塞利尼索联合伊马替尼对K562/G01细胞的增殖及凋亡的影响

目的观察塞利尼索(selinexor,SEL)联合伊马替尼(imatinib,IM)对人慢性髓原白血病细胞耐伊马替尼(K562/G01,KG)细胞株的增殖及凋亡的影响,探索其可能的作用机制。方法分别用IM、SEL单独或联合处理人慢性髓系白血病(K562)细胞株及KG细胞株,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞的BCR-ABL mRNA表达,Western blotting法检测细胞的XPO1蛋白表达。结果IM、SEL均可抑制K562细胞和KG细胞的增殖,作用48 h的半数抑制浓度IC50分别为IM(0.16μmol/L vs.6.48μmol/L),SEL(132.0 nmol/L vs.275.9 nmol/L);SEL联合IM作用于KG细胞,与单用相比,可明显抑制KG细胞的增殖(P<0.05),促进KG细胞的凋亡(P<0.05),降低KG细胞BCR-ABL mRNA(P<0.05),抑制KG细胞XPO1的表达(P<0.05)。结论SEL联合IM可协同抑制KG细胞的增殖并诱导其凋亡,进而抑制BCR-ABL mRNA和XPO1蛋白的表达,发挥抗白血病作用。

吲哚美辛显著增强伊马替尼对KCL22和K562/G01细胞的增殖抑制作用

目的:研究吲哚美辛联合伊马替尼对KCL22和K562/G01细胞增殖的抑制作用,并从Wnt/β-Catenin信号通路角度探讨其抗增殖作用的分子机制。方法:采用MTT法明确吲哚美辛在各细胞中的最佳作用浓度及时间;采用MTT法和甲基纤维素集落形成实验检测伊马替尼、吲哚美辛以及两者联合对各细胞增殖能力的影响;采用流式细胞术鉴定细胞周期及细胞凋亡的变化;Western blot检测经两种药物处理的细胞内pβ-catenin(S33/37/T41)、p GSK-3β(Ser9)和C-M YC蛋白的表达情况。结果:吲哚美辛抑制细胞增殖的最佳作用浓度和时间分别为80μmol/L和48 h;吲哚美辛联合伊马替尼对细胞的增殖抑制作用明显优于单一药物处理;在KCL22和K562/G01细胞株中联合用药组的细胞周期均被阻制在G0/G1期;联合用药组的细胞凋亡数目明显高于单一药物处理组;与对照组或单一药物处理组相比,联合用药组细胞内pβ-catenin、β-catenin、p GSK-3β(Ser9)和C-MYC蛋白表达明显下调。结论:吲哚美辛可显著增强伊马替尼对KCL22和K562/G01细胞的增殖抑制作用和诱导细胞凋亡,并通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路调控细胞的增殖。

高三尖杉酯碱联合伊马替尼对K562/G01细胞的作用及机制研究

目的:探索高三尖杉酯碱(Homoharringtonine,HHT)联合伊马替尼(Imatinib,IM)对K562/G01细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:应用CCK-8法检测HHT联合IM对K562/G01细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率及磷酸化酪氨酸水平,Western blot检测P210及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达水平。结果:HHT联合IM与单药相比,对K562/G01细胞的增殖活性具有明显抑制作用(P<0.05),细胞的凋亡率显著增加(P<0.05);HHT与IM联合可显著抑制K562/G01细胞内的p-Tyr及p-Crkl的表达水平,并能使p210蛋白及其下游通路蛋白P13K和p-Akt的表达水平明显降低。结论:HHT联合IM可协同抑制K562/G01细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制p210蛋白表达及其激酶活性有关。

雷公藤内酯醇对伊马替尼耐药的K562/G01细胞增殖抑制及诱导凋亡作用的研究

本研究旨在探讨雷公藤内酯醇对K562/G01细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的影响及其可能的机制。MTT法检测伊马替尼、雷公藤内酯醇单药及联合用药对K562/G01增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡率和P-gp蛋白表达的变化;Western blot分析P-gp蛋白的表达情况;实时荧光定量PCR检测BCR/ABL基因的表达。结果表明:雷公藤内酯醇能增强伊马替尼对K562/G01细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用;雷公藤内酯醇能将细胞阻滞在G1期,下调P-gp蛋白和BCR/ABL基因表达。结论:雷公藤内酯醇对K562/G01细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与细胞周期的G1期阻滞、降低P-gp蛋白表达和抑制BCR/ABL基因表达有关。

