仔猪黄痢K88-K99-987p-F41多价菌毛混合油乳剂灭活疫苗的制备及小鼠免疫保护试验

根据我国仔猪大肠杆菌性腹泻流行的实际情况 ,用产菌毛粘附因子的野生分离菌株HN2 0 0 1(K88ab)、HN2 0 0 2 (K88ac)、HN2 0 0 3(K88ad)、HN2 0 0 4 (K99)、C83915 (987p)及C836 2 1(F4 1)提取菌毛制成 5批多价菌毛混合油乳剂灭活苗 ,5批多价灭活疫苗对小鼠的平均保护率达 95 0 % (38 4 0 )。

仔猪黄痢K88-K99-987p-F41多价菌毛疫苗的制备及小鼠免疫试验

为了更好地预防仔猪黄痢,选取野生分离菌株HN2001(K88ab)、HN2002(K88ac)、HN2003(K 88ad)、HN2004(K 99)、HN2005(987p)和HN2006(F41)培养后用低温磁力搅拌法提取菌毛,制成5批多价菌毛混合油乳剂灭活苗。试验结果表明,5批多价灭活疫苗对小鼠的平均保护率达95.0%,为进一步进行本体动物试验提供了有价值的参考资料。

K_(88)、K_(99)、987P基因工程三价苗的免疫效力试验

对六个批次的K_(88)、K_(99)、987P基因工程三价苗作免疫效力测定。第一次试验,对用三个批次基因工程三价苗被动免疫(通过初乳)的仔猪,以三种强毒菌进行攻击,死亡率上均获得100%保护,黄痢腹泻发病率上获得98%保护;而对照仔猪,对三种强毒菌的攻击,发病率均达100%,死亡率分别是K_(88)为96%、K_(99)为72.7%、987P为80%,平均83.3%。第二试验的另外三个批次的基因工程三价苗的被动免疫(通过初乳)仔猪,虽然三种强毒菌的攻击剂量各增加三分之一,但保护率仍达到与第一次试验一致的结果;而对照仔猪,黄痢腹泻发病率均达100%,死亡率分别为K_(88)100%、K_(99)95%、987P91%,平均95%。

K88、K99、987P基因工程三价苗野外应用效果的初步观察

对K_(88)、K_(99)、987P基因工程三价苗野外应用效果观察是通过对几个猪场的纵向比较,邻圈间、棚舍间、猪场间横向平行比较和被动免疫仔猪的接触感染三种方式进行的。通过8个猪场的纵向比较,结果发病率减少11～46.4个百分点,平均减少25.4个百分点;死亡率减少7.6～29.1个百分点,平均减少21.4个百分点。应用基因工程三价苗后,这些场发病率控制在5％左右,死亡率控制在1％左右。横向平行比较结果,邻圈间、棚舍间免疫组发病率减少约40个百分点,死亡率减少约25个百分点。免疫场与对照场间比较,发病率分别减少54个和36个百分点,死亡率分别减少54个和28个百分点。接触感染结果,被动免疫仔猪无一头发病,也无死亡,而寄奶母猪亲生仔猪则发病率100％,死亡率98％。

猪K_(88)、K_(99)、987P、F_(41)埃希氏大肠杆菌高密度发酵培养技术的初步探讨

采用高密度发酵和普通深层通气两种方法培养含K88、K99、987P、F41菌毛抗原的四株猪埃希氏大肠杆菌,对其培养液进行活菌数、OD值、pH值、效价的测定。实验结果表明,运用高密度发酵方法培养,各菌活菌数可达4.1×1010~4.9×1010CFU/mL,效价为211~213;运用普通深层通气方法培养,各菌活菌数为0.51×1010~0.59×1010CFU/mL,效价为24~25,可选择高密度发酵方法替代普通深层通气方法培养,用于制备猪埃希氏大肠杆菌K88、K99、987P、F41四价菌毛提纯苗。

4种方法预防仔猪黄、白痢试验效果观察

通过A、B、C、D4种方法对仔猪黄、白痢进行预防,结果表明:B、C、D3组比A组发病率分别减少51.73、61.33和64.81个百分点,死亡率分别降低8.91、14.13和18.26个百分点,差异极显著(P<0.01);B组仔猪平均断奶重高于A组10.69%,差异显著(P<0.05);C、D两组仔猪平均断奶重分别高于A组20.68%、21.24%,差异极显著(P<0.01);C、D两组的发病率均极显著地低于B组(P<0.01),C组死亡率比B组减少5.22个百分点,差异显著(P<0.05),D组死亡率比B组减少9.35个百分点,差异极显著(P<0.01);C、D两组仔猪平均断奶重高于B组9.02%、9.53%,差异均显著(P﹤0.05);D组的发病率、死亡率均显著低于C组(P﹤0.05),D组仔猪平均断奶重高于C组0.47%,但差异不显著(P﹥0.05);另外预防和治疗费用B、C、D3组分别比A组低1.04、0.71、0.64元/头,其中以B组费用最低,仅为0.09元/头。

大肠埃希氏菌表面菌毛黏附因子多价菌毛疫苗的研制

为了预防仔猪黄痢,选取ETEC野生分离菌株HN2001(K88ab)、HN2002(K88ac)、HN2003(K88ad)、HN2004(K99)、HN2005(987p)、HN2006(F41)培养后用低温磁力搅拌法提取到菌毛,制成5批多价菌毛混合油乳剂灭活苗,实验室试验结果表明,5批多价灭活疫苗对小白鼠的平均保护率达95.0%,为进一步进行田间试验提供了理论依据,并将为生产上防治仔猪黄痢提供一种保护范围更加全面的生物制品。

适用于蛋鸡免疫的猪源ETEC菌毛蛋白佐剂的筛选

为筛选卵黄抗体的优良佐剂,以3株猪源致病性大肠杆菌(ETEC)菌毛蛋白为模式抗原,分别与6种佐剂制备多价菌毛蛋白疫苗,免疫海兰褐壳蛋鸡。结果显示,3次免疫后,所有试验组蛋鸡产蛋率均有不同程度下降,但SPA、ISCOMs、弗氏佐剂、蜂胶佐剂组的产蛋率下降程度较为轻微;对鸡体血清抗体和制备获得的卵黄抗体的效价检测结果均显示:SPA和ISCOMs组虽较SPB、SPC、弗氏佐剂组抗体水平略低,但持久度较好,且通过对蛋鸡外观形态和注射部位组织变化情况的观察显示,两者不会刺激鸡体热反应或炎症反应,无任何表观副作用。因此,更适合作为蛋鸡制备猪源ETEC卵黄抗体的优良佐剂。