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题名KANSL1蛋白的真核表达纯化及功能验证
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作者
温开清
李婷
张亚昆
韩秋影
赵洁
潘欣
李腾
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机构
军事科学院军事医学研究院生物医学分析中心
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出处
《军事医学》
CAS
北大核心
2019年第11期846-850,共5页
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基金
国家自然科学基金面上项目(31871390)
国家自然科学基金优秀青年科学基金项目(81922051).
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文摘
目的利用昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac)表达KANSL1蛋白并进行纯化,同时验证该蛋白在体外对微管蛋白聚合的影响。方法构建真核表达载体pFast-Bac-HTB-mCherry-KANSL1,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭质粒(Bacmid),用脂质体转染介导Bacmid进入草地贪夜蛾细胞(Sf9 cell),以产生可表达目的基因的重组杆状病毒。随后用此重组杆状病毒感染并扩增Sf9细胞使其大量表达His-mCherry-KANSL1融合蛋白。通过镍柱亲和层析对表达的His-mCherry-KANSL1融合蛋白进行初步纯化,再经快速蛋白液相色谱(FPLC)进一步纯化,利用Western印迹、考马斯亮蓝染色鉴定目的蛋白的表达纯化效果,最后通过体外微管聚合实验分析纯化的KANSL1蛋白对微管蛋白聚合的影响。结果质粒测序显示,pFast-Bac-HTB-mCherry-KANSL1真核表达质粒构建成功;考马斯亮蓝染色、Western印迹表明纯化得到正确的His-mCherry-KANSL1蛋白,体外微管聚合实验显示KANSL1蛋白显著促进微管蛋白的聚合。结论成功构建pFast-Bac-HTB-mCherry-KANSL1真核表达质粒并在真核表达系统中表达和纯化,重组KANSL1蛋白具有促进微管聚合的作用,为后续KANSL1蛋白功能研究奠定了基础。
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关键词
kansl1
杆状病毒表达系统
载体构建
真核表达
蛋白纯化
快速蛋白液相色谱
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Keywords
kansl1
baculovirus expression system
vector construction
eukaryotic expression
protein purification
fast protein liquid chromatography
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分类号
R346
[医药卫生—基础医学]
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题名17q21.31微重复综合征临床特征分析
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作者
郑小兰
林彩梅
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机构
复旦大学附属儿科医院厦门分院神经内科
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出处
《医学理论与实践》
2020年第18期2968-2971,2985,共5页
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文摘
目的:总结17q21.31微重复综合征临床表型特点和探讨潜在的致病基因,提高临床医师对该病认识水平。方法:我院1例以“喂养困难伴生长发育迟缓”为主诉患儿通过低深度全基因组测序诊断17q21.31微重复综合征,并通过数据库以“17q21.31”等搜索词搜索相关文献,总结病例特点。结果:(1)本组患儿低深度全基因组测序(CNV-seq)结果发现17q21.31(Chr17:41373316-44470000)发生约3.1Mb杂合性重复。(2)通过文献搜索,国内尚未见报道,国外至今共报道8个病例。17q21.31微重复综合征常见的临床特征包括精神运动发育迟缓(9/9)、鼻子异常(7/9)、眼睛异常(6/9)、外耳发育畸形(5/9)、小头畸形(5/9)、手指异常(6/9)、语言表达能力差(5/9)、社会交往差(5/9)、运动技能差(4/9)、行为问题(5/9)、肌张力低(4/9)、过度运动(4/9)、多毛(4/9)、超重、肥胖(4/9)。MAPT、KANSL1、CRHR1等基因是8个病例共同包含的基因。结论:17q21.31微重复综合征国内外鲜见报道,行为问题和社会交往障碍是比较特征性的表现,精神运动发育迟缓、小颅畸形、面部畸形是普遍存在的,CRHR1、MAPT、KANSL1基因重复编码可能与疾病表型相关。
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关键词
17q21.31微重复
行为
CRHR1基因
MAPT基因
kansl1基因
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Keywords
17q21.31 microduplication
Behavior
CRHR1 gene
MAPT gene
kansl1 gene
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分类号
R725.9
[医药卫生—儿科]
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