设计合成新的大黄素衍生物对慢性髓系白血病细胞株K562及K562/G01的作用

目的:研究设计合成新的大黄素衍生物E19对慢性髓系白血病细胞株K562及耐伊马替尼的K562细胞株K562/G01的增殖、凋亡的影响,探讨其作用的机制。方法:采用MTT比色法、细胞集落形成实验观察E19对K562、K562/G01细胞增殖的影响;应用DAPI染色法和DNA片段化检E19诱导细胞凋亡的作用;Western blot检测E19作用后不同时间段p210^(Ber-Abl)和p-P210^(Bcr-Abl)蛋白的变化。结果:大黄素衍生物E19对K562和K562/G01细胞有明显的抑制增殖、诱导凋亡的作用,K562细胞48 h半数抑制浓度(IC_(50))为(1.20±0.19)μmol/L,K562/G01细胞48 h IC_(50)为(1.22±0.16)μmol/L;DNA片段化检测证实,E19对细胞抑制作用呈量效关系;E19作用于细胞后,P210^(Bcr-Abl)和p-P210^(Bcr-Abl)表达水平均有不同程度下调,并呈量效和时效关系。结论:大黄素衍生物E19能有效抑制K562和K562/G01细胞的增殖并诱导它们凋亡,而P210^(Bcr-Abl)和p-P210^(Bcr-Abl)的活化受抑制在其中发挥重要的作用。

汉防己甲素联合伊马替尼对K562/G01细胞诱导凋亡作用及其相关机制

本研究探讨伊马替尼(imatinib,IM)和汉防己甲素(tetrandrine,Tet)单用和联合应用对K562/G01细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。应用MTT法检测IM和Tet单用及联合用药对细胞增殖抑制的作用,用流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡率,用实时荧光定量PCR检测caspase-3、BCL-2 mRNA的表达,应用Western blot分析caspase-3、BCL-2蛋白的表达情况。结果表明,1.0μmol/L IM和/或1.5μmol/L Tet单用及联合作用于K562/G01细胞48 h后,对细胞增殖的抑制率分别是(22.74±0.05)%、(20.34±0.57)%、(44.28±0.60)%,两药联合应用较单药抑制作用明显。流式细胞术检测显示,Tet作用后细胞向G1/S期转化;Tet 1.5μmol/L、3μmol/L与1.0μmol/L IM联合应用48 h的早期凋亡率分别为(7.81±0.16)%、(14.10±0.28)%,诱导凋亡作用比单药组明显增加。FQ-PCR和Western blot检测均显示单独应用Tet和IM后caspase-3表达上调,BCL-2表达下调,联合用药组作用更显著。结论:单独应用Tet对K562/G01细胞有诱导凋亡的作用,两药联合应用具有明显的协同效应,且具有时间和剂量依赖性,其机制可能与上调caspase-3 mRNA及其蛋白表达和下调BCL-2 mRNA及其蛋白的表达有关。

BCR-ABL SH3-T79Y突变体重组腺病毒载体的构建及促进白血病K562/G01细胞凋亡

目的探讨构建BCR-ABL SH3-T79Y突变体(简称SH3-T79Y突变体)的重组腺病毒载体及其对白血病耐药细胞株K562/G01细胞凋亡的影响。方法以p Mig210质粒为模板,用重叠延伸PCR扩增SH3-T79Y突变体片段,将其克隆入重组腺病毒载体,通过鉴定、包装、扩增后得到含SH3-T79Y突变体的重组腺病毒。将重组腺病毒感染白血病K562/G01细胞株,测定其感染效率,瑞氏染色检查细胞形态学,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测BCR-ABL、Crk L磷酸化及总蛋白水平。结果重组腺病毒载体构建成功。SH3-T79Y突变体转染K562/G01细胞株72 h效率大于80%,可见明显的凋亡小体、核聚集等凋亡现象,凋亡率为32.46%,较对照组显著增加(P<0.05);明显抑制BCR-ABL和Crk L的磷酸化水平,降低BCR-ABL总蛋白表达(P<0.05)。结论成功构建SH3-T79Y突变体重组腺病毒载体,并证实其通过抑制BCR-ABL及底物Crk L磷酸化水平促进K562/G01细胞凋亡。

