34.4%,较对照组有显著性差异(P<0.05)。60μmol/L DADS作用K562细胞1 h、2 h、4 h、8 h和24 h后,PCNA表达呈时间依赖性表达下调(P<0.05)。p-Chk1表达呈时间依赖性上调(P<0.05),而Chk1、Chk2与p-Chk2表达无明显差异(P>0.05)。并且,Cdc25C、CyclinB1和CDK1分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但是,14-3-3蛋白无明显改变(P>0.05)。结论:DADS可磷酸化Chk1通过Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路抑制K562细胞增殖与阻滞G_(2)/M期。

IL-39在K562细胞中的作用及机制研究

目的:初步探索IL-39在K562细胞中的作用及机制。方法:qRT-PCR检测K562细胞IL-39R及STAT1/STAT3表达;Western blot检测K562细胞磷酸化的STAT1/STAT3及STAT1/STAT3蛋白水平;转录组学测序预测IL-39在K562细胞中调控的mRNA。结果:rIL-39显著促进K562细胞表面IL-39R的表达;IL-39在K562细胞中通过STAT1通路发挥作用;IL-39能够显著调控K562细胞中mRNA的表达,从而影响一系列生物学过程。结论:IL-39能够直接作用于K562细胞,显著改变K562细胞中的基因转录表达,继而通过STAT1通路发挥抗肿瘤效应,提示IL-39可能以相同方式作用于人白血病细胞。

齐墩果酸通过miR-18a-5p/STK4轴抑制白血病K562细胞恶性进展

慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是由于骨髓造血干细胞的恶性增生导致的疾病。虽然酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKI)对慢性粒细胞性白血病的治疗取得长足进展,但耐药问题仍未解决。因此,寻找新的治疗药物和靶点十分关键。有研究表明,miRNAs与慢性粒细胞白血病在内的多种肿瘤有密切联系,齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对白血病细胞有较好的抑制效果。通过对转录物组测序结果发现,齐墩果酸可以显著上调丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶4(serine/threonine-protein kinase 4,STK 4)的水平,而miR1a-5p是STK 4的靶miRNA。因此,本文旨在探究齐墩果酸是否可以通过miR-18a-5p/STK4影响K562细胞恶性进展。K562细胞经齐墩果酸处理后差异表达基因富集在凋亡相关通路上。EdU实验和CCK-8实验结果发现,齐墩果酸降低K562细胞增殖能力(P<0.05)。qRT-PCR,免疫荧光和Western印迹结果显示,齐墩果酸处理后,K562细胞中STK 4蛋白质水平表达显著上调(P<0.05),miR-18a-5p表达下调(P<0.05)。在细胞中转染miR-18a-5p mimics,能显著抑制STK 4的表达(P<0.05);转染miR-18a-5p inhibitor能显著增加STK 4的表达(P<0.05)。活性氧(reactive oxygen species、ROS)检测和线粒体膜电位检测结果显示,齐墩果酸可以促进K562细胞中ROS的增加,降低线粒体膜电位。过表达STK 4后,与Vector组相比,细胞的线粒体膜电位下降;敲降STK 4可以逆转齐墩果酸组导致的线粒体膜电位下降。流式细胞术检测显示,齐墩果酸能明显促进细胞凋亡的发生,而转染miR-18a-5p mimics后凋亡率显著下调(P<0.05);过表达STK 4可以促进细胞从早期凋亡向晚期凋亡转化,而同时转染miR-18a-5p mimics可以抑制这一现象。我们的研究结果证实,齐墩果酸可以通过维持miR-18a-5p的低表达和保持STK 4的高表达状态来促进K562细胞的凋亡。

基于非靶向代谢组学研究三氧化二砷对白血病K562细胞的毒性机制

目的:研究三氧化二砷(As_(2)O_(3))对白血病K562细胞代谢的影响。方法:利用CCK-8法检测As_(2)O_(3)对K562细胞活力的影响;采用超高效液相色谱-质谱技术对As_(2)O_(3)孵育后细胞中的代谢物进行鉴定,筛选出差异代谢物,并进行KEGG富集分析。结果:CCK-8结果显示,As_(2)O_(3)可剂量依赖性地降低K562细胞存活率。非靶向代谢组学检测结果表明,As_(2)O_(3)可导致K562细胞内多种代谢物含量发生显著变化。KEGG富集分析表明,差异代谢物主要富集在谷胱甘肽代谢、铁死亡、亚油酸代谢、牛磺酸代谢、癌症中的胆碱代谢、嘌呤代谢等通路。结论:As_(2)O_(3)可显著降低K562细胞存活率,这可能与影响细胞多种代谢稳态,进而导致细胞增殖抑制、诱导细胞凋亡等有关。此外,As_(2)O_(3)是否会诱导K562细胞发生铁死亡值得深入研究。

