K88K99大肠杆菌苗对仔猪黄痢预防试验

仔猪黄痢是新生仔猪的一种急性致死性传染病。于生后1—5天内拉黄色稀水样便和急性死亡为特征。1970年我场已有发生,十多年来时起时伏,春秋均有发病,多少不一。此病对我场猪群危害大,我们曾做过防治对比试验但未能彻底解决问题。1987年秋季和88年春季我们应用中科院上海生物工程实验基地研制的K88K99黄痢菌苗,对我场健康母猪进行了免疫试验,取得满意效果。免疫母猪新生的437头仔猪其保护率为98.4％,而未免疫母猪新生349头仔猪其发病率为25.6％,二者差异显著。现将试验结果报告如下。

新生猪腹泻大肠杆菌K88K99双价基因工程疫苗

中国农科院哈尔滨兽医研究所的科研人员利用现代基因工程技术手段,人工构建出非产肠毒素性且具有K88 K99两种保护性抗原的大肠杆菌菌株,通过接种于适宜培养基发酵高密度培养,成功试制出了新生猪腹泻大肠杆菌K88

双价工程菌K_(88)K_(99)表达蛋白提取方法的探讨及抗原性分析

本研究应用酸脱毛法 ,将供试工程菌培养物进行脱毛、提取制备表达蛋白 ,并对酸脱毛法的最适pH值、最佳温度、最佳时间进行了探讨 ,SDS_PAGE分析结果证明 ,酸脱毛法脱毛pH值为 2、脱毛温度为 6 0℃、脱毛时间为 30分钟时 ,表达蛋白分离提取的效果最佳。对提取蛋白进行琼扩 ,SDS_PAGE、Western_blot分析 ,结果表明所提取蛋白具有较高的抗原活性 ,并能被K88K99单克隆抗体所识别。

基因工程大肠杆菌发酵的研究

基因工程菌的发酵工艺研究在生物高技术产业化的发展中具有重要的意义。研究结果表明，每１０Ｌ发酵液可得１～２ｋｇ湿菌体，发酵时间从一般的２４～３０ｈ缩短到６～８ｈ，５Ｌ、１５Ｌ、１５０Ｌ发酵罐都可得重复性的结果。这项发酵工艺研究不仅适用于Ｅ．ｃｏｌｉ各种不同类型的表达启动子的工程菌，也适用于野生菌株疫苗等的生产，将对我国基因工程产业化起重要作用。

K_(88)K_(99)工程菌基因质粒在动物体内外扩散性试验

K88K99双价基因工程菌,是一株人工构建的无肠毒素基因、丧失了病原性但仍保留产生 K88、K99两种保护性抗原基因的菌株,它具有优良的免疫原性和相当良好的安全性、稳定性,具备用于制备无毒活菌苗的良好条件。因此。

适用于蛋鸡免疫的猪源ETEC菌毛蛋白佐剂的筛选

为筛选卵黄抗体的优良佐剂,以3株猪源致病性大肠杆菌(ETEC)菌毛蛋白为模式抗原,分别与6种佐剂制备多价菌毛蛋白疫苗,免疫海兰褐壳蛋鸡。结果显示,3次免疫后,所有试验组蛋鸡产蛋率均有不同程度下降,但SPA、ISCOMs、弗氏佐剂、蜂胶佐剂组的产蛋率下降程度较为轻微;对鸡体血清抗体和制备获得的卵黄抗体的效价检测结果均显示:SPA和ISCOMs组虽较SPB、SPC、弗氏佐剂组抗体水平略低,但持久度较好,且通过对蛋鸡外观形态和注射部位组织变化情况的观察显示,两者不会刺激鸡体热反应或炎症反应,无任何表观副作用。因此,更适合作为蛋鸡制备猪源ETEC卵黄抗体的优良佐剂。

猪K_(88)、K_(99)、987P、F_(41)埃希氏大肠杆菌高密度发酵培养技术的初步探讨

采用高密度发酵和普通深层通气两种方法培养含K88、K99、987P、F41菌毛抗原的四株猪埃希氏大肠杆菌,对其培养液进行活菌数、OD值、pH值、效价的测定。实验结果表明,运用高密度发酵方法培养,各菌活菌数可达4.1×1010~4.9×1010CFU/mL,效价为211~213;运用普通深层通气方法培养,各菌活菌数为0.51×1010~0.59×1010CFU/mL,效价为24~25,可选择高密度发酵方法替代普通深层通气方法培养,用于制备猪埃希氏大肠杆菌K88、K99、987P、F41四价菌毛提纯苗。