产肠毒素性大肠杆菌K99菌毛蛋白抗原基因的克隆与表达

应用 PCR从产肠毒素性大肠杆菌 ( ETEC)中扩增出不含信号肽序列的 K99菌毛蛋白基因片段 ,克隆测序后 ,将该片段连接到 E.coli表达载体 p ET2 8a( + )中 ,转化 E.coli表达菌株 BL2 1 ( DE3) ,筛选得到可诱导表达 K99抗原的工程菌株。经 IPTG诱导 ,分离纯化 K99重组蛋白 ,以其免疫新西兰大白兔 ,获得重组蛋白的兔抗血清 ;免疫印迹分析表明 ,此重组蛋白制备的抗血清能与标准的

K88菌毛蛋白亚基基因克隆、表达及重组蛋白抗血清制备

利用 PCR技术 ,从仔猪黄痢的致病菌中扩增出不含信号肽序列的 K88菌毛蛋白亚基基因片段 ,将其克隆到 E.coli表达载体 p ET2 8a(+)中 ,构建了该基因的原核表达载体 p882 8,导入 E.coli BL 2 1(DE3) ,得到工程菌株。 SDS- PAGE分析结果显示 ,经 IPTG诱导 ,该亚基基因高效表达出重组 K88菌毛蛋白 ,约占菌体总蛋白的 30 %。用含重组蛋白的凝胶作为抗原 ,免疫新西兰大白兔 ,首次制备 K88菌毛蛋白亚基的抗血清。免疫学分析表明 。

大肠杆菌K88ac、K99和987P纤毛抗原的纯化及抗血清的制备

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是新生畜(仔猪、羔羊和犊牛)腹泻的主要病因之一,其致病因子包括纤毛抗原和肠毒素。我们参照国外学者De Graaf和Isaacson等人的方法分别纯化了K88ac、K99和987P三种纤毛抗原并制备出三种高特异性抗血清。纯化用K88菌株C83549(0149:K91,K88ac),K99菌株C83644(0101:K99),987P菌株C83710(020:987P)均由中国兽医药品监察所提供。K88菌用改良Minca培养基,K99菌用Minca培养基,987P用胰酶水解大豆酪蛋白胨肉汤培养基。

大肠杆菌K_(88)、K_(99)、(987)~P纤毛抗原提纯及抗血清制备

采用加热法和盐析法对大肠杆菌K8B、K99、^987P纤毛抗原进行了提取、纯化，并通过SDS—PAGE凝胶电泳对提纯效果进行了检验。