钩吻总碱诱导慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的机制分析

目的 探讨钩吻总碱对慢性粒细胞白血病K562细胞的抑杀作用及其机制,为其抗白血病研究提供科学依据。方法 以不同浓度钩吻总碱(25、50、100、200、400μg·mL-1)干预K562细胞,MTT法测定其对K562细胞活力的影响;倒置相差显微镜观察其对K562细胞形态的影响;DAPI染色法观察K562细胞核形态变化;Annexin V FITC/PI流式细胞术检测K562细胞凋亡情况;比色法测定caspase-3活性变化;RT-PCR检测Bax和Bcl-2基因的表达水平。结果 钩吻总碱对K562细胞抑制效果呈时间、剂量依赖性,24 h时IC50为122μg·mL^(-1);TAG干预K562细胞后细胞形态逐渐不规则、胞质不清、胞核皱缩,最终胞膜的完整性破坏;DAPI染色发现细胞体积变小,整体皱缩,胞核固缩、生成典型的凋亡小体;Annexin V FITC/PI流式细胞测定显示K562细胞凋亡以早凋为主,存在量效关系;不同浓度钩吻总碱作用于K562细胞24 h后caspase-3的活性提高;RT-PCR检测发现TAG干预后会下调Bcl-2基因表达、上调Bax基因表达,二者均表现出量效关系。结论 钩吻总碱可能通过上调Bax基因表达、下调Bcl-2基因表达,活化caspase-3,从而诱导慢性粒细胞白血病K562细胞发生早期凋亡,抑制其细胞活力。

塞利尼索联合伊马替尼对K562/G01细胞的增殖及凋亡的影响

目的观察塞利尼索(selinexor,SEL)联合伊马替尼(imatinib,IM)对人慢性髓原白血病细胞耐伊马替尼(K562/G01,KG)细胞株的增殖及凋亡的影响,探索其可能的作用机制。方法分别用IM、SEL单独或联合处理人慢性髓系白血病(K562)细胞株及KG细胞株,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞的BCR-ABL mRNA表达,Western blotting法检测细胞的XPO1蛋白表达。结果IM、SEL均可抑制K562细胞和KG细胞的增殖,作用48 h的半数抑制浓度IC50分别为IM(0.16μmol/L vs.6.48μmol/L),SEL(132.0 nmol/L vs.275.9 nmol/L);SEL联合IM作用于KG细胞,与单用相比,可明显抑制KG细胞的增殖(P<0.05),促进KG细胞的凋亡(P<0.05),降低KG细胞BCR-ABL mRNA(P<0.05),抑制KG细胞XPO1的表达(P<0.05)。结论SEL联合IM可协同抑制KG细胞的增殖并诱导其凋亡,进而抑制BCR-ABL mRNA和XPO1蛋白的表达,发挥抗白血病作用。

MicroRNA-141-5p/ABCG1逆转慢性粒细胞白血病K562细胞对伊马替尼的耐药性

目的探究miR-141-5p在慢性粒细胞白血病(CML)的作用机制及其对甲磺酸伊马替尼(IM)耐药性的影响。方法qRT-PCR检测IM耐药和敏感患者miR-141-5p mRNA水平;Western blot法分别检测K562和K562/G01细胞转染前后MMP-3、MMP-9、Bcl-2等蛋白的表达情况;CCK-8检测K562和K562/G01细胞活性;荧光素酶实验检测miR-141-5p与ABCG1的结合情况;裸鼠成瘤验证miR-141-5p在体内对肿瘤的影响。结果miR-141-5p在IM耐药的CML患者和K562/G01细胞中下调,且miR-141-5p的过表达可以抑制IM耐药CML细胞的生长并促进其凋亡。对荷瘤小鼠的研究表明,miR-141-5p在体内抑制肿瘤生长。miR-141-5p可以直接靶向作用于IM耐药CML细胞中的ABCG1调控CML发生。结论miR-141-5p和ABCG1形成竞争性内源性RNA(ceRNA)网络,在IM耐药性中发挥作用,从而抑制CML的进展。