雷公藤甲素通过MDM2-p53通路诱导白血病K562／G01细胞凋亡的研究

目的探讨雷公藤甲素（TP）诱导伊马替尼耐药的K562／G01细胞的凋亡作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTr）法测定不同浓度TP作用的K562／G01细胞增殖抑制情况，流式细胞术检测细胞凋亡率，实时荧光定量PCR法检测bcr-abl、XIAP、MDM2、p53等mRNA的表达。结果10、20、40、80、100nmol／LTP作用12、24、48h，K562／G01细胞增殖受到抑制，呈时间．剂量依赖性；20、40nmol／LTP分别作用K562／G01细胞12h和24h，细胞凋亡率呈时间．剂量依赖性；TP能降低ber-abl、XIAP、MDM2mRNA的表达，升高p53mRNA的表达。结论TP可抑制K562／G01细胞增殖，诱导凋亡，其机制可能是通过XIAP．MDM2-p53通路相关基因的表达影响K562／G01细胞的增殖及凋亡。

硼替佐米对伊马替尼耐药细胞系K562／G01药物敏感性的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对伊马替尼耐药细胞系（K562／G01）药物敏感性的影响及作用机制。方法采用MTT法观察伊马替尼单用与联用硼替佐米对K562／G01细胞增殖的影响。流式细胞技术检测细胞周期的变化。实时荧光定量PCR检测COX-2、多药耐药（mdrl）基因的表达。结果联合10、20nmoL／L硼替佐米能明显增强K562／G01细胞的伊马替尼药物敏感性，逆转倍数分别为1．83、2．72倍，进一步计算表明两药联合具有协同作用。流式细胞技术检测显示硼替佐米作用后细胞周期向G2／M期转化。实时荧光定量PCR检测显示K562／G01细胞高表达的COX-2和mdrl基因，硼替佐米作用后均表达下调。结论硼替佐米能增强K562／G01细胞对伊马替尼的敏感性，其机制可能与细胞周期的G2／M期阻滞，抑制COX-2和mdrl的表达有关。

硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562/G01增殖抑制和诱导凋亡作用的

目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米（BOR）对慢性粒细胞白血病（CML）伊马替尼耐药细胞株K562/C01的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 采用MTT法观察细胞的生长抑制效应;流式细胞术（FCM）榆测细胞周期与凋亡.结果 K562/C01细胞埘伊马替尼不敏感,伊马替尼对K562/C01和K562细胞的IC50分别是（20.09±1.38）、（0.54±0.13）μmol/L;BOR对K562/C01细胞具有增殖抑制作用,并于48h时作用效果达高峰,IC50（23.10±2.71）nmol/L,随着BOR浓度和作用时间的增加,FCM检测可见G2/M期细胞周期阻滞及明显的凋亡峰.结论 BOR对CML伊马替尼耐药细胞株具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制可能与细胞周期G2/M期的阻滞有关.

重组腺病毒AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP对耐伊马替尼的K562/G01细胞增殖的影响

研究表达融合蛋白SH2-Caspase8的重组腺病毒AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP对耐伊马替尼的BCR/ABL阳性的慢性粒细胞白血病(CML)K562/G01细胞增殖的影响。荧光显微镜观察病毒感染效率,Western blot检测融合蛋白的表达情况,MTT和细胞计数检测细胞的生长情况,流式细胞仪分析细胞增殖周期,甲基纤维素克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力。结果显示,荧光显微镜观察病毒感染效率高,Western blot能检测到目的蛋白的表达,MTT和细胞计数检测可见,与对照组相比AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP能显著抑制细胞的生长;流式周期检测发现,AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP组G1期细胞比例增加,S期和G2期细胞比例减少;克隆形成实验可见,AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP能显著抑制细胞克隆的形成。综上所述,重组腺病毒AdE-SH2-Caspase8-HA-GFP表达的SH2-Caspase8融合蛋白能明显抑制耐伊马替尼的K562/G01细胞的增殖。

