双价工程菌K_(88)K_(99)表达蛋白提取方法的探讨及抗原性分析

本研究应用酸脱毛法 ,将供试工程菌培养物进行脱毛、提取制备表达蛋白 ,并对酸脱毛法的最适pH值、最佳温度、最佳时间进行了探讨 ,SDS_PAGE分析结果证明 ,酸脱毛法脱毛pH值为 2、脱毛温度为 6 0℃、脱毛时间为 30分钟时 ,表达蛋白分离提取的效果最佳。对提取蛋白进行琼扩 ,SDS_PAGE、Western_blot分析 ,结果表明所提取蛋白具有较高的抗原活性 ,并能被K88K99单克隆抗体所识别。

MM3工程菌K88抗原的纯化

将MM3工程菌表达的K88纤毛抗原通过脱毛、硫酸铵沉淀处理后 ,经SephacrylS 10 0一步柱色谱纯化 ,K88抗原纯度达 97%以上 。