牛蒡子苷元对白血病K562/A02细胞耐药性的逆转作用及机制

目的:研究牛蒡子苷元对白血病耐药细胞株K562/A02阿霉素耐药性的影响及其作用机制。方法:体外培养人白血病细胞株K562及阿霉素耐药细胞株K562/A02,使用2.5-50μmol/L阿霉素处理,CCK-8检测细胞生长情况并计算药物半数抑制浓度(IC_(50))。采用不同浓度的牛蒡子苷元(1、2、4、8、16 mmol/L)处理K562/A02细胞,检测牛蒡子苷元对K562/A02细胞的影响,筛选适用浓度用于后续实验。在2 mmol/L牛蒡子苷元处理的K562/A02细胞中加入5μmol/L阿霉素,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测P-gp、MRP、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2以及TLR4/NF-κB信号通路蛋白的表达。在牛蒡子苷元和阿霉素共处理的K562/A02细胞中转染TLR4过表达质粒,检测细胞的药物敏感性和凋亡水平。结果:阿霉素对K562/A02细胞的IC_(50)为36.57μmol/L,高于K562细胞(1.30μmol/L)。当牛蒡子苷元浓度≤2 mmol/L时,K562/A02的细胞生长不会受到明显抑制。经2 mmol/L的牛蒡子苷元处理后,阿霉素对K562/A02细胞的IC_(50)明显降低。与对照组相比,牛蒡子苷元组K562/A02细胞凋亡率明显上升,cleaved caspase-3、Bax蛋白的表达明显上调,P-gp、MRP、Bcl-2、TLR4、My D88和p-NF-κB蛋白的表达明显下调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。在转染TLR4过表达质粒后,牛蒡子苷元处理的K562/A02细胞对阿霉素的敏感性明显降低(P<0.05),细胞凋亡下降,并显著提升了P-gp、MRP、Bcl-2和TLR4/NF-κB信号通路蛋白的表达(P<0.05),同时降低了cleaved caspase-3和Bax蛋白的表达(P<0.05)。结论:牛蒡子苷元可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路从而逆转人白血病耐药细胞株K562/A02对阿霉素的耐药性。

DDX5对白血病K562细胞生物学功能的影响及其机制

目的探讨DDX5解螺旋酶对白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡和分化的影响。方法利用癌症基因数据库GEPIA中的数据分析DDX5 mRNA在白血病患者组织中的表达;生存曲线分析DDX5 mRNA表达水平与白血病患者预后关系;采用小干扰RNA(siRNA)瞬时转染K562细胞以敲低DDX5;使用实时荧光定量(RT-PCR)检测沉默效果;采用Western blot检测蛋白表达水平;采用CCK-8实验检查细胞增殖能力、采用Western blot和免疫荧光检测细胞增殖相关蛋白的表达水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用流式细胞术和Western blot检测细胞分化相关蛋白的表达水平。最后,通过RT-PCR和Western blot检测沉默DDX5对P21和P53蛋白表达水平的影响。结果GEPIA数据库分析结果显示DDX5在人白血病骨髓组织中的表达水平显著高于健康人群,低表达DDX5的患者具有更长的生存期。体外实验表明敲低DDX5可显著抑制K562细胞的增殖,流式细胞术检测结果表明可以促进细胞凋亡、促进CD11b和CD14蛋白的表达诱导细胞分化。沉默DDX5促进P21和P53蛋白的表达水平。结论DDX5可能通过靶向P53抑制白血病细胞系K562细胞增殖,促进凋亡诱导分化。

Proteomics Study of Benzene Metabolite Hydroquinone Induced Hematotoxicity in K562 Cells

