MAP3K7CL基因在鹅肥肝形成中的表达及功能研究

免疫标记基因(如TNF-α)和内质网应激标记基因(如GRP78)在鹅肥肝形成中的表达受到抑制,而MAP3 K7CL基因与鹅肝细胞中的GRP78表达呈负相关,且参与免疫和信号传导,提示该基因可能参与鹅肥肝的形成。为探究MAP3 K7CL基因在鹅肥肝形成中的表达规律及功能,选取24只70日龄朗德公鹅,随机分为对照组和填饲组(各12只),填饲组包括填饲12和24d 2个阶段。采用qPCR技术测定MAP3 K7CL基因在不同填饲阶段朗德鹅肝脏组织中的表达水平,探究葡萄糖、胰岛素、油酸、棕榈酸等不同因子对鹅原代肝细胞中MAP3 K7CL表达的影响以及MAP3 K7CL过表达对其下游基因的影响。结果表明:与对照组相比,填饲极显著诱导肝脏中MAP3 K7CL基因表达;在鹅原代肝细胞中,葡萄糖、胰岛素和棕榈酸显著抑制MAP3 K7CL基因的表达,而油酸显著诱导MAP3 K7CL基因表达;MAP3 K7CL基因过表达后显著上调其下游的MAF1基因,显著下调EP300基因表达并有上调NDUFS3基因表达的趋势,且这些基因表达的变化模式与鹅肥肝中的情况一致。综合而言,鹅肥肝中油酸升高可能是诱导MAP3 K7CL基因表达的重要因素;而MAP3 K7CL基因可能通过影响EP300、MAF1和NDUFS3等基因的表达参与鹅肥肝的形成,与氧化还原反应、糖类脂肪蛋白质代谢以及免疫和防御反应等生物学过程有关。

内质网应激标记基因Grp78参与鹅肥肝免疫/炎症状态的调控

旨在揭示内质网应激(ERS)标记基因Grp78是否参与鹅肥肝中炎症/免疫相关基因的表达调控。本试验选择健康的、体重相近的70日龄朗德鹅30只(未分公母),随机分为对照组(n=15)和填饲组(n=15)。利用荧光定量PCR测定不同填饲阶段(填饲7、14、19 d)不同组织中Grp78的相对表达量(n=4),以明晰Grp78与鹅肥肝形成的关联;在鹅原代肝细胞中过表达Grp78,并通过RNA-seq分析Grp78所影响的信号通路和基因(n=3);利用荧光定量PCR检测鹅肥肝中与炎症/免疫相关的基因表达量(n=4),以明晰这些基因与Grp78的关联。结果表明,肝和腹脂中Grp78的表达量受填饲影响(肝中下降,而腹脂中上升)。Grp78基因的过表达试验表明,ERS除了可影响已知的代谢病和细胞凋亡通路外,还影响信号转导、免疫等通路。在免疫/炎症方面,"Toll-like receptor signaling pathway"、"TNFαsignaling pathway"、"NF-kappa B signaling pathway"等通路最为突出。此外,免疫/炎症相关基因Tnfsf10、Map3k7cl在鹅原代细胞中的表达受Grp78过表达影响,在鹅肥肝中受填饲影响。总之,本研究揭示了Grp78/ERS新的生物学功能,即对细胞的免疫/炎症状态进行调控,并借此参与鹅肥肝的形成。