KAT8通过增强METTL3表达促进结直肠癌细胞系增殖

目的探究赖氨酸乙酰转移酶8(KAT8)在结直肠癌细胞增殖过程中所扮演的角色及潜在作用机制。方法通过TCGA数据库的RNA-seq数据分析KAT8在结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织的表达情况;集落形成实验和CCK8法检测KAT8敲低细胞的增殖;利用GEO数据库对KAT8敲低细胞与对照细胞的差异基因进行分析,并进一步进行功能通路富集分析;利用cBioPortal网站分析结直肠癌数据库中KAT8与调控N6-甲基腺苷(m6A)相关基因的相关性;Western blot检测KAT8和METTL3的蛋白表达。结果与人正常结直肠组织相比,KAT8在结直肠癌中高表达(P<0.05);敲低或选择性抑制KAT8抑制结直肠癌细胞系增殖(P<0.05);敲低KAT8降低结直肠癌细胞总RNA的m6A修饰水平(P<0.05);敲低KAT8抑制METTL3的表达(P<0.05);过表达METTL3能够逆转敲低KAT8抑制的细胞增殖(P<0.05)。结论KAT8通过增强METTL3介导的m6A修饰进而促进结直肠癌细胞系的增殖。

牦牛KAT8基因在组织及卵泡发育过程中的表达

探究组蛋白乙酰化酶8(KAT8)在牦牛卵泡发育及卵母细胞成熟过程中的表达规律,为深入探讨KAT8在雌性牦牛生殖过程中的作用机制提供参考。采集3~5周岁成年未妊娠母牦牛卵巢,分离培养出生发泡时期(GV)、第1次减数分裂中期(MⅠ)和第2次分裂中期(MⅡ)的卵母细胞,分别提取上述3个时期卵母细胞总RNA,反转录获得cDNA。以卵巢cDNA为模板,采用分段扩增方法,利用RT-PCR技术克隆牦牛KAT8基因编码区(CDS)序列,运用相关生物信息学分析软件预测KAT8编码蛋白的结构功能。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测KAT8 mRNA在牦牛卵巢、肾脏、胃、小肠、肌肉、心脏、子宫、脾脏、肺脏和肝脏组织及GV、MⅠ、MⅡ期卵母细胞中的相对表达量,采用免疫组织化学技术分析KAT8在牦牛卵泡发育不同时期的表达定位。结果显示,克隆出牦牛1938 bp KAT8基因,其中CDS区全长为1377 bp,共编码458个氨基酸。物种进化树结果表明,牦牛与黄牛、野牛、绵羊及山羊的核苷酸序列同源性较高,分别为99.64%,99.27%,98.33%,98.04%。KAT8在牦牛各组织中广谱表达,肌肉、心脏和卵巢中的表达量相对较高,极显著高于其他7个组织(P<0.01),其中肌肉和心脏中的相对表达量显著高于卵巢组织(P<0.05)。免疫组织化学检测发现,KAT8在各发育阶段的牦牛卵泡中均有表达,主要定位于卵母细胞及颗粒细胞,卵泡膜细胞中表达相对较少。在卵母细胞减数分裂过程中,KAT8表达水平呈下降趋势,GV期卵母细胞KAT8 mRNA表达量相对较高,但与MⅠ和MⅡ期均无显著性差异(P>0.05)。KAT8基因在遗传进化过程中高度保守,并在牦牛卵泡发育及卵母细胞减数分裂进程中呈现动态表达模式,提示KAT8参与卵泡发育及卵母细胞减数分裂成熟过程。