Objective Hydroquinone(HQ),one of the phenolic metabolites of benzene,is widely recognized as an important participant in benzene-induced hematotoxicity.However,there are few relevant proteomics in HQ-induced hematotoxicity and the mechanism hasn’t been fully understood yet.Methods In this study,we treated K562 cells with 40μmol/L HQ for 72 h,examined and validated protein expression changes by Label-free proteomic analysis and Parallel reaction monitoring(PRM),and performed bioinformatics analysis to identify interaction networks.Results One hundred and eighty-seven upregulated differentially expressed proteins(DEPs)and 279 downregulated DEPs were identified in HQ-exposed K562 cells,which were involved in neutrophilmediated immunity,blood microparticle,and other GO terms,as well as the lysosome,metabolic,cell cycle,and cellular senescence-related pathways.Focusing on the 23 DEGs and 5 DEPs in erythroid differentiation-related pathways,we constructed the network of protein interactions and determined 6 DEPs(STAT1,STAT3,CASP3,KIT,STAT5B,and VEGFA)as main hub proteins with the most interactions,among which STATs made a central impact and may be potential biomarkers of HQ-induced hematotoxicity.Conclusion Our work reinforced the use of proteomics and bioinformatic approaches to advance knowledge on molecular mechanisms of HQ-induced hematotoxicity at the protein level and provide a valuable basis for further clarification.

GSDME在DADS诱导白血病K562细胞焦亡中的作用研究

目的:研究DADS(Diallyl disulfide, DADS)诱导K562细胞焦亡(pyroptosis)及其分子机制。方法:Western Blot检测Kasumi、K562、THP-1、HL-60、NB4细胞的Gasdermin家族蛋白E(Gasdermin E, GSDME)、Gasdermin家族蛋白D(Gasdermin D,GSDMD);甲基特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)法检测K562及NB4细胞GSDME基因启动子检测区甲基化情况;CCK-8检测DADS对K562细胞增殖活力的影响;Western Blot、LDH释放实验检测DADS处理K562细胞后GSDME、GSDME-N、IL-1β、Cleaved IL-1β蛋白表达水平及乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase, LDH)释放量变化;慢病毒转染技术构建GSDME敲低的稳转K562细胞株;Western Blot检测下调GSDME对DADS处理K562细胞GSDME-N端蛋白表达水平的影响。结果:Kasumi、K562、THP-1、HL-60、NB4中GSDME、GSDMD的蛋白表达水平存在差异;NB4细胞的GSDME基因启动子检测区甲基化扩增出阳性条带,而非甲基化扩增为阴性;K562细胞GSDME基因启动子检测区甲基化未能扩增出阳性条带,而非甲基化扩增为阳性;DADS处理后K562细胞的LDH释放量、GSDME-N、Cleaved-IL-1β蛋白均显著升高(P<0.01);与NC组相比,敲低组的K562细胞中mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);DADS处理后,NC组的GSDME-N蛋白水平明显上升(P<0.001),QD组GSDME-N蛋白的水平无显著差异(P>0.05);与NC-DADS组相比,经过DADS处理的QD组GSDME-N蛋白水平明显下降(P<0.001)。结论:DADS诱导K562细胞发生细胞焦亡,其分子机制可能与GSDME介导的焦亡通路有关。

白花蛇舌草诱导活性氧类物质抑制慢性髓系白血病K562细胞增殖

目的探讨白花蛇舌草(HDW)诱导活性氧类物质对慢性髓系白血病(CML)K562细胞增殖的影响。方法流式细胞法检测HDW作用下K562细胞内活性氧(ROS)水平。将K562细胞分为对照组、HDW组、N-乙酰-L-半胱氨酸组(NAC组)和HDW+NAC组,观察各组细胞ROS、活力、形态、增殖和细胞周期分布情况,Western blotting法检测细胞周期相关蛋白和磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化丝氨酸苏氨酸激酶(p-Akt)蛋白表达情况。结果HDW能提高K562细胞内ROS水平(P<0.05)。对照组、NAC组细胞含大量拒染细胞且形态无明显变化,HDW组、HDW+NAC组拒染细胞减少,着色细胞增多,有染色质聚集和细胞核膜崩解现象。与对照组相比,HDW组细胞内ROS、G1期占比、p21和p53蛋白表达升高,S期占比和细胞周期素D1、细胞周期素依赖蛋白激酶4、p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0.05);NAC干预能部分逆转HDW作用效果(P<0.05)。结论HDW能诱导活性氧类物质升高来降低K562细胞增殖能力,与细胞周期阻滞、调节PI3K/Akt通路活性有关。

