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KATP通道E23K突变对阿霉素诱导的细胞凋亡的影响
1
作者
刘剑芳
王梦龙
+6 位作者
叶晶
徐瑶
王震
姜慧敏
叶迪
赵生娣
万军
《医学研究杂志》
2018年第2期28-31,共4页
目的研究ATP敏感性钾通道Kir6.2亚基E23K突变对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 (1)在心肌组织中提取总RNA,RT-PCR法获取c DNA,合成特异性引物,用PCR法获得kir6.2、SUR2A的ORF片段,用T4DNA连接酶将上述片段与线性化的p EGFP-C1连...
目的研究ATP敏感性钾通道Kir6.2亚基E23K突变对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 (1)在心肌组织中提取总RNA,RT-PCR法获取c DNA,合成特异性引物,用PCR法获得kir6.2、SUR2A的ORF片段,用T4DNA连接酶将上述片段与线性化的p EGFP-C1连接,重组的p EGFP-C1/kir6.2用PCR法进行E23K定点突变,获得真核表达质粒p EGFP C1/kir6.2,p EGFP C1/kir6.2(E23K)及p EGFP C1/SUR2A。(2)重组质粒采用脂质体法瞬时共转染H9C2细胞,使其在H9C2细胞中表达。(3)生理盐水与1mg/L阿霉素(Adriamycin,ADR)分别处理转染后细胞,分为4组:A组为野生型重组质粒+生理盐水处理组(WT+NS);B组为含E23K突变重组质粒+生理盐水处理组(E23K+NS);C组为野生型重组质粒+阿霉素损伤组(WT+ADR);D组为含E23K突变重组质粒+阿霉素损伤组(E23K+ADR)。(4)采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI)。(5)Western blot法测定caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。Alpha Ease FC软件取值读取各样品条带灰度值。结果 (1)TUNEL结果示,应用ADR后凋亡比例升高,与WT+ADR组相比,E23K+ADR组凋亡比例更高(P<0.05)。(2)阿霉素处理后,所有组促凋亡相关蛋白(caspase-3、Bax)表达均增高,抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达降低,且E23K+ADR组caspase-3与Bax蛋白表达均大于WT+ADR组,Bcl-2蛋白表达低于WT+ADR组(P<0.05)。结论 K_(ATP)通道kir6.2亚基E23K突变加重阿霉素诱导的细胞凋亡。
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关键词
katp通道e23k突变细胞凋亡
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题名
KATP通道E23K突变对阿霉素诱导的细胞凋亡的影响
1
作者
刘剑芳
王梦龙
叶晶
徐瑶
王震
姜慧敏
叶迪
赵生娣
万军
机构
武汉大学人民医院心血管内科、武汉大学心血管病研究所、心血管病湖北省重点实验室
武汉市普仁医院心内科
出处
《医学研究杂志》
2018年第2期28-31,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(81170208)
文摘
目的研究ATP敏感性钾通道Kir6.2亚基E23K突变对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 (1)在心肌组织中提取总RNA,RT-PCR法获取c DNA,合成特异性引物,用PCR法获得kir6.2、SUR2A的ORF片段,用T4DNA连接酶将上述片段与线性化的p EGFP-C1连接,重组的p EGFP-C1/kir6.2用PCR法进行E23K定点突变,获得真核表达质粒p EGFP C1/kir6.2,p EGFP C1/kir6.2(E23K)及p EGFP C1/SUR2A。(2)重组质粒采用脂质体法瞬时共转染H9C2细胞,使其在H9C2细胞中表达。(3)生理盐水与1mg/L阿霉素(Adriamycin,ADR)分别处理转染后细胞,分为4组:A组为野生型重组质粒+生理盐水处理组(WT+NS);B组为含E23K突变重组质粒+生理盐水处理组(E23K+NS);C组为野生型重组质粒+阿霉素损伤组(WT+ADR);D组为含E23K突变重组质粒+阿霉素损伤组(E23K+ADR)。(4)采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI)。(5)Western blot法测定caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。Alpha Ease FC软件取值读取各样品条带灰度值。结果 (1)TUNEL结果示,应用ADR后凋亡比例升高,与WT+ADR组相比,E23K+ADR组凋亡比例更高(P<0.05)。(2)阿霉素处理后,所有组促凋亡相关蛋白(caspase-3、Bax)表达均增高,抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达降低,且E23K+ADR组caspase-3与Bax蛋白表达均大于WT+ADR组,Bcl-2蛋白表达低于WT+ADR组(P<0.05)。结论 K_(ATP)通道kir6.2亚基E23K突变加重阿霉素诱导的细胞凋亡。
关键词
katp通道e23k突变细胞凋亡
Keywords
katp
chann
e
l
e
23
k
mutation
Apoptosis
分类号
R542.2 [医药卫生—心血管疾病]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
KATP通道E23K突变对阿霉素诱导的细胞凋亡的影响
刘剑芳
王梦龙
叶晶
徐瑶
王震
姜慧敏
叶迪
赵生娣
万军
《医学研究杂志》
2018
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