检验用大肠杆菌K88纤毛抗原的纯化及其单因子血清制备与质量控制方法研究

为研究兽用生物制品检验用大肠杆菌K88纤毛抗原的纯化及其单因子血清制备与质量控制方法。通过生物反应器发酵含K88抗原的大肠杆菌,机械脱纤处理获得K88纤毛抗原,经柠檬酸等电点沉淀和饱和硫酸铵梯度盐析以及透析处理纯化抗原,免疫家兔3次制备单因子血清并进行质量控制。结果显示,所纯化的K88纤毛抗原纯度能达到85%,每升发酵菌液可得到提纯抗原33.3 mg,免疫家兔血清琼扩效价可达到1∶128。表明该纤毛抗原制备和纯化及其单因子血清制备方法简易,纯度和产率较高,质量可控且易于批量制备。

大肠杆菌K_(88)纤毛抗原的提纯和抗血清的制备

以5%绵羊血改良M inca琼脂筛选和克隆表达良好的K88+菌株,改良M inca琼脂培养获得K88菌液。用加热法及高速匀浆法使K88纤毛从菌体上脱下。饱和硫酸铵沉淀粗提,用Sepha-rose CL-4B凝胶过滤纯化K88抗原。提纯的抗原经SDS-PAGE电泳测定其分子量约为25 000,且仅此一条蛋白带;与K88抗血清进行琼脂扩散试验只出现一条沉淀线。用提纯的抗原经多次免疫家兔制备了K88抗血清。抗血清在玻板凝集试验中只凝集K88菌株,不凝集K99,987P或F41菌株;在琼扩试验中,只与K88粗提抗原出现一条沉淀线,且效价为1∶64,而不与K99,987P抗原出现沉淀线;在免疫电泳试验中,与无细胞K88纤毛液只出现一条沉淀线。鉴定结果表明,所制备的K88血清特异性强、效价高,可作为单因子血清用于凝集试验、琼扩试验等血清学试验,对K88菌株进行鉴定,对K88纤毛抗原进行定性和定量检测。