苦参碱对K562细胞增殖及凋亡相关分子表达的影响

目的 研究苦参碱对人白血病细胞K562增殖、凋亡的影响及其机制。方法 苦参碱（0．2 mg/ml）作用于K562细胞，每日计数白细胞、计算抑制率；流式细胞分析仪检测苦参碱对K562细胞周期的改变及凋亡的影响；电子显微镜观察凋亡细胞形态；Western blot检测BCL-6及增殖细胞核抗原（PCNA）表达情况。结果 苦参碱对K562细胞有明显的抑制作用，用药72 h的细胞增殖抑制率达69%；用药5 d后，G1期细胞明显增多，高达58．5%，68%的细胞发生凋亡。电子显微镜可观察到苦参碱诱导的早、中、晚期K562凋亡细胞；BCL-6表达增强，PCNA表达下降。结论 苦参碱能显著抑制K562细胞增殖、促进其凋亡，其机制可能与细胞增殖周期受阻及PCNA表达下降、BCL-6表达增加有关。

苦参碱对K562细胞蛋白酪氨酸激酶及磷酸酶活性的影响

背景与目的:一定浓度的苦参碱能诱导K562细胞分化,本研究拟初步探讨其诱导分化的信号转导机制。方法:运用链亲和素-生物素放大系统结合的酶联免疫法,动态检测苦参碱作用于K562细胞后,K562细胞膜相及胞浆内的蛋白酪氨酸激酶和磷酸酶活性的变化。结果:苦参碱能抑制K562细胞内的蛋白酪氨酸激酶活性,在<0.1mg/ml的浓度范围内,抑制作用具有浓度依赖性。不同浓度的苦参碱对蛋白酪氨酸磷酸酶活性的影响无显著性差异。0.1mg/ml的苦参碱作用K562细胞后,伴随蛋白酪氨酸激酶的活性变化,蛋白酪氨酸磷酸酶的活性也有一个短暂的下降。结论:在苦参碱诱导K562细胞分化的过程中,涉及到蛋白酪氨酸激酶的活性改变。膜相中蛋白酪氨酸激酶的活性改变先于胞浆内的改变,提示有一个信号的跨膜转运过程。同时伴有蛋白酪氨酸磷酸酶的活性变化,反映了胞内的蛋白酪氨酸残基磷酸化与去磷酸化的即时调节机制。苦参碱对蛋白酪氨酸激酶活性的抑制作用具有特异性与饱和性的特点,还提示有相应的受体存在。

苦参碱诱导K562白血病细胞分化和凋亡的实验研究

研究苦参碱的抗肿瘤作用。方法 :以人红白血病细胞株K562为研究对象,通过形态学观察和细胞化学染色了解不同浓度的苦参碱对肿瘤细胞的诱导分化作用,并利用程序性细胞死亡检测试剂盒检测肿瘤细胞凋亡的情况。结果 :0 1g/L苦参碱能够诱导K562白血病细胞分化,形态学上类似中幼红和晚幼红细胞,联苯胺染色阳性率由1 %～2 %上升至7 %,细胞化学染色显示糖原由阴性转为强阳性且阳性率为100 %;1 0g/L苦参碱作用24h,30 %的K562细胞可出现明显的空泡,并有凋亡小体出现,末端标记法也检测到凋亡的出现。结论 :0 1g/L苦参碱能够诱导肿瘤细胞的分化,1

人参多糖对K562细胞增殖抑制及诱导分化的实验研究

目的 研究人参多糖(GPS)对人白血病细胞株(K562)增殖抑制及诱导分化的影响。方法 采用细胞体外培 养技术,MTT法检测细胞增殖抑制,光镜和电镜观察细胞形态变化;联苯胺(Benzidine)、糖原染色(PAS)、过氧化物酶 (POX)、非特异性脂酶(α- NAE)细胞化学染色分别检测K562细胞向红系、粒系、巨核系分化的特征;免疫细胞化学检测细胞 表面分化抗原及因子表达(CD14、CD15、HIR2、EPO、GM CSF);FAS及FAS L等检测细胞凋亡情况。结果 GPS对K562细胞 的增殖有明显抑制作用并能诱导K562细胞向红系或粒系细胞分化,表现为:①K562细胞的增殖受到抑制;②K562细胞形 态学上可见细胞体积缩小,核直径减小,核仁减少或消失,核染色质浓缩,胞浆丰富,核浆比例降低,可见中晚期粒、红系细 胞;③K562细胞血红蛋白(Hb)、糖原、α- NAE的表达明显增加,而过氧化物酶(POX)的表达与对照无显著性差异;④细胞表 面分化抗原CD15、HIR2、EPO、GM CSF的表达明显增强,CD14的表达与对照无显著性差异;⑤细胞凋亡明显增加。结论 人 参多糖(GPS)能明显抑制K562细胞增殖并能诱导其凋亡并使K562细胞向成熟方向分化。