异硫氰酸苯己酯对K562／G01细胞伊马替尼耐药性的影响

目的体外观察异硫氰酸苯己酯（PHI）对人慢性髓性白血病细胞株K562／G01细胞伊马替尼耐药性的影响，探讨其可能的机制。方法采用MTT法检测不同浓度的PHI和伊马替尼单独或联合处理对K562／G01细胞增殖的抑制作用。流式细胞术检测不同浓度的PHI和（或）伊马替尼作用下K562／G01细胞的凋亡率。Westernblot检测PHI处理K562／G01细胞后P—gP、P210^bcr-abl蛋白、磷酸化P210^bcr-abl蛋白（p-P210^bcr-abl）表达水平的变化。结果PHI单独处理24h可抑制K562／G01细胞增殖，诱导细胞凋亡。PHI浓度由0增至40Ixmol／L，细胞增殖抑制率由0增至（51．22-4-1．41）％，凋亡率由（3．764-1．46）％增至（35．354-3．70）％。浓度分别为10、20、40txmol／L的PHI与不同浓度伊马替尼联合处理后，伊马替尼的IC50分别为（10．494-1．24）、（6．334-1．42）、（0．854-0．17）μmoL／L。PHI20txmol／L和浓度为10、20Ixmol／L的伊马替尼分别共同作用24h后，K562／G01细胞凋亡率分别为（43．624-4．23）％和（55．414-4．35）％，较单用伊马替尼组及单用PHI组均明显升高。PHI浓度由0增至40txmol／L分别作用7h后，K562／G01细胞P210^bcr-abl／β-actin比值由0．9444-0．034降至0．392±0．025，p-P210^bcr-abl／β-actin比值由0．9064-0．019降至0．3614-0．021，但P—gP表达无明显变化。结论PHI能抑制K562／G01细胞增殖，诱导细胞凋亡。PHI与伊马替尼联合有协同作用，可部分逆转细胞对伊马替尼的耐药，其机制可能与抑制P210^bcr-abl和p-P210^bcr-abl蛋白表达有关。

ABL SH3-T79Y突变体联合伊马替尼对慢性粒细胞白血病细胞增殖的影响

目的分析慢性粒细胞白血病(CML)BCR-ABL蛋白的SH3结构域突变体(ABL SH3-T79Y)联合伊马替尼(IM)在体内外对CML细胞增殖的影响,并初步探讨其发挥作用的机制。方法构建重组腺病毒载体SH3-T79Y突变体,将其联合IM处理K562/G01细胞后,采用克隆形成实验检测细胞克隆形成率,流式细胞术检测细胞周期,分析K562/G01细胞体外增殖能力的变化。SH3-T79Y联合IM处理KCL22细胞,构建BALB/c裸鼠皮下实体瘤模型,计算皮下瘤形成率,摘取瘤体进行病理学检查,分析KCL22细胞体内增殖能力的变化。SH3-T79Y联合IM处理K562/G01细胞后,采用Western blotting检测p-BCR-ABL、BCR-ABL、p-Crk L、Crk L、Cyclin D1蛋白的表达水平,分析联合作用影响CML细胞增殖的机制。实验中以PBS、腺病毒空载体及IM单独处理细胞作为对照。结果相较于三个对照组,SH3-T79Y联合IM处理K562/G01细胞后,细胞克隆形成率(28.74%±6.64%)明显降低(P<0.05),细胞周期阻滞于S期。联合处理KCL22细胞后,KCL22-BALB/c裸鼠皮下实体瘤模型成瘤率为16.7%,明显低于IM单独处理组(33.3%)和PBS对照组(100%),瘤体病理学检查见大量增殖的瘤细胞;Western blotting检测结果显示联合处理后K562/G01细胞p-BCR-ABL、p-Crk L、BCRABL、Crk L及Cyclin D1的表达均降低。结论 SH3-T79Y联合IM通过抑制BCR-ABL、Crk L磷酸化和降低Cyclin D1表达,在体内、体外发挥了抑制CML细胞增殖的效应。

雷公藤甲素诱导K562/G01细胞凋亡的线粒体机制研究

目的 探讨雷公藤甲素（TP）诱导慢性粒细胞白血病（CML） K562/G01细胞凋亡的线粒体可能机制.方法 用不同浓度的TP作用于K562/G01细胞,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各实验组的细胞毒性作用,用流式细胞术检测各实验组细胞的凋亡率、线粒体膜电位及Caspase-9活性,用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测Caspase-9及细胞色素C的mRNA水平,用Western blot检测细胞色素C的蛋白水平.结果 TP对K562/G01细胞的生长增殖均有抑制作用,呈时间-剂量依赖性（均P＜ 0.001）.同时TP可以使细胞的线粒体膜电位消退、使Caspase-9的活性增高（均P＜ 0.001）,TP上调Caspase-9和细胞色素C的转录水平（均P＜0.001）及细胞色素C的蛋白表达水平（0、10、20、40、80 nmol/LTP作用48 h后,细胞色素C对应条带灰度值分别为10.54±0.75、21.54±0.59、39.63±0.58、53.29±1.47、75.68±1.87,均P＜ 0.001）,且上述作用均呈明显的剂量依赖性.结论 雷公藤甲素可以有效抑制K562/G01细胞生长增殖,而线粒体凋亡途径很可能是TP促进CML细胞凋亡的多途径之一.