氨基葡糖及其盐酸盐诱导白血病细胞K562向巨噬细胞样分化

目的 研究氨基葡萄糖及其盐酸盐对白血病细胞K5 6 2的诱导分化效果。方法 利用hexamethylenebisac etamide (HMBA)、氨基葡萄糖及其盐酸盐 ,分别用不同浓度对白血病K5 6 2细胞进行诱导分化实验 ,通过联苯胺、萘酚AS D氯醋酸酯酶及吉姆萨 瑞氏染色、电镜观察和流式细胞仪证实其分化方向。结果 氨基葡萄糖及其盐酸盐对K5 6 2细胞在 0 5mmol·L-1浓度作用 2d后有良好的诱导分化效果 ,诱导K5 6 2向巨噬细胞分化并能使K5 6 2细胞周期阻滞于G0 /G1期 ,与HMBA相比 ,氨基葡萄糖和盐酸盐在作用浓度和作用时间上都有明显优势。结论 氨基葡萄糖及其盐酸盐都可能成为新的高效。

半枝莲提取物诱导白血病K562细胞凋亡

目的 :探讨中药半枝莲诱导人类慢性髓性白血病K5 6 2细胞株的凋亡作用。方法 :采用MTT法检测半枝莲乙醇提取物对K5 6 2细胞的增殖抑制作用 ;HT荧光染色观察细胞形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳测定凋亡细胞DNA的片段化 ;caspase 3单克隆抗体检测半枝莲提取物作用后K5 6 2细胞内caspase 3的表达。结果 :半枝莲提取物能明显抑制K5 6 2细胞增殖 ,使K5 6 2细胞出现凋亡所具有的形态学及生物化学特征 ,同时对K5 6 2细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用具有一定的浓度依赖性 ,经半枝莲提取物作用后的K5 6 2细胞内caspase 3表达增加。结论 :中药半枝莲提取物能诱导K5 6 2细胞凋亡 ,抑制肿瘤细胞增殖呈一定的浓度依赖关系 ,其作用机制可能与caspase 3的表达升高和活化有关。

细胞因子诱导的杀伤细胞可诱导bcr-abl阳性的K562细胞凋亡

表达bcr abl的K5 6 2细胞能抵抗不同化疗药物诱导的细胞凋亡 ,为了观察细胞因子诱导的杀伤 (CIK)细胞能否诱导表达bcr abl的K5 6 2细胞凋亡 ,应用流式细胞术DNA亚G1期分析法比较了CIK和化疗药物 (喜树碱和VP 16 )诱导K5 6 2及CEM细胞发生凋亡的情况。结果表明 ,RT PCR检测显示K5 6 2细胞表达bcr abl融合基因mRNA ,单独K5 6 2细胞对照组、K5 6 2 /喜树碱组及K5 6 2 /VP 16组均未见亚G1期峰 ,K5 6 2 /CIK组亚G1期峰值为38.1% ;单独CEM细胞对照组未见亚G1期峰 ,CEM /喜树碱组亚G1期峰值为 2 3.5 % ,CEM /VP 16组亚G1期峰值为 32 .3% ,CEM/CIK组亚G1期峰值为 4 5 .4 %。结论 :喜树碱和VP 16不能诱导表达bcr abl的K5 6 2细胞凋亡 ,而CIK细胞能诱导K5 6 2细胞凋亡 。

中药复方君子汤联合环孢霉素A逆转白血病细胞株K562/VCR耐药性的实验研究

本研究观察中药复方君子汤(FFJZ)联合环孢霉素A(cyclosporine A,CsA)逆转白血病耐药细胞系K562/VCR细胞耐药性的效果,以便寻找有效的联合逆转剂。采用MTT法、流式细胞术研究FFJZ联合CsA逆转白血病耐药细胞系K562/VCR耐药性的作用。结果表明:FFJZ联合CsA在体外对K562/VCR细胞的耐药性有明显的逆转作用(p<0.01),能提高K562/VCR细胞对阿霉素(ADM)的敏感性,且在药物有效浓度范围内对细胞本身无毒性作用。FFJZ联合CsA对K562/VCR细胞的P-gp表达的阳性率无明显影响。结论:复方君子汤联合环孢霉素A可能成为治疗白血病多药耐药的安全有效的耐药逆转药物。